气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含量

气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含量 PharmaCyToday?201002Vo1.20No.02? 气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含量 柯春文,梁敏 (广东省湛江市药品检验所,广东湛江524037) 摘要:目的采用毛细管气相色谱法测定砂仁中乙酸龙脑酯的含量,建立砂仁质量控 制体系.方法以水杨酸甲酯为内标,弹性石英毛 细管柱SUPELCOWAXTM一10(30mx0.25mmx0.25m)为固定相,氮气为载气,FID 检测器.结果在该色谱条件下,乙酸龙脑酯 对照品浓度在0.1972,1.1832mg/ml之间与乙酸龙脑酯峰面积和水杨酸甲酯峰面 积的面积比呈良好的线性关系.结论该方法简 单,灵敏,快速,回收率和重复性好,可以作为砂仁的质量控制. 关键词:砂仁;乙酸龙脑酯;气相色谱法;含量 中图分类号:R284.2文献标志码:A文章编号:1673—4610(2010)02—0016—03 AssayingDeterminationofFructusAmomibyGC KEChun—wen,LIANGMin (ZhangjiangInstituteforDrugControl,Zhanjiang,Guangdong524037,China) Abstract:0bjectiveToestablishaGCmethodtodeterminethecontentofboruylacetateinfructusamomi,andtoes. tablishaqualitycontrolsystemforfructusamomi.MethodsSUPELCOWAXTM一 10(30mx0.25mmx0.25Ixm)was used,withnitrogenascarriergas,andFIDasdetector.ResultsThemethodhadagoodlinearityandcorrelationcoeffi- eientintherangebetween0.1972, 1.1832mg/m1.ConclusionThismethodissimple,sensitive,rapid,andhadgood recoveryandreproducibility.Itcanbeusedforthequalitycontroloffruetusamomi. Keywords:fruetusamomi;bornylacetate;GC;assayingdetermination 据文献记载,砂仁中富含挥发油,为其主要有效成 分,而挥发油中又以乙酸龙脑酯含量为多 (53.90%)Ill,《中国药典》砂仁质量标准中仅规定其 挥发油含量:阳春砂,绿壳砂不得<3.0%,海南砂不得 <1.0%.而研究表明不同品种,不同产地的砂仁挥发 油中的乙酸龙脑酯含量差异甚大J,可见以挥发油含 量的高低来评价砂仁药材的质量并不准确,为此,有必 要制定砂仁药材中乙酸龙脑酯的含量标准.目前虽有 不少关于砂仁质量标准研究的报道,但未见用气相色 谱法对不同产地砂仁中的乙酸龙脑酯的含量测定方法 的研究报道.本研究采用气相色谱内标法钡0定砂仁药 材种子团中乙酸龙脑酯的含量,该方法灵敏度高,专属 性强,操作方便. 检测器(FID),CBM一102型数据处理机,Chromato— SolutionLight工作站;梅特勒一托利多AG135电子天平; KUDOS超声清洗仪(功率250W,频率40kHz);上海分析 器械厂800型离心机(功率25w,转速2000r/min). 1.2试剂 甲醇(批号:20071206—2)为分析纯,广州化学试 剂厂. 1.3对照品 乙酸龙脑酯(批号110759—200303),水杨酸甲酯 (批号:707—200107),均购于中国药品生物制品检定所. 1.4供试品 砂仁药材采购自药材公司或到产地采购,所有药材 均经广东省湛江市药品检验所王其新主任鉴定,见表6. 1仪器和试药2实验结果和方法 1.1仪器 SHIMADZUGC一14C气相色谱仪,氢火焰离子化 2.1色谱条件 SUPELCOWAXTM一10(30mx0.25mmx0.25 作者简介:柯春文,主管药师,Tel:0759—3263139,E—mail:ph8188@21cn.com 16 ?2010S01月第20卷第02期?日药学 m)弹性石英毛细管色谱柱,氢火焰离子化检测器 (FID),柱温150~C,进样口温度220%;检测器温度 250~C;分流比20:1,进样量为2l.在上述色谱条件, 35OOq ? 15000 L l'i'''j'''' A.空白溶剂 C.水杨酸甲酯内标溶液 乙酸龙脑酯与内标物水杨酸甲酯均达到基线分离,砂 仁供试品溶液,乙酸龙脑酯对照品溶液,内标水杨酸甲 酯溶液与空白溶剂的GC图谱见图1. B酸龙脑酯对照品溶液 1.乙酸龙脑酯2.水杨酸甲酯 图1砂仁气相色谱图 2.2溶液的制备 2.2.1内标溶液的制备取水杨酸甲酯适量,加甲醇 制成每1ml含3.5mg的溶液,作为内标溶液. 2.2.2对照品溶液的制备取乙酸龙脑酯对照品适 量,精密称定,加甲醇溶液制成每1ml含1mg的溶液. 精密量取5ml,置10ml量瓶中,精密加入内标溶液2 m1,加甲醇稀释至刻度,即得. 2.2.3供试品溶液的制备取砂仁种子团粉末(过三 号筛,不宜久置)2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密 加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250 w,频率40kHz)20min,放冷,称定重量,用甲醇补足减 失的重量,离心(功率25w,转速2000r/min)5min,精 密吸取上清液5ml,置1Oml量瓶中,精密加入内标溶 液2ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得. 2.3标准曲线的制备 精密量取乙酸龙脑酯对照品溶液(1.9721mg/m1) 1,2,3,4,5,6ml,分别置l0ml量瓶中,精密加入内标 溶液(0.6938mg/m1)2ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀, 即得每1ml含0.1972,0.3944,0.5916,0.7888, D.砂仁供试品溶液 0.9860,1.1832mg的梯度溶液.分别精密吸取2l, 注入气相色谱仪,按含量测定的方法测定,以乙酸龙脑 酯的浓度与水杨酸甲酯的浓度之比作为横坐标,测得 的乙酸龙脑酯峰面积与水杨酸甲酯峰面积的面积比为 纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=0.3069x一 0.0163,r=0.9999.结果表明,乙酸龙脑酯对照品浓度 在0.1972,1.1832mg/ml之间与乙酸龙脑酯峰面积和 水杨酸甲酯峰面积的面积比呈良好的线性关系.结果 见表1. 2.4精密度试验 精密吸取"2.2.2"项下制备的对照品溶液2l,按 "2.1"项下方法测定,重复进样6次,计算乙酸龙脑酯 峰面积和内标水杨酸甲酯峰面积的面积比,相对标准 偏差值(RSD)=0.069%. 2.5稳定性试验 取6号砂仁供试品,按"2.2.3"项下方法制备,按 "2.1"项下方法测定,分别在0,2,4,6,8h进样测定. 结果供试品溶液自制备后8h内测定基本稳定,RSD = 0.13%. 17 PharmaCyToday?201002Vo1.20No.02? 2.6重复性试验 取6号砂仁供试品6份,按"2.2.3"项下方法制备,按 "2.1"项下方法测定.结果重复l生良好,RSD=0.69%. 2.7回收率 取同一批已知含量(3号样品,含量2.847%)的供 试品6份,每份取样量为供试品取量(2g)的50%(即1 g),以当前取样含量的1:1,分别精密加入乙酸龙脑酯 表1乙酸龙脑酯线性关系考察结果 对照品溶液(28.501mg/m1)Iml,按"2.2.3"项下方法 制备,按"2.1"项下方法测定,计算乙酸龙脑酯的回收 率.结果平均回收率为103.22%,RSD=0.026%.结 果见表2. 2.8样品含量测定 取10个批次的砂仁样品,按"2.2.3"项下方法制 备,按"2.1"项下方法测定,结果见表3. 3讨论时间分别定为15,2O,30min,其余照"2.2.3"项下方法 操作,结果表明,3个提取时间的结果无明显差别,经综 3.1砂仁一直被历代本草所收载.自1963起收载于合考虑,采用提取20min为宜. 中国药典,以后各版药典对其质量标准都有进一步修3.2.3溶剂用量选择取同一批供试品,分别精密加 改和提高,从原来只收载阳春砂仁,缩砂(进口)2个品人甲醇25,5O,75ml,其余照"2.2.3"项下方法操作. 种,发展到2005年版《中国药典》收载阳春砂仁,绿壳结果表明,用25ml提取含量较低,用50与75ml提取 砂仁和海南砂仁3个品种作为砂仁人药.本次收集样的结果无明显差别,经综合考虑,采用50ml为宜. 品时,有从市面医药公司购买的砂仁药材,也有前往产3.3温度的选择 地采购的,如7号,8号样品为在广东阳春春湾采购,9按文献,选择130~12作为柱温,结果乙酸龙脑酯 号,10号样品为前往云南西双版纳勐腊采购所得.采分离较差,水杨酸甲酯出峰时间过长.后将柱温改为 购过程中,因海南本地也无法购得正品海南砂仁,故本150~C,结果供试品中乙酸龙脑酯峰达到基线分离,峰 次实验缺海南砂仁样品数据.形对称,分离度为1.8,理论板数为22635,水杨酸甲酯 3.2提取条件选择峰保留时间适中(约13mim),达到基线分离,峰形对 3.2.1提取方法选择用超声法和浸泡过夜法对多称,分离度为21.4,理论板数为40909. 份样品进行提取,结果发现在条件相同的情况下,超声3.4本次实验采用的是砂仁种子团粉末进行提取, 法与浸泡过夜法提取效果无明显差异,考虑到浸泡过而没有采用砂仁全果,为考虑到砂仁全果粉碎时有较 夜法操作耗时过长,故选择超声法.多纤维性物质,纤维性物质难以过筛,而导致取样不 篷砂羲;攀l曾元儿,胡冬生砂仁药材质量标准研究.中国中药杂志,_二二二二:;'?:11予?'.. l999,24(11)i6516531:?… 18