脊痛消胶囊的制备工艺、质量标准及初步稳定性研究（可编辑）

脊痛消胶囊的制备工艺、质量及初步稳定性研究（可编辑） 黑龙江中医药大学 硕士学位论文 脊痛消胶囊的制备工艺、质量标准及初步稳定性研究 姓名:沈庆国 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:孙晖 20060501黑龙江中医药大学硕士学位论文 中文摘要 脊痛消胶囊是黑龙江中医药大学附属医院的临床制剂,由 黄芪、白芍、防己、延胡索、莪术等十三味中药组成。本课题 是在传统中医药理论指导下,运用现代技术及方法,对其进行 了制剂工艺、质量标准及初步稳定性试验研究。为脊痛消胶囊 的新药研发提供依据。 首先根据处方的功能主治及所含有效成分的理化性质,采 用正交实验方法,以多指标综合评分筛选出最佳制备工艺条件 为:川芎、当归、莪术、泽兰加水浸泡后,水蒸汽蒸馏法提取 挥发油。所得挥发油用环糊精进行包合;处方中其余药材加 挥发油提取后所得药渣,%的乙醇提取,回收乙醇后的浓缩液 与挥发油提取所得水提液合并,浓缩减压干燥后与包合物混均, 装胶囊得成品。 其次对脊痛消胶囊质量控制方法进行了研究,以薄层色谱 法对黄芪、白芍、防己、延胡索及莪术进行鉴别;用薄层色谱 扫描法对其君药黄芪所含有效成分黄芪甲苷进行含量测定,黄 芪甲苷在.~. 范围内成良好线性关系,相关系数 .,平均回收率为.%,.%。结果表明,此鉴别 及含量测定方法可用于此制剂的质量控制。 最后对三批中试样品进行了三个月的初步稳定性考察,结 果样品性状、鉴别、’含量测定均符合规定。 关键词:脊痛消胶囊 制备工艺 质量标准 初步稳定性? , ,, ,. . . 叠, ,.. , . ., . ?, . ,, ,.. . ~. .. ? .%..% . . ,, :、.【.‘.黑龙江中医药大学硕士学位论文 :黑龙江中医药大学硕士学位论文 日 舌 腰椎间盘突出症是骨科的常见病和多发病,是腰腿痛的主要 原因。有文献报道腰椎间盘突出症的发病率约占门诊腰腿痛患者 %,该病多发于~岁之间,男多于女,有文献报道男女 之比约为.:,其发病部位以腰、为最多见,腰骶次之, 腰、较少见【】。本病患者痛苦大,有马尾神经损害者可有大 小便功能障碍,严重者可致截瘫,对患者的生活、工作和劳动影 响很大【,早己引起社会上的广泛关注。 腰椎间盘突出症的中药内服疗法给药途径简单方便,使用 安全,疗效好,病人易于接受,特别适用于急性腰椎间盘突出 症患者,具有术后残留症状以及病情严重而又不宣行手术、牵 引、按摩等方法治疗的患者。由于手术适应症和术后并发症的 限制,口服西药治疗本病的毒副作用,以及其它西药内治疗法 的局限性,因此中药内服疗法在治疗本病上有广阔的发展前景。 脊痛消是由纯中药组成,是临床上广泛应用的医院制剂,经 多年临床验证疗效显著。经有关专家论证,认为该方剂组方合 理、用药安全有效。由于方剂组成不同,以及剂型和给药途径 差别,应有针对性地制定优化的制备工艺,从而实现制剂产品 的“高效、速效、长效”以及“体积小、重量小、毒性小”。为 此本文就脊痛消胶囊药学部分中的制备工艺、质量标准进行系 统研究,从而的制剂工艺,有效的质量标准,并保证其具 有良好的稳定性。黑龙江中医药大学硕士学位论文 第一章 综述 腰椎间盘突出症又称腰椎纤维环破裂症或腰椎核脱出症。它 是腰椎间盘发生退行变以后,在外力的作用下,纤维环破裂、髓 核突出刺激或压迫神经根、血管或脊髓等组织所引起的腰痛,并 且伴随坐骨神经发射性痛疼的症状为特征的一种病变。 腰椎间盘突出症病因的研究 腰椎间盘突出症好发于~岁的青壮年,男多于女,椎 间盘是构成脊椎骨的负重关节,是脊柱活动的枢纽,具有稳定 脊柱、缓冲震荡、维持脊柱生理曲度等功能。随着年龄的增长, 以及不断遭受挤压、牵引和扭转等外力作用,使椎盘的水份和 营养成份减少,逐渐发生退行性改变,弹性明显下降,胶原纤 维增多,椎间隙变窄,周围韧带松驰或产生裂隙,椎体间过度 活动不稳等是造成椎间盘突出的内因。腰椎间盘突出外因主要 是腰部外伤及慢性劳损,故在些特殊职业及腰部受寒者易发。 外因通过内因而起作用。椎间盘突出之所以发生在腰部是由于 腰椎负重及活动度较大,。小 .是全身应力的中点,负重及 活动度更大,故最易引起腰椎间盘突出症【。杨克勤【】归纳出 椎 问盘在力学上的几个特点,其中第一个特点指出正常椎间盘受 到垂直的压力一般不会破裂,压力加大常常引起软骨板和椎体 破裂或骨折。第二个特点通过实验证实,脊柱屈曲加旋转时受 力是损伤椎间盘的主要原因。 腰椎问盘突出症病理的研究 一些医家在腰椎间盘突出症的发病机理上作了较深入的研 究和探讨。具有典型代表意义的是戴力扬的研究。戴力扬认为 腰椎间盘突出症是在腰椎退变的基础上,遭受外力引起的。腰 椎间盘的退变必然造成腰椎间盘的应力水平的下降。为此戴力 扬等采用三维有限元法建立了椎间盘退变腰椎活动节段的力学 模型,观察了椎间盘退行性变对腰椎应力分布的影响。发现椎 间盘发生退变后纤维环的应力水平明显减低。同时,他认为腰 椎间盘的应力水平的下降必然导致腰椎前部结构的退变。对此, 黑龙江中医药大学硕士学位论文 戴力扬做实验证实此时椎体中央的应力水平有所下降,而椎体 周边的应力水平则相对较高,认为这一变化具有十分重要的临 床意义。椎体周边应力相对升高有可能加速椎体边缘的骨重建 过程,使椎体边缘产生骨赘,这虽然可以使腰椎重新获得稳定 与新的应力平衡,但也会因此而造成椎管及神经根管的狭窄。 不仅如此,他还认为腰椎间盘的应力水平的下降也必然导致腰 椎后部结构的退变。戴力扬在研究中发现,当椎间盘发生退行 性改变时包括小关节在内的后部结构应力水平均有所上升,韧 带所受拉力也明显增大,加速后部结构的退变过程。导致侧隐 窝、椎间孔狭窄和黄韧带的适应性肥厚【。 治疗方法的研究 治疗腰椎间盘突出症的方法很多,一般有手术疗法和非手术 疗法两大类。手术疗法有经典术式椎间开窗、半椎板切除、全 椎板切除,有限的术式化学溶核术、经皮腰椎间盘切吸术、经 皮椎间盘镜腰椎间盘切除术,经椎体间金属支架融合术,人工 椎间盘置换,椎间盘移植。这些术式疗效较好,但都有适应症和 禁忌症,且术后有一定的副作用和并发症。故临床上手术治疗并 不是本病首选的治疗。事实上,据统计%的本病首发患者 通过非手术疗法就能取得良好的治疗效果。非手术疗法有卧床休 息、手法推拿、牵引、封闭和注射疗法,中草药治疗内服和外 治,综合疗法等、。其中中药内服法在治疗本病上占有重要的地 ’ 位。 .传统的椎间盘手术 年美国哈佛大学医学院和首先通过手术证 实和治愈椎间盘突出症以来,继而各国的椎间盘手术纷纷开展起 来。早期的腰椎间盘手术采用所描述的全椎板切除并 经硬脊膜入路的方法。年改进了这一方法,以半椎板 切除并经硬脊膜外入路取代之。年署介绍了经腹 入路行腰椎间盘切除术,椎体融合术。从椎间盘的手术治疗角度 看,以后几十年内无很大突破。传统腰椎问盘手术方式采用全椎 板切除术,半椎板切除术,单侧上下全椎板切除,在医疗器械发黑 龙江中医药大学帧士学位论文 展的不断推动下,逐渐得到发展完善,以其适应症广泛,疗效肯 定,目前仍为外科治疗腰椎间盘突出症的最主要手术方式【。王 发旺等手术治疗腰椎问盘突出症例,优例,良例,可, 差例。郑季南等【】手术治疗腰椎间突出症 例,总优良率. %。手术效果较为满意,但手术造成的创伤大而且并发症较多。 其主要并发症有感染,血管损伤,神经损伤,脏器损伤,脊膜假 性囊肿,脊柱不稳及腰椎手术失败综合征 ,或等。正由于传统手术存在的弊端太多, 腰椎间盘突出症的微创手术应运而生。 .腰椎间盘的微创手术 ..髓核化学溶解疗法 按胶原酶注射部位可分为:盘内法、盘外法和盘内外法。蒋 煜青 采用盘内外法注射,其中盘内、外胶原酶用量各, 治疗腰椎间盘突出症例,中远期优良率在.%以上,对突出 物较大的脱出型亦可取得满意疗效。但由于胶原酶存在过敏反 应,因此术前准备要充分,手术操作在手术室进行,备有各种抢 救措施,术后半小时内严密观察。该技术在临床应用中取得了较 好的疗效,也出现了一些值得注意的问题,如在酶类药物应用中 存在随意配伍,乱滥用溶剂,违反用药条件等误区:在相关理 论认识上对“盘外”注射理解存在差异等。一般认为?】。该项技 术主要应用于相对年轻,腰椎问盘单纯膨出或突出但纤维坏尚完 整的病例,对于髓核已疝出或游离的病例,以及合并侧隐窝狭窄 的病例,则不适用。 ..经皮腰椎问盘摘除术 治疗原理是通过减少髓核的容量使椎间盘内压力降低,从而 减轻对神经根的压追和刺激。该技术仅有%的病人疗效优良, 其缺点主要是,手术在透视下而非直视下进行,术中无法切除突 出的椎问盘组织,难以得到彻底减压。因此仅适用于单纯性和急 性椎间盘突出症的病例’二。 ..内窥镜下椎问盘切除术 包括后外侧途径、经椎间孔途径、椎板间隙途径内窥镜下黑龙江 中医药大学硕士学位论文 腰椎问盘切除术和经前路腹腔镜腰椎间盘摘除术【。腰椎间盘 镜手术将包含照明及图像传输系统的通道进至椎间盘突出的部 位,然后在电视屏幕监视下,采用特殊的手术器械将椎间盘突 出部分摘除,具有可以直视下手术的优点,适用于各类型的腰 椎间盘突出症。本术式创伤小,能直接解除突出的髓核组织及 侧隐窝狭窄等对神经根的压迫,最大限度地保持了脊柱的稳定 性,具有广阔的发展前景?。 ..显微椎问盘镜下腰椎间盘突出萌核摘除术 随内窥镜技术的发展,脊柱内窥镜技术得以在临床上应用。 加技术由美国开始发展起来,是世纪年代末国际脊柱 外科领域一项崭新微创技术。在治疗腰椎间盘突出症中,是继椎 间盘入路和椎问孔入路之后内镜技术的又一创新,其手术途径是 与传统腰椎间盘摘除术和显微腰椎间盘切除术相同的后方入路。 内窥镜由监视、手术工作通道及手术器械组成。手术在电 视监视下完成,可使用全麻、硬膜外麻醉、局麻等麻醉方式,采 用俯卧位,经形臂定位后,插入扩张管、工作通道,清理椎管 外软组织,椎板问开窗,剥离神经根,切除突出髓核【 。此术 式切口长约.~.,不广泛剥离椎旁肌肉,只少量切除椎板 下缘,扩大椎板问隙,完全保留了脊柱中、后柱结构,不干扰正 常的脊柱生物力学结构,术后不影响下腰椎稳定性,减少了术后 脊柱滑脱、下腰痛等并发症的发生率。技术先进,定位准 确,可完成减压、摘出突出椎间盘的要求,而且创伤小,可有效 减轻患者的痛苦,术后当日即能下床活动。张记恩等认为术后当 天下床活动应谨慎,因为患者术前长时间卧床,腰背肌张力下降, 术后疼痛等症状迅速消除,使其过于乐观,放松了对腰部的保护, 早期下床活动时,可发生急性腰扭伤。一般术后~天即可进行 腰背肌训练。在电视监视系统下更准确辨认和保护硬脊膜、 神经根,可精确分离、清理增生的黄韧带,摘除髓核,操作方便, 避免了开窗术易损伤硬脊膜、神经根及减压不彻底等缺点,使手 术更安全,效果更可靠。但此术式是非直视下操作,若熟练程度 不够,耗时长,患者长时俯卧痛苦,特别是对心肺功能不全的患黑 龙江中医药大学硕士学位论文 泽兰、杜仲、莪术、地龙。 .处方的功能主治 活血利水、破结软坚、改善微循环、消肿止痛等功效。 .根据中医理论对处方的论述 椎间盘的发病机理主要是外伤或劳损等原因,导致局部气 血运行紊乱,正气虚弱,淤血内停,水湿内阻,血水互结经脉 不通,目久失养。正如唐容川指出:“病血者未尝不病水,病水 者未尝不病血”。淤血停滞,气失宣通,可致水液停滞;水湿内 停,气机不畅,可致血行瘀阻,瘀血与水湿既是病理产物,又 是重要致病因素,二者互为因果,交相为患。故《血证论?瘀血》 云:“水病则累血,血瘀则累气”。《血证论?阴阳水火气血论》亦 云:瘀血化水,亦发水肿,是血病而兼水也。在治疗上以《血 证论?汗血》:“血水本不相离,??治水即亦治血,治血即亦治 水”为原则,确立脊痛消的主要功效为益气、活血利水。用气做 动力,同时血水兼理,使血运水行,则经脉畅通并得以滋养。 方中重用黄芪等药补气升阳,以助血水运行。以川芎、当归等 活血祛瘀,调理血脉。应用车前子、泽泻等药利水消肿除湿, 疏通经脉。选择元胡等药缓急止痛,治疗腰腿痛之标,兼助活 血益气利水之药。诸药配伍,相得益彰,共同调理气、血水的 运行输布,疏导并滋养经脉。 .处方中药物的现代研究 ..黄芪 蒙古黄芪含有皂苷类、多糖类、黄酮类、氨基酸类和无机 类等成分。皂苷类有大豆皂苷、黄芪皂苷、 、?、胡萝卜苷【 。还含有黄芪多糖 、黄芪多 糖和黄芪多糖和芒柄花黄素等。 膜荚黄芪含黄芪昔, ,、胡萝卜菅. 、蔗糖、熊竹素. 、谷甾醇、棕榈酸 ? 、胆碱等,还含有葡萄糖醛酸 、粘液质、氨基酸等。 黄芪总苷具有广泛的药理作用,包括?抗病毒:具有体外抗翼龙 江中医药大学硕士学位论文 型人疱疹病毒、抗乙肝病毒、保护被病毒感染心肌细胞的作用; ?保肝:对肝损伤有明显的保护作用,能抑制体外激活肝星状细 胞的增殖和胶原产生,抑制人肝癌细胞株的增殖,诱导肝癌细 胞亡;?抑瘤作用;?改善心脏功能;?抗炎镇痛、抑制滑膜成 纤维细胞增殖。黄酮清除自由基、调节免疫、抗病毒、抑制 血管内皮单层通透性增加等方面的药理作用【。 ..自芍 含芍药苷.%~.% 。芍药花苷? 、牡丹酚,少量氧化芍药苷、芍 药内酯苷、苯甲酰芍药苷、芍 药新苷、还含有糖、淀粉、粘液质、挥发油等。 白芍总苷 ,是白芍的主要活 性成分。抑制炎性因子白细胞介素.,白三烯前列腺 素:的合成与释放,发挥有效抗炎作用。对免疫呈现 功能与浓度依赖性双向调节作用:即低浓度促进,高浓度抑制。 护肝、降酶作用明显。具有中枢性镇痛作用,但不属于 吗啡受体激动剂。解除平滑肌痉挛性收缩,拮抗催产素引起 的子宫平滑肌收缩。 ..芎 含生物碱类川芎嗪,异亮氨酞撷氨酸 酐?,卡琳等。内酯类成分有酚性成分 一丁基苯肤、.亚丁基苯肤、藁本内酯、川芎酞等,酚类及有机 酸类有阿魏酸 、大黄酚、香草醛、香 草酸、咖啡酸、原儿茶酸等叫,另有挥发油类、有机酸酷类, 苯乙酸甲酯类等成分。 川芎嗪拮抗去甲肾上腺素、血管紧张素一等血管活性物质 的缩血管作用,能减轻细胞的缺血性损伤。川芎嗪还具有减 轻,舒张冠状动脉、保护血管内皮细胞、抑制成纤维细胞 和的增殖、调节心肌细胞离子流动、降低肺动脉压、增强 心功能、抗氧自由基等作用,这为川芎嗪用于临床治疗冠心病、 缺血再灌注损伤、肺心病高血压病和动脉粥样硬化等疾病提供黑 龙江中医约大孚:倾士学位论文 了基础‘引。 抗血小板作用实验结果表明,川芍注射液可提高静 止血小板水平,与对照组相比.?。 ..当归 当归中主要含有挥发油、糖类、氨基酸、有机酸等化学成 分‘。挥发油有藁本内酯等。糖类有果糖、蔗糖等。有机酸有 阿魏酸、烟酸、丁二酸等。另外还有氨基酸、香豆素、维生素 等。 小鼠灌胃当归/、/,连续日,对小鼠腹腔毛细血 管通透性增高有抑制作用,并能降低二甲苯所致小鼠耳肿胀率 【 。刘琳娜等‘证实当归挥发油灌胃给予.,./可显著 抑制醋酸所致的小鼠扭体反应,可显著抑制醋酸所致小鼠毛细 血管通透性增高、蛋清致大鼠足趾肿胀及二甲苯所致小鼠耳廓 肿胀。当归具还有广泛的药理作用,如对子富平滑肌和支气管 平滑肌的松弛作用;抑制血小板聚集及促进红细胞的生成;抗 氧化的作用;增强机体免疫力等【?。 ..防己 主要成分为生物碱,总量可达.%,其中主要为汉防己甲 素 、汉防己乙素、轮环藤酚碱一 、小檗胺等。此外,根中尚含黄酮苷、酚类、 挥发油、糖类等【?。 汉防己甲素具有解热镇痛、抗炎、利尿及抗过敏性体克等 作用【?。粉防己碱对人工致热家兔有一定解热作用,汉防己丙 素对大肠杆菌致大鼠发热亦有热作用,电刺激小鼠尾部法及热 。近 板法,实验表明汉防己总碱及甲、乙丙素均有镇痛作用 几年研究表明其药理作用非常广泛,如对肝纤维化、缺氧性肺 动脉高压的防治作用;对矽肺、高血压和心绞痛的治疗作用等, 另外还发现它是一种有效的肿瘤耐药逆转剂。 ..车前子 车前子含有车前子酸、琥珀酸、腺嘌呤及胆碱等。含油脂 .%。油中的脂肪酸主要有棕榈酸、硬脂酸、花生酸、亚油 酸、亚麻酸等。此外,还含车前予胶、各甾醇.?一吡哺葡萄糖黑 龙江中医药大学碗士宇位论文 用小鼠试验,能促进微动脉血流,阻止微动脉收缩。明显促进 微循环作用【。还有抗病原体的作用、增强免疫力、抗肿瘤、 抗炎作用、对消化系统作用。 ..地龙 主要含蚯蚓解热碱、蚯蚓素、蚯 蚓毒素 、次黄嘌呤、黄嘌 呤、腺嘌呤等多种氨基酸、维生素类及无机 盐等。 现代药理研究表明地龙有增强免疫力、促愈合、抗血栓、 溶栓和改善血液循环、降压、解热镇痛等作用?。 ..三棱 含挥发油、淀粉。挥发油中含,二甲基戊烯.呋喃醛、呋 喃醇、.甲基呋喃醛、一羟基苯甲醛、正乙酸、.乙酸基吡咯、 苯乙醇、对.苯二酚、.榄香烯、十六酸乙酯、十六酸、去氢木 香内酯。其中以十六酸、苯乙醇、对苯二酚含量最高。 现代药理研究表明三棱有抗血小板聚集和抗血栓、镇痛及 抗凝血、抗肿瘤、保肝等作用】。其中三棱总黄酮具有抗血小 板聚集、抗血栓、镇痛作用。 ..杜仲 含多种苷,氨基酸及微量元素。此外还含有鞣质、黄酮和 少量生物碱。 ’现代药理研究表明:杜仲有降压、抗肿瘤、补肾、增强机 体免疫、抗氧化、杭衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌抗病毒、利 胆、降血脂、对中枢系统的作用引。 ..延胡索 本品主要含多种生物碱,总量约.%~.%。其中 有原小檗碱型生物碱如延胡索甲素、乙素 此 ?、丙素、丁素等生物碱。 外尚含大量淀粉和少量粘液质,挥发油及树脂等成分。 延胡索的多种制剂均有镇痛作用,特别是醇提浸膏、醋制 流浸膏及散剂均有很强镇痛作用:还有镇静催眠,抗溃疡,抑黑龙 江中医药大学硕士学位论文 制胃酸分泌,增加冠脉流量,保护心机,抑制心机钙离子内流, 保护脑缺血损伤‘引。黑龙江中医药大学顷士学位论文 第二章 脊痛消胶囊制各工艺研究 本方由黄芪等十三味中药组成,主要含有皂苷类、生物碱、 挥肛若.强誊臣:套竖攀。舅制蝴。鬈雀馏熹掣二薹否饔霪 墓盟攀麓薰罐囊谚鏊霁翼莽鐾希磺掰裕看羹磷后飞?囊耀 ?。 围藿篓的瑶魂骏艇扣塑雾霎萋坤摘身刊罚槭釜。 .非手术治疗 蟹爹刚誊。鞋餐型举拳 ..中药 ;.型锚 内治法中医学认为腰椎间盘突出症病因主要有肝肾亏损、 荽耋。芝;妻岛馏孺掣诺囊举:嚣薯钼墨一萋善术优良率可达.% 气滞血瘀和感受风寒等。其临床证候由此分为血瘀、寒湿、湿 热及肝肾亏虚等证。 中药内治本病有明显的活血化瘀,理气软 坚,消炎止痛作用, 可减轻炎性反应程度,缩短炎症期和减轻 结缔组织的形成,促进变性神经纤维的恢复,减轻瘢痕化及瘢 痕对周围神经组织的挤压,以达到缓解疼痛的目的。中医研究 院骨伤科的动物造模实验表明:活血化瘀中药可减轻物理、化 学性神经根炎的炎性反应程度,缩短炎症期和减轻结缔组织形 成的作用‘ 。如 李先梁、夏代宇等认为【”】,活血化瘀的中成 药 治疗腰椎间盘突出症主要是针对其病理改变的微循环障碍、炎 症改变和水肿等为主。许文刚、许学猛认为,活血化瘀、通 络止痛药的中药是治疗腰椎间盘突出症的有效途径之一。蔡桂 英根据患者临床 症状、舌象和脉象将腰椎间盘突出症分为两 型治疗:湿热血瘀肾虚型方用宣痹汤加减;寒凝血瘀肾虚型方 用独活寄生汤加减。 介霭【 】将腰椎间盘突出症分为型:血瘀 型、 痰湿型、气虚型、肾虚型、肝肾不足型,以活血化瘀药物为主 组成。“腰间盘汤”为基本方症加减。洪时清等认为本病病机 是风、寒、湿、热客于肌体,外伤劳损,暴力闪挫,脏腑功能 失调而使气血运行受阻,气滞血瘀,脉络受阻,以归熟汤为基 本方当归、熟地、 五加皮、党参、牛膝、全蝎等 味药调理脏黑 龙江中医药大学硕士学位论文 工艺? 药倍量%乙醇回流提取次,每次,得 提取液,回收乙醇提取液,浓缩成含生药譬/溶液。 工艺 药 倍量%乙醇回流提取次,每次,得 提取液,回收乙醇提取液,浓缩成含生药/溶液。 工艺? 药 倍量%乙醇回流提取次,每次,得 提取液,回收乙醇提取液,浓缩成含生药/溶液。 工艺? 倍量%乙醇回流提取次,每次,得 药 提取液,回收乙醇提取液,浓缩成含生药/溶液。 工艺?川芎、当归、莪术及泽兰水蒸气蒸馏法提取得挥发油, 过滤,得滤液和药渣,药渣与其余药材用倍量% 乙醇提取次, 每次,回收乙醇提取液,回收液与 滤液混合后,浓缩成含生药/溶液与挥发油混合。 ..对小鼠镇痛作用的影响扭体法 取小鼠只,随机分成组,每组只。对照组灌胃给 予蒸馏水./,给药组分别灌胃给予脊痛消个不同 提取方法所得样品液./。连续给予天,于末次给 药半小时后,腹腔注射.%的冰醋酸./只,观察注射后 分钟内小鼠扭体次数并。将空白组与给药组的扭体次数 进行统计学处理,结果见表一。黑龙江中医药大学硕十学位论文 表.脊痛消不同工艺的提取物对小鼠镇痛作用的影响 注., .与空白对照组比较 由表。可知脊痛消组与空白对照组相比,有显著性差异, 由此可推断出其组的药物具有镇痛作用;而、、组与对 照组相比有极显著性差异,所以、、组的药物镇痛效果更 好。 ..对小鼠抗炎作用的影响鼠耳肿胀法 取 只小鼠,随机分成组,每组只。空白对照组灌 胃给予蒸馏水./,给药组分别灌胃给予脊痛消个 不同提取方法所得样品./ 。连续给予天,于末次 给药半小时后,用微量注射器将浓度为%的致炎剂二甲苯均 匀涂布于小鼠左耳的前后两面,小时后,处死小鼠,剪下双耳, 重叠放置,用打空器在近中央部位打下圆耳片,左右耳分 别用电子天平称重,二者重量差即为肿胀度。将空白组与给药 组的肿胀度进行统计学处理。结果见表一囊 图一拟订脊痛消胶囊生产工艺流程 .工艺研究 处方中川芎、当归、莪术和泽兰的主要有效成分是挥发性 的物质,在提取和干燥过程中挥发性物质易损失,为了充分发黑 龙江中医药大学硕士学位论文 挥川芎、当归、莪术、泽兰的药效,拟对挥发油单独提取。设 计工艺如下: ..川芎、当归、莪术及泽兰挥发油提取工艺研究 处方中川芎、当归、莪术、泽兰中含有挥发性成分,设,, 三组,每组取川芎、当归、莪术及泽兰等四味药材共。 组、组、组分别加倍、 倍、 倍量的水,浸泡小时, 在相同的条件下提取挥发油,测定至小时提取的挥发油量。 表.加水量及提取时间对挥发油收量的影响 由表一可知,挥发油最佳的提取工艺为药材浸泡 小时后, 加水倍量,提取小时,挥发油提取率约为.%。 .. .环糊精包合挥发油工艺研究 』芎、当归、莪术、泽兰中所含的挥发油,若直接喷入药粉 中,易挥发而影响制剂质量。 本课题采用.环糊精对挥发油进行包合,从而保持挥发性 成分的稳定性。具体方法为:称取一定量.?真空干燥 ,置具塞三角瓶中,加入蒸馏水沸水浴中配制成饱和水溶液。 待温度降至一定温度,放于磁力搅拌器上恒温搅拌。缓缓滴入 挥发油乙醇溶液%/,加塞继续恒温搅拌到规定时间后, 置冰箱冷藏,抽滤,用少量水及石油醚沸程~?洗 涤至无挥发油气味,?干燥得粉末。 油与一环糊精比例、包合温度以及包合时问是影响包合效 果的主要因素,因此选择上述三个影响因素,各取三个水平, 故选取 正交表进行试验。并以挥发油的利用率,包合物产 率为评价指标,筛选最佳包合工艺条件。因素水平及结果见表., 黑龙江中医药大学硕士学位论文 由重复性验证试验的结果可见该条件包合油利用率和产率 波动不大,油利用率变异系数约为.%,产率变异系数约为 .%,可见该包合工艺条件具有重现性和可操作性。 ...包合结果的气相色谱 ....样品的制备 样品 精密量取挥发油.,石油醚~?定容至 ,过.滤膜,备用。 样品 精密量取挥发油.,一,石油醚~。 定容至,过.滤膜,备用。 样品 称取包合后的样品.石油醚~定容至, 过.滤膜,备用。 样品 精密量脱包后的挥发’油.,石油醚~定容 至,过。滤膜,各用。 ....色谱条件及分析结果 载气:氮气流速:?‘。;柱温:~?;梯度升温: ??~;进样量:“。 八.忱也?从~山?山止。 几~,“ 图一未经包合的挥发油的色谱图黑龙江中医药大学硕士学位论 文 。。 ,. ? .. ,儿?~。。从.山 图.挥发油和?的混合物的色谱图 图一包合物的色谱图 、,? 。.上。。 』. 图一包含后包合物中挥发油的色谱图 图一、图一和图一在均在相同位置出现相同峰形,图.在 相同位置未出现吸收峰,说明挥发油?包合成功,工艺可行。 比较图一和图一,可以看出包合后的挥发油和未经包合的挥 发油均在相同位置出现峰形,说明挥发油的主要成分在包合前 后并未发生变化,且含量无明显变化,工艺可行。 、 ..醇提工艺的研究 根据初步试验结果和生产实践经验,确定溶媒为%的乙 醇溶液,并且找到在提取中影响有效成分含量高低的三个比较 天键的因素:乙醇的用量,回流时间和提取次数。因此选取上 述三个影响因素,各取三个水平,利用 正交表进行试验。黑龙江 中医药大学硕士学位论文 以干膏得率和黄芪甲苷的含量为指标,筛选最佳提取工艺条件, 因素、水平及结果见表.、表.、表.。 表一提取工艺条件因素水平表 ...干膏得率的测定 称取处方/药材,按正交设计进行试验,将乙醇 提取液过滤,合并,滤液减压回收乙醇,移至已干燥称重的蒸 发皿内,在水浴上蒸干后,于?减压烘干,干燥至恒重后, 取出,置干燥器中冷却分钟后,取出称重,计算干膏得率。 ...黄芪甲苷含量的测定 样品制备:取上述干膏约,精密称取,置索氏提取器中, 加甲醇适量,回流提取小时。提取液回收甲醇并浓缩至干, 残渣加水使溶解,移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇振 摇提取次:,,合并正丁醇提取液,用%氨 水提取次,,弃去氨液,正丁醇提取液回收至干, 残渣加水微热使其溶解,放冷,通过?型大孔树脂内 径.长,以水洗脱,弃水液;再以%乙醇 洗脱,弃洗脱液;继以%乙醇洗脱,收集洗脱液, 蒸干,用甲醇溶解并转移到容量瓶中,加甲醇至刻度,作 为供试品溶液。另取黄芪甲昔对照品,加甲醇制成 /的对 照品溶液。 含量测定:薄层色谱扫描法,精取供试品溶液及对照品 溶液斗、?交叉点于同一薄层板上,以氯仿.甲醇一水::放 置过夜的下层溶液为展开剂,氨气饱和分钟后展开,展开后,取出, 黑龙江中医药大学硕士学位论又 显色;上面覆盖同样大小 晾干,喷以%硫酸乙醇溶液,加热 的玻璃板,四周用胶布固定。照薄层色谱法附录薄层扫描 进行扫描:扫描波长:九。,,测量供试品与对照品 吸收度积分值,计算即得。 表.提取工艺正交试验及结果 注:综合加权评分由公式 兰 . , × . . 浸膏收率设计.为理想值,计为%;黄芪甲苷含量设计 ./为理想值,计为%。黑藏江中薤骛大学礤士学位论文 表。提取工艺方差分析 扶以上方菱分析结粱可以看出:函素有显著韵影响,影桶 程度;且 为佳,但考虑到工厂大生产需要节约时 间和越源,降低成本,且因素并无显著影响,故选次佳水平 :,所以工艺象件为转。即嬲倍量戆%麓乙酵,提取 次,每次.小时。 按以上提取工艺条件进行重复性验证试验,结果见下表一。 袁.验证试验 由蘑复性验证试验的结果可见该优化组合条件提取结果浸膏 收率和黄苠甲蒋含量波动不大,于浸膏收率变异系数约为 .%,黄芪甲萤收率变异系数约为.%,可觅该提取工艺条 件是合理可行,合理可行,具有重现性和可操作性。 .浓缩与干燎 键彀滚减墨毯唆乙薛,蓊液继续藏匿浓至祸膏,鬣囊空干漂 箱中减压干燥。 .成型性工艺 瑕处方中骜材,菝上述工艺箍凝、过滤螽,药液减压浓缩至黑龙江 中蹉鲥火学硕学位论文 硼膏,置烘箱? 干燥,于燥后的浸膏粉碎成浸膏粉,加 入包结物鳝混合均匀,装胶鬟。优化屠静脊痛漓蔽囊 工艺流程见图.。 霞一脊痛消蔽囊懿生产工艺濂程黑龙江中医药大学硕士学位论 文 第三章脊痛消胶囊质量标准的研究 药品质量标准对保障人民用药安全、有效具有重要作用, 也是药品现代化生产和质量管理的重要组成部分。作为药品的 中药质量标准的实质,虽然与西药没有区别,但中药有其自身 的特殊性。应建立符合中医用药特色规律的中药系列质量标准 规范体系。为了控制脊痛消胶囊的质量,保证临床用药安全、 有效,对本制剂的质量标准进行了研究。 实验仪器及材料 .仪器 一薄层扫描仪日本岛津,分析天平 ..;.型三用紫外分析仪。 .试剂与药品 甲醇、乙醇、乙醚、石油醚、氯仿、甲酸、醋酸乙酯、正 丁醇均为分析纯北京化工厂;硫酸沈阳化学试剂厂。 、芍药苷 、延胡索 黄芪甲苷. 乙素.中国药品生物制品检定所;粉防己碱 、防己诺林碱西安山川技术有限公司。 生药材均购自哈尔滨药材总公司,经分析鉴定均为正品并达到 药典标准。 实验方法与结果 .定性鉴别 ..黄芪的鉴别 ...供试品溶液的制备 称取本品,加甲醇,超声处理,过滤,滤液 蒸干,残渣加水溶解,加乙醚提取次,, , 弃乙醚液,取水层,用水饱和的正丁醇提取次,, 合并正丁醇提取液,用%氨水洗次,每次,弃氨液, 正丁醇液回收至干,残渣加甲醇定容至;作为供试品溶液。 ...对照药材溶液的制备 称取黄芪药材,加甲醇,超声处理,过滤,黑龙江中医药大学硕士 学位论文 滤液蒸干,残渣加水溶解,加乙醚提取次,, 弃乙醚液,取水层,用水饱和的正丁醇提取次,, , 合并正丁醇提取液,用%氨液洗次,每次,弃氨液, 正丁醇液回收至干,残渣加甲醇定容至,作为对照药材溶液。 ...对照品溶液的制备 称取黄芪甲苷对照品,加甲醇配制成含/对照品溶 液, 作为对照品溶液。 ...阴性对照溶液的制备 称取阴性样,加甲醇,超声,过滤,滤液 蒸干,残渣加水溶解,加乙醚提取次,, 弃乙醚液,取水层,用水饱和的正丁醇提取次,, , 合并正丁醇提取液,用%氨液洗次,每次,弃氨液, 正丁醇液回收至干,残渣加甲醇定容至。 ...薄层色谱条件 薄层板: 硅胶薄层板.%?为黏合剂。 点 样: 阴性样溶液、供试品溶液、对照药材溶液及对 照品溶液各。 展开剂:氯仿一甲醇.水 ::放置过夜,取下层液, 见图.。 展开剂:氯仿一醋酸乙酯一甲醇.水:::放置过夜, 取下层液,见图一。 、 展开方式:氨气饱和 分钟,上行展开;检视:展开, 取出晾干,喷以 %硫酸乙醇溶液, ?加热至斑点显色清晰。黑龙 江中医药大学硕士学位论文 :: 展开剂:氯仿.甲醇.水 放置过夜,取下层液。 图.脊痛消胶囊中黄芪色谱 .黄芪的阴性对照液;.供试品溶液 .供试品溶液 ;.供试品溶液 .黄苠对照药材溶液;.黄芪甲营对照品溶液 展开剂:氯仿一醋酸乙酯.甲醇.水 :::放置过夜,取下层液。图.脊痛消胶囊中黄芪色谱比对 .黄芪的阴性对照液:供试品溶液 .供试品溶液 :供试品溶液 黄芪对照药材溶液;黄芪甲营对照品溶液 ...结果 样品溶液色谱中在与对照药材,对照品色谱相应的位置上显 相同颜色的斑点,阴性对照液在相应的位置上无斑点,说明阴性 无干扰。两种展开剂的分离效果都较为理想,因第一种是药典黑 龙江中医药人学硕士学位论文 所载的展开剂,故脊痛消胶囊中黄芪的定性鉴别采用第~种展 开剂。 ..白芍的鉴别 ...供试品溶液的制备 称取本品,加无水乙醇 ,超声处理,过滤, 滤液蒸干,残渣分别加乙醇定容至【,作为供试品溶液。 ...对照药材溶液的制备 称取白芍药材,加无水乙醇,超声处理,过 滤,滤液蒸干,残渣分别加乙醇定容至,作为对照药材溶液。 ...对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品,加甲醇配制成含/对照品溶液, 作为对照品溶液。 ...阴性对照溶液的制各 称取阴性样,加无水乙醇,超声处理,过滤, 滤液蒸干,残渣分别加乙醇定容至,作为阴性对照溶液。 ...薄层色谱条件 薄层板:硅胶薄层板.%.为黏合剂。 点 样:阴性样溶液、供试品溶液、对照药材溶液及对照 品溶液各/。 展开剂:氯仿.醋酸乙酯.甲醇.甲酸:::.,见图 。 展开剂;醋酸乙酯.甲醇一水::放置分层,上 。 层液作为展开剂,见图. 展开方式:饱和分钟,上行展开;检视:展开,取出晾 干,喷%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。黑龙江中医药大 学硕士学位论文 展开剂:氯仿一醋酸乙酯一 甲醇.甲酸:::. 图一脊痛消胶囊中自芍色谱 .白芍的阴性对照液:,供试品溶液 ;.供试品溶液 供试品溶液 .自芍对照药材溶液;芍药苷对照品溶液 : : 展开剂:醋酸乙酯一甲醇一水 放置分层,上层液作为展开剂 图.脊痛消胶囊中白芍色谱比对 .白芍的阴性对照液;.供试品溶液 .供试品溶液 ;.供试品溶液 .白芍对照药材溶液;芍药营对照品溶液 ...结果 样品溶液色谱中在与对照药材,对照品色谱相应的位置上显 相同颜色的斑点,阴性对照液在相应的位置上无斑点,说明阴性 黑龙江中医药火学硕士学位论文 无干扰。因第一种展开剂的分离效果较为理想,且为药典所载 的展开剂,故脊痛消胶囊中白芍的定性鉴别采用第一种展开剂。 ..延胡索的鉴别 ...供试品溶液的制各 称取本品,加甲醇,超声处理,过滤,滤液 蒸干,残渣加水使其溶解,加浓氨试液调至碱性,用乙醚 、 、 提取次 ,合并乙醚提取液,挥干乙醚,残渣 分别加甲醇定容至,作为供试品溶液。 ...对照药材溶液的制备 称取延胡索,加甲醇,超声处理,过滤,滤 液蒸干,残渣加水使其溶解,加浓氨试液调至碱性,用乙 、 、 醚提取次 ,合并乙醚提取液,挥干乙醚,残 渣分别加甲醇定容至,作为对照药材溶液。 ...对照品溶液的制备 称取延胡索乙素对照品,加甲醇配制成含./对照品 溶液,作为对照品溶液。 ...阴性对照溶液的制备 称取阴性样,加甲醇,超声处理,过滤,滤 液蒸于,残渣加水使其溶解,加浓氨试液调至碱性,用乙 、 、 醚提取次 ,合并乙醚提取液,挥干乙醚,残 渣分别加甲醇定容至,作为阴性对照溶液。 ’ ...薄层色谱条件 薄层板:%溶液制成硅胶薄层板.%? 为黏合剂。 点样: 阴性样溶液、供试品溶液及对照药材溶液各“, 。 对照品溶液 展开剂:正己烷.氯仿.甲醇::,见图.。 展开剂:石油醚,醋酸乙酯: ,见图.。 展开方式:饱和 分钟,上行展开;检视:展开,取出晾 干,以碘蒸气熏至斑点显色清晰,置紫外灯下下检视。黑龙江中医 药大学硕学位论文 展开剂:正己烷一氯仿一甲醇:: 图.脊痛消胶囊中延胡索色谱 .延胡索的阴性对照液;.供试品溶液 .供试品溶液 ;.供试锗溶液 .延胡索对照药材溶液:延胡索乙素对照品溶液 展开剂:石油醚一醋酸乙酯: 图.脊痛消胶囊中延胡索 色谱比对 延胡索的阴性对照液 供试品溶液 .供试品溶液 .供试品溶液 延胡索对照药材溶液 延删索乙素对照品溶液 ...结果 样品溶液色谱中在与对照药材,对照品色谱相应的位置上显 相同颜色的斑点,阴性对照液在相应的位置上无斑点,说明阴性 无干扰。因第一种展开剂的分离效果较为理想,且为药典所载 的展开剂,故脊痛消胶囊中延胡索的定性鉴别采用第一种展开 剂。