红细胞悬液配制、abo、rh血型鉴定讲稿

红细胞悬液配制、abo、rh血型鉴定讲稿 实验一 红细胞悬液配制、ABO、Rh血型鉴定 一、红细胞悬液配制: 【实验目的】 掌握5 %红细胞悬液配制的方法 【实验原理】 用一定量的生理盐水稀释红细胞达到一定浓度。因为在抗原与抗体特异性结合中遵循一定的量比关系，只有两者比例适当才会出现最佳反应结果。 【器材】试管、吸管、离心机 【试剂】生理盐水 【标本】抗凝全血 【实验步骤】 1. 抗凝全血2ml(0.2 ml枸橼酸钠 + 1.8 ml血)，2500 r/m 离心5min，分离出血浆至一干净试管。 2. 剩余红细胞加NS约5ml，混匀，2500 r/min，离心3 min，弃上清。重复操作3次，末次离心5 min，得到压积红细胞。 3. 配制不同浓度的红细胞悬液 悬浮RBC浓度 20% 10% 5% 2% 1% 压积RBC(滴d) 1d 1d 1d 1d 1d NS 0.2ml(4d) 0.4ml(8d) 0.8ml(16d) 2ml(40d) 4ml(80d) 悬浮RBC浓度 3% 2% 1% 10%RBC悬液 1d 1d 1d NS (滴) 约3(d) 4(d) 9 (d) 二、ABO血型鉴定 【实验目的】掌握ABO血型正、反定型的基本操作方法及结果判定 【实验原理】 已知血型特异性的抗体试剂鉴定红细胞的抗原[正定型、红细胞定型]，同时用已知血型的试剂红细胞鉴定血清中的抗体[反定型、血清定型]，根据正反定型结果判定血型。 【实验仪器与试剂】 1(滴管、洁净小试管、记号笔、离心机、显微镜等。 2(试剂 单克隆或多克隆的抗A;单克隆或多克隆的抗B;抗A，B; 2,,5,的A型、B型和O型红细胞生理盐水悬液。 【实验步骤】 1(正定型(红细胞定型) (1) 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，抗A，B(可选)，用滴管分别加入抗A、 抗B和抗A，B定型试剂各l滴于试管，再分别加入受检者的2,,5,红细胞盐水 悬液1滴，轻摇混合。 (2) 以3000rpm(900到1000×g)离心15s。 (3) 轻摇试管使细胞扣悬起观察有无凝集及溶血现象并记录正定型结果。 2(反定型(血清定型) (1) 取洁净小试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管， ,,5,A(、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。 再分别加入2 (2) 以3000rpm(900到1000×g)离心15s。 (3) 轻摇试管使细胞扣重悬后观察有无凝集及溶血现象并记录反定型结果。 【实验结果】 ABO血型判定应综合正反定型结果，判断方法见。 抗A血清 抗B血清 A细胞 B细胞 O细胞 血型 + - - + - A - + + - - B - - + + - O + + - - - AB 【注意事项】 1(观察结果时若试管中出现溶血现象(须排除外源性溶血的干扰)，表明存在抗原抗体 反应并激活了补体，应视为阳性结果。 2(在记录血型结果之前必须要解释任何AB0血型鉴定出现正、反定型不一致情况。 ABO血型鉴定正、反定型不一致情况既有技术问题，也有标本红细胞或血清本身的 问题，初步的处理程序主要有以下一些。 (1) 相同的血液样本重复ABO血型鉴定一次，排除检测技术操作上可能的干扰。如果 初始的鉴定试验中红细胞悬液为血清或血浆，重复试验中红细胞应改为生理盐水 多次洗涤后红细胞，以消除因为血浆蛋白或自身抗体引起的干扰。 (2) 重新采集一管血液样本鉴定。当ABO血型不一致出现在当前试验结果与历史检测 记录不一致或怀疑标本交叉污染时，需要重新采集标本进行鉴定。 (3) 查阅患者病史评估可能出现改变或干扰ABO血型鉴定的患者疾病状态，包括:? 医学诊断;?历史血型结果;?输血史;?移植史。 (4) 评价自身对照和意外抗体筛选等血清学试验来评估因自身抗体或同种抗体引起的 潜在干扰。 三、RhD血型鉴定 【实验目的】掌握RhD血型鉴定操作方法及结果判定 【实验原理】 用单克隆抗D混合血清(IgM+IgG类)试剂通过凝集反应对红细胞上RhD抗原进行鉴定。 【实验仪器与试剂】 1(滴管、洁净小试管、离心机等。 2(试剂 单克隆抗D (IgM+IgG类)混合血清试剂、2,,5,D阳性和阴性红细胞生理盐 水悬液等。 【实验步骤】 1( 在3支分别标记为受检样本、阳性和阴性对照的洁净小试管中各加入1滴抗D (1gM+IgG类)混合试剂。 2(各支试管中分别加入1滴2,,5,的受检红细胞盐水悬液、D阳性对照红细胞和D 阴性对照红细胞盐水悬液。 3(混匀，1000 rpm离心15,30s (或遵照试剂厂家的要求)。 4(轻摇试管使红细胞扣重悬，肉眼观察有无凝集现象。 【实验结果】 阴性对照管无凝集，阳性对照管有凝集;若被检标本管出现凝集则为Rh阳性，反之为 阴性。 【方法评价与注意事项】 1(操作中一般先加入抗D试剂再加入受检红细胞悬液，这样可以通过视觉判断以免出 现漏加抗D试剂导致的假阴性结果。 2(Rh血型系统的抗体多由免疫刺激(输血或妊娠)产生，故一般不需做反定型实验。Rh 定型主要鉴定D抗原，定型时应按抗D血清试剂的使用说明进行，并注意必须要有 严格的对照试验，包括抗原的阴、阳性对照以及试剂对照试验。 3(某些弱D抗原需通过抗球蛋白实验、吸收放散试验或基因分型等技术才能检出。