眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系

眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系 眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量 效关系 市劲松.等.脐血输注对恶性肿瘤患者化疗的辅助治疗作用?639? 参考文献 1沈柏均,隋星卫,张洪泉,等主编.人类脐血基础与临床 天津:天津科学技术出版社t1994,1o3,104 2GluckmanE,Broxme)~rHE,AuerbachAD,el a1.haematopoieficreconstitutioninaatientwith Fanconi'sanemiabynleansofElmbillca[cordbloodfrom 广西医科大学1999Oct;16(5) ;一} anHLAidenticalsiblingNEng[JMed.1989321 (17)1174 3魏绪山,王歧山.李梅生等.脐血输注对82例癌症患者 化疗或放疗的辅助作用陕西医学杂志t】996.85(2): 87,88 4候俊卿,候激流,段玉龙.等.脐血在晚期恶性肿瑚化疗 中的应用临床血液学杂志t1995,8(2);75,76 眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系 , 班建东蓝秀万舒雨雁——…一 一 一 (广西医科大学蛇毒研究所南宁530021). ,19,? 摘要目的:探讨眼镜蛇毒因子与中性白细胞吞噬功能的量效关系.方法:蛇毒抗补体因子(CVF)的分离,纯化及活力测 定分别参照舒雨雁和Takahachi等报道的方法,中性白细胞吞噬功能的测定参照张明安的方法.结果:眼镜蛇毒中分离纯化 的抗补体因子相对分子质量为225~230ku,抗补体活力为81.96U/mg,五个不同剂量CVF对豚鼠中性白细胞吞噬率均有不 同的下降结论:CVF消脒补体后t使豚鼠中性白细胞的体外吞噬功能下降t并存在一定的量效关系 关键词望堂韭童垦;皇丝宣堕薏鲤量墼薹系. 中图图书资料分类法分类号R996?3 中华眼镜蛇毒(ChineseCobravenc~n,Najanajaatra venom)中的蛇毒抗朴体因子(Cobrav~nomfactortCVF或 CobraAnticomplementaryFactor,CAF)具有特异性抗朴体 Ca生物活性,其相对分子质量为225,230ku…,主要通过消 耗血浆中补体C的含量,降低体液免疫功能,用CVF去障 补体后可抑制T细胞依赖性或T细胞不依赖性抗原所弓I起 的体液免疫反应]有报告指出,用CVF去除豚鼠补体后, 可造成中性白细胞内颗粒增加,体外吞噬功能下降率文 拟用不同剂量的CVF对中性白细胞吞噬功能下降的量效芙 系进行研究 1与方法 1.1试剂,动物:健康豚鼠48只,由广西医科大学实验动 物中心提供,体质量3O0,400g分为6组,每组8只t其中 5个组分别为不同剂量的CVF组.另一组注射生理盐水为对 照组.10亿/ml金葡菌液由广西医科大学微生物教研室提 供. 2.2CVF的分离,纯化及活力测定:参照舒雨雁等报道的 方法进行分离纯化从中华眼镜蛇(Naja.ajaatra,Chinese Cobra)蛇毒中分离纯化CVF.参照Takahaehi等方法测定 CVF活力.使致敏绵羊红细胞溶血率降低s0所需的CVF 量为一个抗补体活力单位. 收稿El期:1999—01—28 13CVF的注射用量:首次给各不同浓度CVF组豚鼠腹腔 注射CVF的量分别为1,2,4,8和16btg/0.1g豚鼠体质量一 第二次注射时间与首次注射时间问隔6h. 1.4采血:第二次腹腔注射CVF后48h,用质量浓度为1 硫喷妥钠溶液腹腔注射麻醉,打开腹腔,腹主动脉抽血约 5ml,用质量浓度为1肝紊适量抗凝,置于试管中备用 1.5血液中性白细胞吞噬功能的测定:参照张明安等方 法进行取上述抗凝豚鼠血2ml,加人等量质量浓度为3明 胶溶液馄匀,37C水浴沉淀20mln.另取lml抗凝豚鼠血离 心(2500r/min,3min).取其血浆待用取上述沉淀上层液, 移人另一试管,用冷Hank液冲洗3次(每次离心2500r/ min,3min).最后一次去上清液加入0.3ml血浆混匀.混匀 液加人03ml10亿/ml的金黄色葡萄球菌液混匀.37C水浴 保温20rain,每5rain振摇l0,15次,离心(2500r/rain+ 3rain),去上清液2i3t混匀涂片,干燥,用Wright液染色t 油镜下计算100个中性白细胞中吞噬细菌的细胞数,得到吞 噬率. 2结果 2.1CVF的分离纯化及活力测定:从中华眼镜蛇毒中分离 纯化的抗补体因子(CVF),相对分子质量为225,230ku;聚 而烯酰胺凝胶电泳显示为单一区带.抗朴体活力为8196U/ mg- 2.2五个不同剂量CVF对豚鼠中性白细胞吞噬率的影响: ?640?广西医科大学1999Oct16(5 给各组豚鼠腹腔注射五个不同剂量CVF后,各组豚鼠血液中性白细胞吞噬功能均 有不同程度的下降.结果如1 表1CVF对豚鼠中性白细胞吞噬功能的影响 (=8,用量b~g/10Og体质量,腹腔注射给药) ;士S与对照组比较.P<005,有差异显着性 用吞唾率()与CVF用量的g数进行双对数作图 量效关系见图1 v * 忡 . is(g)CVF 图1CVF与中性白细胞吞噬功能量效关系 直线方程Y…16925O,653xP=00038 3讨论 其白细胞吞噬功能的影响目前报道甚少.仅报道利用CVF造 成实验动物低补体,吞噬功能低下的状态,研究某些药物对 免疫功能的恢复的影响0].莪们的实验结果说明CVF消除 存在一定 补体后使豚鼠中性白细胞的体外吞噬功能下降,的量效关系.经直线回归处理,求得直线回归方程为;Y一 1.6g25—0.653xP一0.O038CVF除了对动物补体水平产 生影响外,对细胞免疫功能(如中性白细胞的吞噬功能)等 也有一定的影响,其作用机理及对其它免疫细胞的影响有 待进一步研究,(致谢:本文撰稿承蒙汤圣希教授指导,特此 致谢) 参考文献 随着眼镜蛇毒开发和应用研究的深人,耐眼镜蛇毒中抗 补体因子(CVF)的研究也不断深人,从分离纯化,理化性 质的研究到影响其作用的因紊及对体液免疫的影响多有 报道,但未发现CVF影响中性白细胞吞噬功能的文章报道. 绝大多数文献是报道CVF用于防止异体器官移植的排 斥反应,小动物如豚鼠一大鼠,以及大动物猪一狒狒的异体 心脏移植,在传统的免痤抑制剂Cyclosporine和激素,及在 脾脏摘除的配合下,加用适量的CVF可明显加强对超急排 斥反应的抑制这一作用已成为CVF对补体旁路反应抑制 体液免疫的肯定性认识.而且CVF的这一效应是与用量成 正相关.有报道CVF能防御油酸引发的肺组织损伤口]. CVF是眼镜蛇毒成分中的一种可激活血浆C蛋白的组 分,对机体无伤害性,其结构与功能类似补体组分C.在血 清中其它蛋白因子的参与下,它能与补体系统中的c成分 形成复合物t代替内源性的组分Cab,然后澈活旁路途径,导 致c(和Cs)消耗,造成血清中补体含量的下降.既往报道 CVF只是抑制体液免疫反应,但涉及细胞免疫,特别对中性 1舒雨雁.陈JIJ,庄茂辛,等.中华眼镜蛇毒因子的分离 纯化及性质的研究.生物化学与生物物理,1991,23 (1)32,38 2吴耀生t舒雨雁,李曼玲等.中华眼镜蛇毒因子对体液 免疫的影响.中华微生物学和免疫学杂志1991,11 (6)401,403 3庄茂辛,吴耀生李曼玲,等黄芪,党参,人参多糖对 豚鼠免疫功能的影响.中国药学杂志,1992,27(11):653 , 655 4TakahashiH.PurificationandcharacterL训tonofantlaom plementfactor(cobravenomfactor)fromtheNajanajaa traV@t'lOITt.BiochemBiophysActa,1982;701:1O2,I10 5张明安,朱作金,宋志军t等.不同浓度NO对免疫功 能的影响.广西医学院,1985,2(1):1,5 6TambourgiDV.dossantosMC.FurtadoMdeFD,eta】. ProinflammatoryactjvJliesLnelapidakvnomsBr『' Pharmacol,1994+112(3):723,7 7RenXD,HuangSJ,SunJJ,eta1.Protectiveeffectofcobra veDomfactoro12pulmonaryinjuryinducedbyo/eicacid. 1nt】lmmunopharmacol,1994,16(11):969,75