鱼类细菌性烂鳃病检疫技术规范

鱼类细菌性烂鳃病检疫技术 DB43/365-2007 鱼类细菌性烂鳃病检疫技术规范 目 次 前言…………………………………………………………………………………………………… ? 1 范围………………………………………………………………………………………………… 1 2检样质量要求………………………………………………………………………………… 1 3 检疫方法………………………………………………………………………………………… 1 3.1 群体检疫……………………………………………………………………………………… 1 3.2 流行病学调查………………………………………………………………………………… 1 3.3 解剖检查……………………………………………………………………………………… 1 3.4 显微镜检查…………………………………………………………………………………… 1 3.5 病原分离鉴定………………………………………………………………………………… 1 3.6 免疫学检验…………………………………………………………………………………… 1 附录A(规范性附录)流行病学调查……………………………………………………………… 2 附录B(规范性附录)烂鳃病的镜检判定………………………………………………………… 3 附录C(规范性附录)酶免疫测定法……………………………………………………………… 4 1 DB43/365-2007 前 言 本标准的附录A、附录B和附录C均为规范性附录。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位,湖南省水生动物防疫检疫站、湖南农业大学。 本标准主要起草人,江为民、肖光明、周文、何艳林。 1 范围 本标准规定了鱼类细菌性烂鳃病(fish bacterial gill-rot disease )的检样质量要求、检疫方法等。 本标准适用于我省鱼类细菌性烂鳃病的检疫。 2 检样质量要求 取被检病鱼10尾,要求材料新鲜无污染,病变具有代表性。 3 检疫方法 3.1 群体检疫 仔细检查鱼群有无异常表征,如发现被检疫鱼的体色,特别是头部的体色发黑,游动缓慢,对外界刺激反应迟钝,呼吸困难,食欲减退,甚至离群独游水面,不吃食,对外界刺激失去反应,可作疑似鱼类细菌性烂鳃病对待。 3.2 流行病学调查 如发现疑似鱼类细菌性烂鳃病,应进行鱼类细菌性烂鳃病流行病学调查,调查按附录A的要求执行。 3.3 解剖检查 抽样解剖检查,病鱼鳃盖内表面的皮肤充血发炎,中间部分腐蚀成圆形或不规则形的透明小窗，俗称“开天窗”，,鳃上粘液多,鳃丝肿胀,鳃的某些部位因局部缺血而呈淡红色或灰白色,有的部位则因局部淤血而呈紫红色,甚至有小出血点,严重时,鳃小片坏死脱落,鳃丝末端缺损,鳃丝软骨外露,在病变鳃丝的周围常粘附着坏死脱落的组织、粘液和水体中的各种杂物。如病鱼出现上述症状,可初步诊断为鱼类细菌性烂鳃病。 3.4 显微镜，解剖镜，检查 3.4.1 不同病原引起的烂鳃病的鉴别方法见附录B。 3.4.2 取鳃上淡黄色粘液,或剪取少量病灶处鳃丝放在载玻片上,加上(2，3)滴无菌水，或清水，,盖上盖玻片,放置(20，30)min后,如在显微镜下见有大量细长、滑行的杆菌,有些菌体聚集成柱状,可确诊为鱼类细菌性烂鳃病。 3.5 病原分离鉴定 鱼类细菌性烂鳃病病原为柱状屈桡杆菌,如病鱼出现典型的烂鳃病症状,同时,从鱼鳃上分离到柱状屈桡杆菌,可确诊为鱼类细菌性烂鳃病。 2 DB43/365-2007 3.6 免疫学检验 经初步判断为疑似鱼类细菌性烂鳃病的患病鱼,可采用酶免疫测定法确诊,其测定按附录C的要求执行。 3 DB43/365-2007 附录A ，规范性附录， 流行病学调查 流行病学调查如表A.1所示。 表A.1 流行病学调查 调查内容 判定依据 判断与诊断 患病鱼种类 草鱼,青鱼易感,鲤、鲫、银鲫、鲢、鳙、养殖鱼类,特别是草鱼、鳙鱼有典型烂鳃症状, 团头鲂、金鱼等鱼类也可感染发病。 可初步判断为鱼类细菌性烂鳃病。 水质 池塘水质好,经常消毒,很少暴发细菌池塘水质差,又长时间未对养殖水体消毒,发生 性烂鳃病。 细菌性烂鳃病的可能性较大。 水温在15?以上发生流行,水温为如果水温在15?以上,患病鱼出现典型烂鳃症水温 (15，30)?时,水温越高越易暴发流行,致状,可初步判断为细菌性烂鳃病。池塘水质好,水温 死时间也越短,致死时间的对数与水温呈直在15?以下,发生细菌性烂鳃病的可能性较小。 线关系。 鱼病防治 消毒药物能有效防治细菌性烂鳃病。 患病鱼类出现典型烂鳃症状,使用消毒药物防治 效果好,可初步判断为细菌性烂鳃病。 疫区划分 根据水产养殖病害测报结果,确定产地如果产地是鱼类细菌性烂鳃病疫区,患病鱼出现 是否疫区。 典型烂鳃症状,鱼类细菌性烂鳃病的可能性大,如果 是非疫区, 鱼类细菌性烂鳃病的可能性相对要小。 4 DB43/365-2007 附录B ，规范性附录， 烂鳃病的镜检判定 烂鳃病的镜检判定如表B.1所示。 表B.1烂鳃病的镜检判定 真菌引起的 项 目 细菌性烂鳃病 寄生虫引起的烂鳃病 烂鳃病 有原生动物,或粘孢子虫,或指环虫,或病原 柱状屈桡杆菌。 鳃霉菌。 中华鳋等寄生虫。 镜检 有大量细长、滑行的杆菌,有些有车轮虫等原生动物,或有粘孢子虫,或有鳃霉菌丝 判定 菌体聚集成柱状。 有指环虫,或有中华鳋等寄生虫。 5 DB43/365-2007 附录C ，规范性附录， 酶免疫测定法 C.1 在载玻片先涂上少量甘油蛋白，然后用弯头镊子取新鲜病鱼鳃上的少量淡黄色粘液进行涂片(注意片子的背景要清晰，如粘液中杂物很多，可将粘液放在干净的载玻片上，加入少量无菌水，使菌分散到水中后，再以菌液涂片)。 C.2 涂片干后用丙酮固定5min，再放入内含0.05%吐温20的0.1mol/L，pH值7.4的磷酸盐缓冲液(PBS-T)中浸数分钟，用滤纸条吸去玻片上的液体，在涂菌区敷贴小块擦镜纸，加上已用PBS-T稀释成1:100,1:200的特异抗血清(免抗柱状屈桡杆菌的抗血清)，置于湿盒内，37?温育30min，然后镊去擦镜纸，用PBS-T搅拌洗涤3次，每次20min，浸入新鲜配置的显色液(在40mL0.05mol/L pH7.6的Tris-HCL缓冲液中加入20mg的3，3'二氨基联苯)中，在25?的黑暗处放置10min，取出载玻片，放 O，再把载玻片放入，在25?黑暗处放置20min，然后流水冲洗15min，再放入蒸馏水，按常入16滴H22 规用酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 C.3 用光学显微镜检查，有棕色细长杆菌，即为阳性反应，可确诊为患细菌性烂鳃病。 C.4 如在野外操作，可用丙酮固定后，放入干燥器中，保存冰箱中5个月，其抗原性仍不受影响。 6