【word】 气滞胃痛颗粒质量标准研究

【word】 气滞胃痛颗粒质量标准研究 气滞胃痛颗粒质量标准研究 药物鉴定 气滞胃痛颗粒质量标准研究2011年第20卷第23期 董媛,张赞华,刘莹莹,李忠琼,张雯洁,董兆君 (1.云南省食品药品检验所,云南昆明650011;2.中国人民解放军第三军医大学,重庆400038) 摘要:目的建立气滞胃痛颗粒的质量控制方法.方法采用薄层色谱(TLC)法对气滞胃痛颗粒中的香附,枳壳和甘草进行定性鉴别..采用高 效液相色谱(HPLC)法对气滞胃痛颗粒中的延胡索乙素进行含量测定,色谱柱采用AlhimaCs柱(250mmx4.6nltn,5Ixm),以0.1%磷酸 溶液(用三乙胺调DH至6.0)一乙腈(59:41)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为280niil,柱温为30?.结果枳壳,香附和甘草薄 层色谱法鉴别专属性强,延胡索乙素进样量在0.0501,1.002txg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999,n=7),延胡索乙素平均 回收率为99.94%,RSD=1.60%(n=6).结论所用方法可准确地定性,定量,重现性好,可用于控制气滞胃痛颗粒的质量. 关键词:气滞胃痛颗粒;香附;枳壳;甘草;延胡索乙素;薄层色谱法;高效液相色谱法 中图分类号:11284.1;R286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)23—0024—02 StudyontheQualityStandardofQizhiWeitongGranules DongYuani,ZhangYunhuai,LiuYingyingi,LiZhongqiongi,ZhangWenjie,DongZhaojun2 f,.YunnanInstituteforFoodandDrugControl,Kunming,yunnan,China650011;2.ThirdMedicalUniversity,PIA,Chongqing,China400038) Abstract:0bjectiveToestablishthequalitycontrolstandardofQizhiWeitongGranules.MethodsFructusAurantii,RhizomeofNutgrass Galingale,RadixetRhizomaGlycyrrhizaewereidentifiedbyTLC.ThecontentoftetrahydropalmatineinQizhiWeitongGranuleswasdetermined byHPLC.AlhimaCI8(250mmx4.6mm,5m)columnwasused.Themobilephasewas0.1%phosphoricacid(adjustedpHto6.0with triethylamine)一 acetonitrile(59:41)ataflowrateof1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwasat280nm,thecolumntemperaturewas30?. ResultsThelinearrangewas0.0501—1.002IxgfortetrahydI_0palmatine(r= 0.9999,n=7).ThemeanrecoveryoftetI_ahydr0palmatine was99.94%,RSD=1.60%.ConclusionThemethodissimple,reliable,accurateandusedtocontrolthequalityofQizhiWeitongparticle. Keywords:QizhiWeitongGranules;RhizomeofNutgrassGalingale;FructusAurantii;RadixetRhizomaGlycyrrhizae;tetrahydropalmatine; TLC;HPLC 气滞胃痛颗粒为辽宁本溪三药有限公司的独家品种,以《伤 寒论》中四逆散为主方,添加理气止痛的炙延胡索和炙香附,并结 合现代研究成果和30多位中医专家多年的临床经验协定而成, 具有舒肝理气,和胃止痛的作用,用于肝郁气滞,胸痞胀满,胃脘 疼痛.本品分为有糖型(规格5g/袋)和无糖型(规格2.5g/袋)两 种规格,分别收载于2010年版《中国药典(一部)》1和编号为 YBZ01602004的国家食品药品监督管理局标准中.现行标准中对 白芍和延胡索进行了薄层色谱(TLC)鉴别,并对白芍中芍药苷进行 了含量测定.现参考文献[2—3]增加了处方中枳壳,香附和甘草的 薄层色谱鉴别,对主药延胡索中延胡索乙素的含量采用高效液相 色谱(HPLC)法进行了测定,对全面控制气滞胃痛颗粒的质量提供 了依据,现报道如下. 1仪器与试药 Agilent1200型液相色谱系统,包括1200型四元泵(包含真空 脱气机),1200型VWD检测器,1200型自动进样器,1200型智能 型柱温箱.气滞胃痛颗粒(其中有糖型2l批次,无糖型6批次,方 法学考察所用批次为20091109)均为辽宁本溪三药有限公司生产; 枳壳,香附,甘草对照药材和柚皮苷,新橙皮苷,d一香附酮,延胡索 乙素对照品均由中国药品生物制品检定所提供.试验用水为超纯 水,乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯. 2方法与结果 21薄层色谱鉴别 枳壳:取本品适量,研细,取样(有糖型10g,无糖型5g),加乙 醚50mL,加热回流1h,弃醚液,药渣挥干后用甲醇50mL回流1h, 滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL溶解,用正丁醇萃取3次,每次 25mL,正丁醇液用水洗3次,每次25mL,取正丁醇液蒸干,残渣加 甲醇1mL溶解,即得供试品溶液.另取枳壳对照药材1g,同法制 成对照药材溶液.再取柚皮苷,新橙皮苷对照品,分别加甲醇制成 每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液.再取按处方制法制得的 ? 24? 缺枳壳阴性对照品5g,同法制备阴性对照品溶液.吸取上述溶液 各5txL,分别点于同一硅胶G板上,以氯仿一甲醇一水(13:6:2) 的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铝乙醇溶 液,置紫外光灯(365nn1)下观察.结果供试品溶液色谱中,在与对 照品溶液和对照药材溶液色谱相应的位置上,均显相I亩】颜色的荧 光斑点,而阴性对照品溶液无干扰(图1). 123456789l0l1121314151617l8192021 1—7.不同批次的无糖型供试品溶液8.新橙皮苷对照品溶液 9.柚皮苷对照品溶液1O.枳壳对照药材溶液 11.缺枳壳阴性对照品溶液12—21.不同批次的有糖型供试品溶液 图1枳壳薄层色谱鉴别图 香附:取本品适量(有糖型20g,无糖型10g),置挥发油提取 器中,加水100mL,提取器刻度管中加石油醚(60,90oc)2mL作 溶剂,提取2h,取石油醚(6O,90)部分作为供试品溶液.另取香 附对照药材2g,同法制成对照药材溶液.再取d一香附酮对照品, 用乙酸乙酯制成每1mL含1L的溶液,作为对照品溶液.再取 按处方制法制得的缺香附阴性对照品10g,同法制备阴性对照品 溶液.吸取上述溶液各10,分别点于同一硅胶G薄层板,以 甲苯一乙酸乙酯(9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2,4一二 硝基苯肼试液.结果供试品溶液色谱中,在与对照品溶液和对照药 材溶液色谱相应的位置上,均显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶 液无干扰(图2). 甘草:取本品适量,研细,取样(有糖型5g,无糖型2.5g),JJ口 乙醚50mL,加热回流1h,滤过,弃醚液,药渣挥干,加甲醇50mL, 中国药业ChinaPharmaceuticals 2011年第20卷第23期 12345678910l1121314l5161718192021 1—8,21.不同批次的有糖型供试品溶液9.香附对照药材溶液 10.0【一香附酮对照品溶液11—19.不同批次的无糖型供试品溶液 20.缺香附阴性对照品溶液 图2香附薄层色谱鉴别图 加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL溶解,用正丁醇振 摇提取3次,每次25mL,正丁醇液用水洗3次,每次25mL,取正 丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,即得供试品溶液.另取甘草对 照药材,同法制成对照药材溶液.再取按处方制法制得的缺甘草阴 性对照品2.5g,同法制备阴性对照品溶液.吸取上述溶液各5L,分 别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸(2:2: 0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105oC 加热至斑点显色清晰,分别置紫外光灯(365nm)下观察.结果供试 品溶液色谱中,在与对照药材溶液色谱相应的位置上,均显相同颜 色的斑点,而阴性对照品溶液无干扰(图3). 123456789101112131415I61718192O 1—13.不同批次的有糖型供试品溶液14.甘草对照药材溶液 15一l9.不同批次的无糖型供试品溶液2O.缺甘草阴性对照品溶液 图3甘草薄层色谱鉴别图 2.2含量测定 2.2.1色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:AlltimaC18柱(250mlxI×4.6mm,5m);流动相: 0.1%磷酸溶液(用三乙胺调pH至6.0)一乙腈(59:41);检测波 长:280nm;柱温:30?;流速:1.0L/min.在此色谱条件下,延胡索 乙素对照品,样品和缺延胡索阴性样品的分离色谱图见图4. ABC A.对照品溶液B.供试品溶液C.缺延胡索阴性对照品溶液 图4高效液相色谱图 2.2.2溶液制备 精密称取延胡索乙素对照品适量,加甲醇制成0.1g/L的溶 液,作为对照品溶液A;再精密量取此对照品溶液5mL,置10mL 药物鉴定 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.05g/L的溶液,作为对 照品溶液B.取装量差异项下的本品,研细,取样(有糖型10g,无糖 型5g),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定质 量,超声处理30rain,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量, 摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,置水浴上蒸干,残渣加甲醇适 量使溶解,转移至5mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45Ixm 微孔滤膜滤过,取续滤液,即得供试品溶液.取按处方制法制得的 缺延胡索阴性对照品5g,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照 品溶液. 2.2.3方法学考察 线性关系考察:精密吸取延胡索乙素对照品溶液A0.5,1.0, 2.0,3.0,5.0,7.0,10.0IxL,注入液相色谱仪,按拟订的色谱条件 测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量(g)为横坐标绘制标准曲 线,计算得回归方程Y=868.87+11.475,r:0.9999(n=7).结 果表明,延胡索乙素对照品进样量在0.0501,1.002Ixg范围内与 峰面积呈良好线性关系. 精密度试验:精密吸取对照品溶液B5txL,按拟订的色谱条件 重复进样5次.结果的RSD为0.88%(=5),表明仪器精密度良好. 稳定性试验:吸取同一供试品溶液5IxL,按拟订的色谱条件分 别于0,6,12,20,27h时测定峰面积.结果的RSD为0.84%(n= 5),表明供试品溶液在27h内稳定. 重复性试验:精密称取样品6份,每份约10g,依法制得供试 品溶液,照拟订的色谱条件测定含量.结果的RSD为1.05%(n= 6),表明方法重复性良好. 加样回收试验:精密量取延胡索乙素对照品溶液A6份,每份 2mL,分别置锥形瓶中,低温挥干,精密称取重复性试验项下的细 粉6份,每份5g,分别加入上述6个锥形瓶中,按供试品溶液项下 的方法处理得所需溶液,再按拟订的色谱条件测定含量.计算得平 均回收率为99.94%,RSD为1.60%(n=6). 2.2.4样品含量测定 精密吸取供试品溶液及对照品溶液,依拟订的色谱条件测定, 每批样品测定2份,以外标法计算含量,取其含量平均值.结果均 在0.12,0.26mg/袋范围内. 3讨论 对气滞胃痛颗粒法定标准中未检测的枳壳,香附,甘草进行了 定性鉴别,对延胡索乙素进行了定量测定,所建立的方法专属性 强,重复性好,补充完善了原标准的空白部分,为本品的全面控制 质量提供了科学依据. 在延胡索乙素的含量测定中,发现批问含量存在一定差异,可 能与药材质量和炮制质量有关.由于本品中延胡索是醋炙入药,提示 生产企业应注意控制药材质量及炮制质量,以保证产品的一致性. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科 技出版社,2010:570. [2]邓少伟,程显隆,马双成.安中片的质量控制标准研究[J].药物分析 杂志,2006,26(8):1065—1067. [3]李虹.愈心痛胶囊质量标准的研究及确定[J].药物分析杂志, 1304. 2010.30(7):1301— (收稿日期:2011—06—16) 中国药业ChinaPharmaceuticals?25?