【word】 HPLC法测定京城牌白凤丸中芍药苷的含量

【word】 HPLC法测定京城牌白凤丸中芍药苷的含量 HPLC法测定京城牌白凤丸中芍药苷的含 量 ? 2010年7月第20卷第7期?今日药学 HPLC法测定京城牌白凤丸中芍药苷的含量 阮桂平,潘梅英,童惠贞 (广东省药品检验所,广东广州510180) 摘要:目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定京城牌白凤丸中芍药苷的含量测定方法.方法HPLC法,采用CAPCELLPAKC.柱 (250mmx4.6mm,5m),以乙腈一0.t%磷酸溶液(12:88)为流动相,流速为1ml/min,柱温为35?,检测波长为230nm.结果芍 药苷在0.101,0.808g范围内与峰面积呈良好的线性关系,,=0.9999,平均回收率为101.0%,RSD=1.0%(n=6).结论本方 法简便,准确,重现性好,可用于京城牌白凤丸的质量控制. 关键词:HPLC;京城牌白凤丸;芍药苷 中图分类号:R284.2文献标志码:A文章编号:1673—4610(2010)07—0029—03 DeterminationofPeoniflorininJingchengBrandBaifengPillsbyHPLC RUANGui—ping,PANMei—ying,TONGHui-zhen (GuangdongInstituteforDrugControl,Guangzhou,Guangdong510180,Ch ina) Abstract:0bjectiveToestablishaHPLCmethodtodeterminepeoniflorininJingchengbrandBaifengpills. MethodsTheHPLCwasapplied.CAPCELLPAKC1R(250mm×4.6mm,5m)wasusedascolumn.Themobile phasewasconsistedofACN-().1%H1POd(12:88).Theflowspeedwas1.0ml/rain.Thecolumntemperaturewas 35qC.Thedetectionwavelengthwas230nn1.ResultsThelinearrangeofpeon 0.808P,g.r=0.9999. iflorinwas0.101— Theaveragerecoveryofpeoniflorinwas1O1.0%,andRSDwas1.0%.ConclusionThemethodiSsimple,accurate, andreproducible,andcanbeusedforqualitycontrolofJingchengBrandBaifengpills. Keywords:HPLC;JingchengBrandBaifengpills;peoniflorin 京城牌白凤丸由珍珠,人参,鹿茸等10味中药制 成的中药复方制剂,具有益气养血,补肾调经的功效. 用于气血两亏,身体瘦弱,腰酸腿软,经期腹痛,产后体 弱,心烦健忘,白带赤带,血行失常,子宫寒冷等症.为 更好地控制本品的质量.本文采用了HPLC法测定白 芍所含成分芍药苷的含量,方法简便,准确,重现性好. 1仪器与试药 1.1仪器 Waters高效液相色谱仪,包括Waters2487紫外检 测器,Waters2695色谱工作站;色谱柱:CAPCELLPAK Cl8(250mm×4.6mm,5txm);Millipore纯水器; Sartorius电子天平;KQ-300DA超声仪. 1.2试药 芍药苷对照品(中国药品生物制品检验所,供含量 测定用,批号:110736—200525);京城牌白风丸(香港 峨嵋药厂有限公司提供,批号:001,002,003);乙腈为 色谱纯,磷酸,甲醇,乙醇均为分析纯,水为超纯水. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:CAPCELLPAKClR(250mm×4.6mm,5 Ixm);流动相:乙腈一0.1%磷酸溶液(12:88);流速: 1.0ml/min;检测波长:230nm;柱温:35qC;进样量:对 照品溶液2Ol,供试品溶液10l. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精 作者简介:阮桂平,副主任中药 师,Tel:020—81865300,E—mail:ruanguiping@gdda.gov.cn 通讯作者:潘梅英,药师,Tel:020—81886161,E—mail:pmyyizhimei@163.con PharmacyToday?20107Vo1.20N..7? 密称定,加50%甲醇制成每lml含40.4g的溶液,即 得. 2.2.2供试品溶液的制备取本品,研细,混匀,取约 2g,精密称定,置100ml锥形瓶中,精密加入50%甲 醇…50ml,称定重量,超声处理45rain(功率200W,频 率45kHz),放冷至室温,再称定重量,加50%甲醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,经0.45m微孔滤 膜滤过,取滤液,即得. 2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工 艺,配制不含白芍的阴性对照样品,按”2.2.2”项下方 法制成阴性对照溶液. 2.3系统适用性试验 分别吸取对照品溶液,供试品溶液和阴性对照溶 液各20l,按”2.1”项下色谱条件进样,结果:供试品 与芍药苷对照品在相应的位置上出现色谱峰,供试品 色谱中分离度良好;阴性对照在该位置上未出现色谱 峰,明阴性对照溶液不干扰样品测定,见图1. 2 t/min 图1样品及对照品HPLC色谱图 A.芍药苷对照品;B.阴性对照;C.供试品 2.4线性关系考察 精密吸取芍药苷对照品溶液2.5,5.0,10.0,15.0, 20.0l,按”2.1”项下色谱条件测定峰面积,以峰面积积 分值(1,)为纵坐标,对照品进样量()为横坐标进行线性 回归,得回归方程Y=1124.5X一18901(r=0.9999). 结果表明,芍药苷进样量在0.101—0.808g范围内与 峰面积积分值呈良好的线性关系. 2.5精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液,按”2.1”项下色谱条 件重复进样6次,每次l0,测定芍药苷峰面积.结果 RSD为0.19%,表明仪器精密度良好. 2.6稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液(批号001),分别 在0,6,18,24,36h依次进样,测定芍药苷峰面积. 结果RSD为0.26%,表明供试品溶液在36h内稳 表1加样回收率试验结果(,l=6) Emin 定性良好. 2.7重复性试验 取同一批(批号:003)样品6份,按”2.2.2”项下方 法制成供试品溶液,并按”2.1”项下色谱条件测定.测 得平均值为0.441mg,RSD为1.87%,表明本方法重 复性良好. 2.8加样回收率试验 2.8.1对照品溶液的制备分别取芍药苷对照品适 量,精密称定,加50%甲醇制成每1ml含0.1616和 0.2176mg的溶液,即得. 2.8.2供试品溶液的制备取已知含量的同一批(批 号:003批,含量为0.441mg/g)样品6份,每份约1g, 精密称定,置100ml锥形瓶中,分别加入上述芍药苷对 照品2和2.5m1,按”2.2.2”项下方法操作,并按”2.1” 项下色谱条件测定,计算回收率.结果见表1. 30 A一 ?2010年7月第20卷第7期?日药学 2.9样品含量测定 取不同批号的3份样品,按”2.2.2”项下方法制成 供试品溶液,并按”2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含 量.结果见表2. 表2样品含量测定结果(n=3) 批号黄芪甲苷含量(mg/g) oo1 oo2 0o3 0.45 0.46 0.44 3讨论 参考《中国药典》2005版一部’白芍”含量测定 项下的流动相,以乙腈,0.1%磷酸溶液(12:88)作为 流动相. 曾试用KromasilCl8,DikmaDiamonsilCl8,MerckC XBC,CAPCELLPAKC等多种品牌的色谱柱,结果 CAPCELLPAKC18,KromasilC18与DikmaDiamonsilC18色 谱柱所得待测成分色谱峰峰形好,分离理想,本实验色 谱柱采用CAPCELLPAKC色谱柱. 在实验中选用甲醇,50%甲醇与稀乙醇作为提 取溶剂进行比较,结果表明采用50%甲醇提取,杂质色 谱峰干扰较少,样品含量较高,故选用50%甲醇作提取 溶剂.在实验中选用超声15,20,30,45min进行比较, 结果表明45min以后,延长超声时间对提取结果基本 无影响,故选择超声45min提取. 参考文献 [1]赵呈雷,施亚芳,贾晓斌,等.HPLC测定复方消瘤胶囊 中芍药苷含量[J].中成药,2009,31(4):650—651. [2]国家药典委员会.中国药典(一部)[s].北京:化学工业 出版社,2005:68i-69. [3]彭荣越.HPLC测定复方逍遥糖浆中芍药苷的含量[J]. 现代中药研究与实践,2009,23(I):31—32. (收稿日期:2010—03—29) (上接第25页) 2.3回收率试验 往生产样品中分别加入已知浓度的Cm.A,Pv—A和 PV—L对照品溶液,按测定方法对混合溶液及样品溶液 进行测定.各组份平均回收率在98.9%,99.3%,结 果见表4. 表4回收率测定结果(,l=6) 2.4精密度试验 分别取浓度为250mg/L的Cm.A,Pv—A和Pv—L对 照品溶液,按测定方法连续进样6次.各组份峰面积 RSD分别为0.25%,0.48%和0.17%. 2.5检测限试验 分别将Cm—A,Pv—A和Pv.L储备液稀释成一系列 低浓度对照品溶液,按测定方法测定.取相对于信噪 比为2:1时的浓度作为相应组份的检测限,结果3种 组份的检测限均为0.05mg/L. 2.6样品的测定 取2个发酵样品及1个提炼样品按测定方法测 定,测定结果见表5. 表5样品测定结果 3讨论 3.1在本方法研究过程中,也证实了本方法用于康百 汀酯(Cm—L)测定的可行性.但在普伐他汀生产过程 中,康百汀均以Cm.A的形式存在,故本文未对Cm—L 组份进行讨论. 3.2在本方法研究过程中,曾考察过在不同流速,温 度,梯度洗脱程序的条件下进行测定,对照品溶液中的 Cm—A,Pv—A和Pv.L可以在更短的时间内出峰,并且得 到良好地分离.但是,由于普伐他汀生产样品的成分 比较复杂,缩短测定时间会影响目标组份与未知杂质 的分离效果. 3.3由于Pv-A和Cm-A对照品溶液分别由Pv—L和 Cm—L水解得到,2种溶液中均含有过量的氢氧化钠. 因此,在需要准确定量时,不可将Pv-L对照品溶液与 Pv.A和/或Cm—A对照品溶液混合. 参考文献 [1]罗荣荣,孙万里,印培民.微生物转化美伐他汀为普伐他 汀的研究[J].江西科学,2004,22(2):87—90. [2]国家药典委员会.中国药典(二部)[S].北京:中国医药 科技出版社,2010:附录29—31,194—195. (收稿日期:2010—03—31) 31