活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法的研究

活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法的研究 活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法 的研究 热带医学杂志2O05生箜鲞箜 [文章编号】1672—3619(2005)03—0289—02 活体溶组织内阿米巴滋养体简易染色方法的研究 王维忠,,徐新力,,单颖,马志华 (1.锦州医学院寄生虫学教研室,锦州121001; 2.锦州医学院附属第一医院检验中心,锦州121001) - 289? ? 论着? 【摘要】目的研究活体溶组织内阿米巴滋养体的染色方法.方法应用洛克氏液将中性红,台盼蓝,四 溴荧光素,卡红四种染色剂分别稀释成1:500,1:1000,1:1500,1:2000浓度.以培养的溶组织内阿米巴滋养体 作湿涂片染色,在显微镜下观察.另用80%水浴3nfin杀死的阿米巴滋养体作为死亡染色对照.结果中性 红和台盼蓝染色效果最好.结论中性红和台盼蓝染色方法简便实用,可供教学和临床检验使用,特别是为抗 阿米巴的药物疗效实验可提供一种简易方法. 【关键词】阿米巴滋养体;染色剂;染色方法 中图分类号:R382.1文献标识码:A TheSimpleStainingMethodofActiveEntamoebahistolyticaTrophozoite WANGWei—zhong,XUXin—li,SHANYing,MAZhi—hua (J.DepartmentofParasitology,^OltMedicalCollege,Jinzhon121001;2.LaboratoryCenter of theFirstAffiliatedHospital,JinzhouMedicalCollege,Jinzhou121001,China) 【Abstract】 Objective,TostudythestainingmethodofactiveEraamoebahistolyticatrophozoite.Methods HumidsmearofliveOl'heatkilled(80.Cfor3min)Entamoebahistolyticatmphozoitewaspreparedandstainedwith neutralred,trypanblue,tetrabl'omofluoresceinorcoccinellin(1:2000inLocke).ResultsThebeststainingisbyneutral redandtrypanblue.ConclusionThestainingmethodbyneutralredandtrypanblueissimpleandcanbeusedin teachingandclinicaltest.EspeciallyitprovidesignificantbasisforevaluatingthetreatmentofEntamoeba厶,ofy,cn trophozoite. 【Keywords】Entaraoebah~to@ticatrophozoite;stainingagent;stainingmethod 为提高基础教学与科研质量和教学示教的效 果.在实验教学中对溶组织阿米巴活动的滋养体 的检查和诊断,以及抗阿米巴药物实验中滋养体 存活的染色方法进行了试验研究. 浓度…,把培养的溶组织内阿米巴滋养体作湿涂 片染色,置于保暖台上,在显微镜下进行观察.同 时采用80?水浴3min杀死的阿米巴滋养体作 为死亡对照. 1材料与方法2染色结果 1.1材料 染色剂(中性红,台盼蓝,四溴荧光素,卡红), 洛克氏液,显微镜,保暖台等. 1.2方法 应用洛克氏液将四种染色剂稀释成1:2000 作者简介:王维忠(1951,),男,高级实验师,形态学实验 中心主任,主要从事寄生虫病学的教学与实验 工作. 染色结果以中性红和台盼蓝为最佳. 2.1中性红染色结果 中性红染色的整个湿片背景呈淡红色.活 的滋养体能变形运动,可伸出叶状伪足,细胞膜 界限明显,细胞质透明,带有微蓝色反光,外质 伪足部分更透明.细胞质中可见大小不等,数目 不定的颗粒.呈透明折光,其间有微红色的细微 颗粒,细胞核着色不明显.经热杀死的滋养体. 外形变圆.细胞质均染成红色,夹杂有粗细不等 ? 290? 的颗粒,亦染成红色.有的还可见细胞核,隐约 显示核仁. 2.2台盼蓝染色结果 台盼蓝染色后整个湿片背景呈淡蓝色,活动 滋养体也能变形运动.伸出伪足,细胞膜清晰,细 胞质也含大小不等,数目不定的颗粒,透明折光, 细胞核不明显.用热杀死的滋养体,外形变圆,无 伪足,细胞质染成蓝色,间有染成蓝色的颗粒,有 的还可见到细胞核 2.3四溴荧光素染色结果 四溴荧光素染色后的整个湿片背景浅褐色, 活的滋养体未见伸出叶状伪足,细胞膜界限尚可, 细胞质透明度低,细胞核较明显.用热杀死的滋养 体外形变圆,细胞质染成褐色,有荧光染色颗粒, 细胞核较清楚 2.4卡红染色结果 卡红染色的整个湿片背景淡红色,活的滋养 体基本能变形运动,有的伸出伪足,细胞膜界限较 明显,细胞质透明,略带折光,细胞膜不清楚.用热 杀死的滋养体外形变圆,细胞质染成红色,可隐约 见细胞核 2.5四种染色剂的活体保存时间 这四种染色剂分别配成4种浓度(1:500, l:l000,l:l500,l:2000),其结果如下. 2.5.1中性红染色的活体保存时间染色后当时 发现虫体有l2%,26%死亡:染色lh后.活虫数 可占68%,82%;2h后活虫数占52%,62%:3h 为50%,64%:6h后活虫仅剩36%,38% 2.5.2台盼蓝染色的活体保存时间染色后当时 发现虫体有10%,l2%死亡:染色lh后.活虫数 可占68%,70%:2h后活虫数占52%,56%:3h 为45%,50%:6h后活虫仅剩30%,32% 2.5.3四溴荧光素的活体保存时间染色后当时 发现虫体有60%,78%死亡:染色lh后活虫数 可占17%,32%:2h后全部死亡 2.5.4卡红染色的活体保存时间染色后当时发 现虫体有50%,68%死亡:染色lh后活虫数可 占30%,38%:2h后全部死亡 上述染色结果说明台盼蓝和中性红染色结果 约占半数的虫体可保持活力至3h.卡红和四溴 荧光素的活体保存时间仅有30%可存活lh,有 显着性差异 3讨论 JournalofTropicalMedicineVo...15No.』!Q 近年来,由于自然和外环境的变化,阿米巴性 寄生虫病在本地区有增加的趋势,特别是一些自 然界水体和泥土内存在着许多种类的自生生活的 阿米巴.有些自生生活的阿米巴是潜在的致病源, 可以侵入人的中枢神经系统或其他器官,引起死 亡或严重损害[2J.溶组织阿米巴滋养体具有侵入 结肠和其他器官,适应宿主的免疫反应和达致 病因子的能力,这些致病因子破坏细胞外问质,接 触依赖性溶解宿主组织抵抗补体溶解作用.因此, 如何识别和培养活体溶组织内阿米巴滋养体具有 重要的意义.溶组织内阿米巴(即痢疾阿米巴)为 侵袭型阿米巴病的病原虫.主要寄生于结肠,引 起阿米巴痢疾和各种类型的阿米巴病,在全球分 布,多见于热带与亚热带引.据统计,在全球超过 5亿的阿米巴感染者中,侵袭型的年发病高达4 千万例以上,至今每年死于阿米巴病的人数不少 于4万.当前在医学上的重要性已被认为仅次于 疟疾与I缸吸虫病.滋养体期系该阿米巴的基本生 活型,通常在结肠腔内以二分裂法繁殖.直径 10,40Ixm,个体大小随种系而有差异.可大至60 m以上.本文应用4种染色剂,分别配成4种不 同浓度,对活体溶组织内阿米巴滋养体的染色方 法进行实验研究Es].染色结果以中性红染色和台 盼蓝染色的效果最好,其活体保存时间最长,可长 达6h,这给学生和进修人员提供了一个较长时 间的学习机会.根据实验结果表明,该染色方法的 优点是:染色剂简单,染色迅速,着色鲜艳,有利识 别,其各种浓度染色结果相似,制成的标本退色较 慢,便于保存.因此,我们认为本染色方法简便实 用,可供教学和临床试用.特别是对抗阿米巴的药 物疗效实验中,对滋养体死活的判断提供了重要 的依据. [参考文献] [1]陈佩惠.人体寄生虫学[M].第四版.北京:人民卫生出版 袖:.1995:286—288. [2]詹希美.人体寄生虫学[M].第一版.北京:人民卫生出版 礼.2003:43—45. [3]周正任,潘兴瑜.病原生物学[M].第一版.北京:科学技术 出版社,2001:364—368. [4]陈佩惠,孔德芳,李慧珠,等.人体寄生虫学实验技术[M]. 北京:科学出版社.1988:26—28. [5]徐肇珥,陈兴保,徐麟鹤.虫媒传染病学[M].第一版.宁 夏:宁夏人民出版社,1990:428—430. (收稿日期:2004一l1一O1,修回日期:2005—01一10)