免疫组化

免疫组化 • 脱蜡前60?恒温箱中烘烤1.5到2.5小时。 • 脱蜡至水: 1，组织芯片置于二甲苯1、二甲苯2中各浸泡10分钟: ，100%无水乙醇1、100%无水乙醇2中各浸泡4分钟; 2 3，95%乙醇1、95%乙醇2中各浸泡4分钟; ，90%乙醇1、90%乙醇2中各浸泡4分钟; 4 5，80%乙醇中浸泡4分钟; 6， DW中浸泡4分钟; 7， (磷酸盐缓冲液)PBS洗4分钟。 • 抗原修复; (高压修复) 1， 修复液6.0加热至沸腾 2， 放片270?高压锅喷气后140?修复2min 3， 放气后室温降至37?以下 4， PBS洗3次各4分钟 5， 3%H2O2浸泡10到15 min 6， PBS洗3次各4分钟 • 滴加正常血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。 • 滴加一抗50μl， 4?过夜或者37?1小时。 • 4?过夜后需在37?复温约45分钟。 • PBS洗3次各4分钟; • 滴加二抗(B液)40,50μl，室温或37?0.5到1小时; • PBS洗3次各5分钟; • 滴加二抗(C液)40,50μl，室温或37?0.5小时; • PBS洗3次各5分钟; • DAB显色5,10分钟，在显微镜下掌握染色程度; • 自来水冲洗10分钟以终止反应; • 苏木精复染10分钟，流水洗至水无色; • 0.1%HLC分化5到10秒; • 自来水冲洗10,15分钟; • DW冲洗一次; • 酒精二甲苯脱水、透明; • 中性树胶封片、镜检; • 取图。 注意:1.整个过程中不能干片 2.如用微波修复，修复完毕后待切片在原容器和修复液中冷至室温再行下面的步骤。 其他修复方法:1，微波修复 预热5到6分钟，放芯片，火力80十分钟，停火后闷十分钟，取出开盖自然冷却50?一下。 2，微波2*2修复 预热5到6分钟，放芯片，火力80两分钟，闷5分钟，火力80两分钟，闷十分钟，取出开盖自然冷却50?一下。