.冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定

.冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定 女鞋代理 www.lirenxie.com 【摘要】 ,目的,从冬虫夏草菌丝体发酵液中提取，分离虫草多糖，并建立样品中多 糖的含量测定方法。,方法,采用D101大孔树脂分离冬虫夏草菌丝体发酵液中的多糖;采用 苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量。,结果,虫草多糖的得率为142g/L ;样品中虫草多糖的 含量为706%。 ,结论,方法简便，准确，重现性好，可用于冬虫夏草菌丝体发酵液中虫草 多糖的提取纯化和含量测定。 【关键词】 冬虫夏草菌丝体发酵液 多糖 大孔树脂 分离纯化 含量测定 Separation, Purification and Content Test of Polysaccharide in Zymotic Fluid of Cordycepts Mycelium Abstract:,Objective, To extract and separate polysaccharide from Cordyceps mycelium, and establish content test method of polysaccharide in sample. ,Method, Take foramen magnum resin D101 to separate polysaccharide from the zymotic fluid of Cordyceps mycelium, the phenol-SO2 method to measure polysaccharide in sample. The receiving rate of polysaccharide was 14.2g/L; the content was 70.6% ,Result, from sample. ,Conclusion, The said method is simple, convenient, correct, can be used for separation, purification and content measurement of polysaccharide from the zymotic fluid of Cordyceps mycelium. Key words:zymotic fluid of Cordyceps mycelium; polysaccharide; foramen magnum resin; separation and purification; content measurement 冬虫夏草(Cordyceps)为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc. 寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是高级滋补药品和名贵中药材。随 着它的药用价值不断增大和药用范围的不断扩大，对虫草的需求量也在不断的增加。但是， 由于天然虫草严格的寄生性及生长环境的特殊，且因人为因素的破坏，导致产量急剧下降， 远远不能满足市场的需求。因此，从20世纪70年代起，人类就开始利用现代生物发酵技术 培育虫草菌丝体,1,来代替天然虫草，但是，目前对虫草菌丝体发酵液的开发利用，国内外 还是鲜有报道。大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的新型精制方法,2,。它是一种不 含交换基团，具有大孔结构的高分子材料。自从问世以来，已在环保、化工、医药等领域,3, 得到广泛利用。本研究采用D101大孔吸附树脂从虫草菌丝体发酵液中分离虫草多糖，且用苯 酚-硫酸法测定了样品中多糖的含量，结果表明:本方法操作简单，结果准确，重现性好，为 进一步的研究开发提供了依据。 1 仪器、材料、试剂与样品 女鞋代理 www.lirenxie.com 11 仪器与材料 TD5AWS台式低速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);754型紫外分光光度计(上海精密仪器有限公司);D101大孔吸附树脂(天津制胶厂)。 12 试剂 D葡糖糖(中国药品生物制品鉴定所，批号110833-200503)，乙醇，氯仿，正丁醇，苯酚，硫酸等(均为分析纯)。 13 样品 冬虫夏草菌丝体发酵液由浙江万丰集团制药有限公司提供。 2 方法与结果 21 虫草粗多糖的提取 取虫草菌丝体发酵液730mL，用80%乙醇沉淀3次，室温下放置24h，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，取沉淀物，减压干燥，得粗多糖219g。 22 虫草粗多糖纯化 取上述粗多糖219g，加水66mL溶解，取水溶液，采用sevag法,4,(1/5体积的氯仿，及1/5体积的正丁醇，剧烈震荡，静置分层后，过滤，取水层)去除蛋白质，操作3次后，将水层减压蒸干，用95%乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤粗多糖，减压干燥，得纯化粗多糖184g。 23 虫草多糖精制 231 树脂预处理,5, 取市售D101大孔吸附树脂，用乙醇加热回流洗涤，至洗脱液蒸干后无残留物，反复洗脱保存备用。 232 装柱 以乙醇湿法装柱，用纯乙醇反复洗脱，至洗脱液与水混合不呈白色混浊为止(取1mL乙醇液加5mL水)，再以蒸馏水洗脱至洗脱液无醇味，备用。 233 精制 将纯化的粗多糖溶解(上样量?树脂量=1?8~10)加到已处理好的D101大孔吸附树脂柱上，先用水洗脱至洗脱液无色，流速约为1mL/min，再用5倍量柱体积的30%乙醇、5倍量柱体积的50%乙醇洗脱，流速约为1mL/min，分别收集洗脱液。最后用95%乙醇洗脱至树脂无色，备用。斐林反应,6,表明:多糖主要集中在水洗脱部位，浓缩水洗脱液后得到精制多糖104g，得率为142g/L。