恒温水浴箱对人血浆中盐酸克仑特罗浓度的测定

恒温水浴箱对人血浆中盐酸克仑特罗浓度的测定 盐酸克仑特罗(;,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,),又名氨哮素、瘦肉精、双氯醇胺等,化学名为α [(叔丁氨基)甲基] 4 氨基 3,5 二氯苯甲醇盐酸盐,是一种β2 受体激动药。其松弛支气管平滑肌作用强而持久,临床上主要用于治疗支气管哮喘。由于药物半衰期长,在体内代谢慢,临床应用时,可能出现肌肉震颤、心慌、心悸、头疼、恶心、呕吐等症状,特别是对于高血压、心脏病、甲亢、青光眼、前列腺肥大等疾病患者危险性较大,可能会加重病情,导致意外,所以对,,的临床血药浓度监测非常重要。本实验采用,,,,-电化学法测定,,血药浓度,参考有关资料,着重对人血浆中,,的提取方法、色谱条件、内标物质的选择以及方法的准确性和重现性等进行了研究,并对患者血浆样本进行。 1材料 1.1仪器 岛津,, 6,高效液相色谱仪,,,, 6,电化学器,,, 3030色谱工作站,超声波仪,恒温水浴箱(上海和呈仪器生产),高速离心机。 1.2药品与试剂 盐酸克仑特罗对照品(新乡同心制药厂,批号20030601,纯度98.7%),乙腈(色谱纯),辛基磺酸钠(,,,,,),其余试剂均为分析纯。,,对照品和对苯二酚内标均用0.02,,,?,-1,,,配制成储备液。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:,,;,,,,,,,18(250,,×4.6,,,10μ,);流动相:磷酸二氢钾缓冲液-乙腈=7?3(,/,);磷酸二氢钾缓冲液内含0.02,,,?,-1磷酸二氢钾,0.15,,,,?,-1,,2,,,,,0.2,,,,?,-1辛基磺酸钠,,,5.0,并通过0.45μ,的滤膜过滤后与乙腈按比例混合,流速1.2,,?,,,-1,检测器电位0.80,(,,/,,,,电极),进样量20μ,。 2.2血浆样本的处理 取15,,离心试管依次加入0.2,,,?,-1,,,,溶液2,,,0.5,,?,-1对苯二酚内标液100μ,,肝素抗凝血浆样本1,,,混匀,加乙醚-乙醇(8?2)提取液8,,,封盖,用超声波仪提取20,,,,3000,?,,,-1离心15,,,;取上清液转移至另一洁净试管中,加入0 .2,,,?,-1,,,,2,,混匀洗涤,3000,?,,,-1离心5,,,,取上清液层转移至一洁净试管中,置60?水浴上通,2挥干,残留用0.1,,流动相重组后,取20μ,供高效液相色谱仪测定,用内标法以峰面积定量。 2.3系统适应性试验 通过对流动相的配比、,,、流速、检测电位的调整实验,确定在上述色谱条件下,空白血浆加内标及,,对照品的测试结果见图1。内标及,,保留时间分别为4.975、5.652,,,。两者分离度>5,达到基线分离,且无空白干扰。 2.4标准曲线的绘制 取空白血浆7份,每份1,,,各加入100μ,内标液,分别加入适量标准溶液使之配成5、10、20、40、60、100、120μ,?,-1的标准系列;按2.2项下操作测定,由色谱工作站直接求出,,对内标的峰面积比值(,)与相应的浓度比值(,)的回归方程,,=0.753,+0.011,,=0.9993。检出限为0.015μ,?,-1(,,,=3),线性范围为1.5,120μ,?,-1。 2.5回收率和精密度的测定 对高、中、低3份,,含量为5、20、40μ,?,-1的标准血样分别按本法检测,其回收率分别为90.5%、94.7%、96.3%,平均为93.8%。同时3份样本按本法分别平行检测5次,,,,分别为2.6%、3.7%、4.2%。 2.6样品测定 我们采用该方法测定了3例患者口服,,后的血药浓度,患者每次口服该药30μ,,服药后2.5,和24,静脉取血。结果见表1。 3讨论 国内外文献报道的,,,,法测定生物样本,,的前处理方法中,采用乙醚-丁醇、己烷-乙酸乙酯等溶剂体系,提取回收率均偏低,影响检测灵敏度。因为盐酸克仑特罗在中性、酸性下易溶于水、甲醇、乙醇,不溶于乙醚等,而在碱性下可溶于乙醚。本实验在碱性条件下用乙醚?乙醇混合比分别为6?4、7?3、8?2、9?1的4种混合提取液对同一份加标样品,各作3次平行对比测定。其平均回收率分别90.6%、92.2%、95.3%、93.6%。结果表明乙醚?乙醇混合比8?2作提取液时,其结果最佳。 本法处理样品简单,测定准确、快速,采用电化学检测器检测,专属性强,灵敏度高,且不受 其他药物的干扰,更适用于临床盐酸克仑特罗血药浓度的监测。