小儿磨积片

小儿磨积片 RP-HPLC法测定小儿磨积片中橙皮苷 摘要:目的:建立小儿磨积片中橙皮苷的含量测定。方法:回流提取，HPLC测定小儿磨积片中橙皮苷的含量。采用C柱，甲醇,醋酸,水(35?4?61)为流动相，检测波长为283nm。18 结果:此方法线性关系良好，平均加样回收率为96.99,，RSD为1.64,(n=6)。结论:本方法简便可行、结果准确，可用于小儿磨积片的质量控制。 关键词:HPLC;小儿磨积片;橙皮苷 小儿磨积片收载于《中华人民共和国药品》中药成方制剂第10册，由泽泻、半夏、山楂、茯苓、白术、陈皮、苍术、厚朴、甘草、广藿香等12味药物组成的复方制剂，具有消食积，和胃，止呕，舒气宽胸之功效。对于小儿消化不良，停乳，呕吐有很好的疗效。陈皮是方中臣药之一，具有理气健脾，燥湿化痰之功效，其主要含 〔1〕有挥发油、苷类和黄酮类成分，其中橙皮苷是其特征性有效成分。目前测定橙皮苷常用的方法为高效液相色谱法，本研究在文献的基础上，建立了专属性高、干扰小的RP-HPLC法测定本品中橙皮苷含量，实践证明该方法既有较强的科学性，又有实际工作中的可操作性，可用于本品的质量控制。 1 仪器和材料 1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪，Agilent 1100 Series紫外检测器，N2000色谱工作站;AE240电子分析天平(精确度为十万分之一);TU-1901紫外-可见分光光度仪。 1.2 试剂 甲醇为色谱纯(上海陆都化学试剂厂)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。 1.3对照品 橙皮苷对照品(批号: 110721,200512,供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所。 1.4样品 小儿磨积片(为市购，天津同仁堂制药厂，批号:20060525，20060723，20060802); 小儿磨积片阴性样品:自制。 2 实验方法和结果 1 2.1色谱条件 色谱柱:C(200×4.6mm，5μm，大连依利特公司)分析柱;检测波长:283nm;18 流动相:甲醇,醋酸,水(35?4?61);柱温:25?;流速:1ml/min。 2.2检测波长的选择 取橙皮苷对照品适量，加甲醇稀释后作为样品溶液，以甲醇为参比，用紫外-可见分光光度计在190,400nm波长范围内扫描，测定橙皮苷的最大吸收波长为283nm，故检测波长选择283nm。检测波长选择见图1。 2.3流动相的选择 〔2〕 〔3〕分别选用乙腈,0.1,磷酸(25?75);乙腈,水,磷酸(22?77.8?0.2); 〔4〕 〔5〕甲醇,水(35?65);甲醇,醋酸,水(35?4?61)为流动相进行试验比较，结论:甲醇,醋酸,水(35?4?61)分离度、系统适应性较好，故选用甲醇,醋酸,水(35?4?61)作为流动相。 2.4对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的橙皮苷对照品10.15mg，置50ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液;精密吸取储备液5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为橙皮苷对照品溶液(0.0406mg/ml)。 2.5供试品溶液的制备 2.5.1 供试品溶液提取条件的选择 〔6〕参照中国药典2005年版一部陈皮项下橙皮苷的含量测定方法，以甲醇为溶剂，采用加热回流的方法提取样品中的橙皮苷，对提取时间进行了比较试验(30分钟、60分钟、90分钟)，结果:样品提取60分钟橙皮苷的含量不再增加，故样品选择提取60分钟。 2.5.2 供试品溶液的制备 2 取本品10片，去糖衣，精密称定，研细，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，水浴加热回流提取60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 2.5.3阴性对照液制备 原方除去陈皮，按小儿磨积片制备工艺制得阴性样品，取该粉末约0.6g，精密称定，按供试品溶液制备方法处理，得阴性对照溶液。 2.5.4药材对照液制备 取陈皮药材，取粗粉约1g，精密称定，按供试品溶液制备方法处理，得药材对照溶液。 2.5.5系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液和药材对照液各5μl注入液相色谱仪，测定。结果明，分离度大于1.5，达到基线分离，保留时间适中，且阴性对照液在与对照品色谱峰相应位置上无色谱峰，因此该分析条件可行，见图2,5。 图2 橙皮苷对照品HPLC图 图3 小儿磨积片中橙皮苷HPLC图 图4 阴性对照液HPLC图 图5 陈皮药材对照液HPLC图 2.5.6线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10、12μl，进样，测定其峰面积积分值，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程 3 为:A,1352930.33075C+311.2，r,0.99971。结果表明，橙皮苷在81.2,487.2ng范围内具有良好的线性关系。数据见表1，标准曲线见图6。 表1 线性关系考察结果 取样量(μl) 2 4 6 8 10 12 进样量(μg) 0.0812 0.1624 0.2436 0.3248 0.4060 0.4872 峰面积值 112339 212044 336934 440131 548761 658675 700000 y = 1352930.33075 x + 311.200006000002R = 0.99943500000 400000 300000 200000 100000 0 0.000.080.160.240.320.400.480.56 图6 标准曲线 2.5.6精密度试验 精密吸取批号为20060525的样品供试品5μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积，RSD,1.87,，数据见表2。 表2 精密度试验考察结果 峰面积值 256254 261629 269128 262984 266462 RSD(%) 1.87 2.5.7稳定性试验 精密吸取批号为20060525的样品供试品5μl，每间隔2h进1针，连续考察8小时，含量无显著变化，RSD,1.87,，按上述色谱条件测定峰面积，RSD,1.97,，表明溶液在8h内稳定性良好，数据见表3。 表3 稳定性试验考察结果 时间(h) 0 2 4 6 8 含量(mg/g) 7.651 7.812 7.731 7.695 7.412 RSD(%) 1.97 2.5.8重复性试验 4 精密称取批号为20060525的样品粉末约0.6g，共6份，分别按“2.5.2 供试品溶液的制备”中相同的方法制得供试液，按上述色谱条件进行测定，橙皮苷平均含量为7.584mg/g，RSD,1.67,，表明重复性良好，数据见表4。 表4 重复性试验考察结果 含量(mg/g) 7.608 7.524 7.714 7.422 7.741 7.495 平均(mg/g) 7.584 RSD(%) 1.67 2.5.9加样回收率试验 取已知含量为7.584mg/g的样品(批号:20060525)约0.3g，共6份，精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品溶液(0.441mg/ml)5ml(即2.205mg)，按供试品制备方法制备及上述色谱条件测定，计算回收率，RSD,1.64,，结果见表5。 表5 加样回收率试验考察结果 编取样量 样品中含橙加入橙皮苷实测橙皮苷回收率平均回RSD 号 (g) 皮苷量(mg) 量(mg) 总量(mg) (%) 收率(%) (%) 1 0.3051 2.313 2.205 4.456 97.19 2 0.2917 2.212 2.205 4.310 95.15 3 0.3025 2.294 2.205 4.458 98.14 96.99 1.64 4 0.3123 2.368 2.205 4.559 99.36 5 0.3014 2.286 2.205 4.416 96.60 6 0.2976 2.257 2.205 4.363 95.51 2.5.10样品的含量测定 按拟定的含量测定方法测定三批小儿磨积片(20060525，20060723，20060802)中橙皮苷的含量，结果见表6。 表6 样品含量测定结果 批 号 橙皮苷含量(mg/片) 20060525 1.875 1.855 20060723 1.823 1.801 20060802 1.704 1.726 3 小结与讨论 5 3.1 由以上实验结果可知，在上述实验条件下，仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重复性和加样回收率等均好，符合定量，可以作为控制小儿磨积片质量的方法。 3.2根据上述试验结果，考虑到陈皮的原料来源、贮藏、制剂生产过程等因素，暂定每片小儿磨积片中橙皮苷(CHO)含量不低于1.45mg。 283415 3.3通过方法学考察，建立了高效液相色谱法测定小儿磨积片中橙皮苷含量的系统条件，理论塔板数按橙皮苷峰计算，应不得低于2000。 参考文献 [1] 苗明三,李振国等.现代实用中药质量控制技术[M].人民卫生出版社,2000:577. [2]李忠琼,张雯洁,张贇华等.HPLC测定乳腺清胶囊中橙皮苷的含量[J].中成药,2005,27(4):480,481. [3]李海燕,左晓军,谭睿.健胃消食胶囊质量标准的研究[J].中药材,2006,29(7):738,739. [4]陈伟光,缪华蓉,崔波. HPLC测定芙朴感冒胶囊中牛蒡苷和橙皮苷的含量[J].中药材,2002,24(11):837,838. [5]张寓云,毛素芳,郑奕辉等. HPLC测定胃舒散中橙皮苷的含量[J].中成药材,2004,26(3):256,257. [6]中国药典一部[S].2005:132. 6