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食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告

2017-11-02 5页 doc 16KB 13阅读

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食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告 食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告 作者: 廖爱军,苏琦,田锋,姚育红,曾斌 【摘要】 目的 探讨湖南衡阳地区白细胞介素 1B(IL 1B)基因多态性与胃癌的关系以及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染后胃癌发生的易感基因型。方法 52例胃癌患者癌旁正常胃粘膜组织和55例慢性胃炎患者胃粘膜组织,均经快速尿素酶和PCR检测HP,应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR RFLP)分析技术,进行基因型检测,并对C/C、T/T进行测序,比...
食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告
食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告 食管癌术后早期肠内营养并发乳糜胸19例报告 作者: 廖爱军,苏琦,田锋,姚育红,曾斌 【摘要】 目的 探讨湖南衡阳地区白细胞介素 1B(IL 1B)基因多态性与胃癌的关系以及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染后胃癌发生的易感基因型。方法 52例胃癌患者癌旁正常胃粘膜组织和55例慢性胃炎患者胃粘膜组织,均经快速尿素酶和PCR检测HP,应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR RFLP)技术,进行基因型检测,并对C/C、T/T进行测序,比较各基因型在胃癌组和胃炎组中的分布差异。结果 IL 1B 31T、IL 1B 511T等位基因和IL 1B 31T/T、IL 1B 511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P0.05),OR值分别为 1.97(95%CI= 1.15,3.59)、2.52(95%CI= 1.45,4.39)和2.71(95%CI= 1.10,6.66)、3.33(95%CI= 1.14,9.73)。在伴有HP感染的群体中进行比较,IL 1B 31位点各基因型未见明显差异;但IL 1B 511T等位基因和IL 1B 511T/T基因型在胃癌组的分布频率高于胃炎组(P0.05),OR值分别为2.16(95%CI= 1.10,4.23)和3.43(95%CI= 1.01,11.62)。结论 在湖南衡阳地区IL 1B 31T/T、IL 1B 511T/T基因型与胃癌发病风险相关,在HP被感染后IL 1B 511T/T基因型可能为湖南衡阳地区胃癌易感基因型。 【关键词】 白细胞介素 1B;基因多态性;胃癌;幽门螺杆菌 胃癌是由环境因素和遗传因素共同引发的恶性肿瘤。在环境因素中,HP感染是主要因素,被认为是胃癌发生的启动因素和促进因素。目前世界上已有半数以上的人被HP感染,但其中大多数为无症状感染者,只有极少数发展成胃癌,因而认为存在这些差别的原因既有HP本身的因素,也有宿主本身的因素。 为此,本实验在湖南衡阳地区以慢性胃炎患者作为对照,探讨该地区患者被HP感染后IL 1B 31和IL 1B 511基因多态性与胃癌发生的关系。 1 和方法 1.1 材料 实验组: 72例胃癌标本均来自2017年3月,2017年12月南华大学附一医院,经病理确诊(贲门癌除外),所有病例术前均未行放疗或化疗,术前2周未口服抗生素治疗。取胃窦部约0.5g癌旁正常粘膜组织(距癌灶5cm)分为2块,1块行快速尿素酶检测HP,1块切成米粒大小置于-80?冰箱冻存。实验组及对照组患者均来自于湖南衡阳地区。 对照组: 70例标本来自本院胃镜室活检组织,无系统性红斑狼疮、炎性肠病、类风湿性关节炎和胃癌家族史,术前2周未口服抗生素治疗,病理确诊为慢性浅性胃炎。取胃窦粘膜组织2块,1块行快速尿素酶检测HP,1块置于-80?冰箱冻存。 1.2 实验方法 1.2.1 基因组DNA的提取 实验组胃窦部癌旁正常粘膜组织和对照组胃窦部粘膜组织,各取米粒大小一块,分别放入无菌EP管中用无菌眼科剪剪碎,按照上海生工DNA抽提试剂盒要求操作,DNA提取后于-20?冰箱中保存。 1.2.2 HP的检测 (1)快速尿素酶法检测HP 试剂盒由福建三强公司提供,按试剂盒要求操作,加入组织样本后5min内颜色逐渐变红为阳性,不变色则为阴性。 (2)PCR检测幽门螺杆菌(HP) UreA基因 试剂盒由上海生工提供,引物参照文献[1]由上海生工合成,上游: 5’GCCAATGGTAAATTAGTT3’;下游: 5’CTCCTTAATTGTTTTTAC3’;扩增出的UreA基因片段长度为411bp。反应体系为25μl,包括PCR Master 12.5μl,上、下游引物各1μl,模板DNA1μl,去离子水9.5μl。反应条件为94? 5min 1个循环;94? 1min,47? 1min,72? 1min,35个循环;72?延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳,100V恒压30min,紫外灯下观察结果。出现411bp橙色条带的为HP阳性,无条带则为阴性,见图1。 (3)诊断标准及检测结果 所有标本经两种方法检测HP,两种方法同为阳性则为HP阳性,同为阴性则为HP阴性,一阳一阴者剔除。最后测出实验组标本52例,对照组标本55例。 1.2.3 基因多态性检测 (1)IL 1B 31和IL 1B 511位点PCR扩增 引物由上海生工合成,序列为: IL 1B 31上游: 5, M: 100bpDNA marker;1 4: HP阳性结果;5: 阴性结果 图1 HP UeaA基因检测结果照片 AGAAGCTTCCACCAATACTC3’下游: 5’AGCACCTAGTTGTAAGGAAG 3’。IL 1B 511 上游: 5’TGGCATTGATCTGGTTCATC 3’下游: 5’GTTTAGGAATCTTCCCACTT 3’。扩增体系均为25μl,包括PCR Master 12.5μl,上、下游引物各1μl,模板DNA 1μl,去离子水9.5μl。反应条件为94? 5min 1个循环;94? 30s,57? 40s ,72? 45s,35个循环;72?延伸10min。产物于2%的琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳,100V恒压30min,紫外灯下观察结果。 (2)PCR扩增产物的限制性内切酶消化 酶切体系为20μl,其中内切酶0.5μl,PCR产物5μl,缓冲液2μl ,去离子水12.5μl,37?水浴4h。琼脂糖凝胶电泳及结果判定: 3%的琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳,100V恒压50min,紫外灯下观察结果。IL 1B 31位点存在C?T的基因多态性现象,为Alu I 酶切位点,基因型 31C/C不被切开,只有239个为一个片段; 31C/T产生239bp、137bp和102bp三个片段; 31T/T产生137bp和102bp两个片段,见图2。IL 1B 511位点也存在C?T的基因多态性现象,为Ava I 酶切位点,基因 511C/C酶切后产生190bp和115bp两个片段; 511C/T产生305bp、190bp和115bp三个片段; 511T/T产生305bp一个片段,见图3。 1.2.4 C?T突变和RFLP分析的可靠性证实 随机挑选电泳图上显示的两种不同纯合子基因型的PCR产物送上海生工进行直接测序,见图4,7。 1.3 统计方法 采用SPSS11.0软件建立数据库,先计算各组各位点基因频率以及等位基因频率,在符合Hardy Weinberg平衡后,通过χ2检验来进行组间比较,P0.05差异有统计学意义。用比值比(OR)及95%可信区间(CI)表示相对风险度。
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