【DOC】注射用胸腺肽-α1在健康人体的生物等效性研究

【DOC】注射用胸腺肽-α1在健康人体的生物等效性研究 注射用胸腺肽-α1在健康人体的生物等效性 研究 CentralSouthPharmacy.August2006,Vo1.4No.4中南药学2006年8月第4卷第4期 动,暂定本品每粒含呋喃唑酮的量为标示量的93,1O7. 3讨论 本文考察了不同流动相:甲醇一水(40:60),0.033 mol?mL磷酸二氢钾一乙腈(60:40)E,甲醇一磷酸盐缓 冲液(pH7.O)一水(170:2:828)E,甲醇一磷酸盐缓冲液 (pH6.8)一水(170:2:828).结果流动相甲醇磷酸盐缓 冲液(pH6.8)一水(170:2:828)保留时间适中,拖尾因 子及对称因子均符合要求,分离度较高,可用于坤净栓的质 量控制. 参考文献 [1]卫生部药品[s].1989:49. [2]高振宏,臧恒昌.高效液相色谱法测定呋喃唑酮的含量及其杂 质的控制口].山东医大基础医学院,2000,14(2):121. [3]江恒,徐丽蓉.胃长舒胶囊中呋喃唑酮含量测定研究FJ].贵 州师范大学(自然科学版),1998,16(4):53—54. m4]郭丹,陈娜娜,晏嫒,等.RP—HPLC测定胃必宁片中呋喃唑 酮的含量口].华西药学杂志,2003,18(1):63—64. (收稿日期:2005—1O一31修回日期:2OO6一O1--18) 注射用胸腺肽一.在健康人体的生物等效性研究 符健,伍海涛(海南医学院药理教研室,海口571101) 摘要:目的研究国产的注射用胸腺肽在健康人体的药物动力学,并评价其与同剂量的进口参比制剂的生物等 效性.采用双周期交叉试验,2O名男性健康受试者分别给予单荆量皮下注射试验制剂或参比制荆1.6 mg.采用HPLC-MS/MS法测定给药后各时间点采集血样的血药浓度,计算主要药物动力学参数,以进口制剂为 参比制剂,计算其相对生物利用度,判断其生物等效性.结果试验制剂中胸腺肽_a的主要药物动力学参数 为(90.95?35.05)gg?L,;为(1.8?0.4)h;AUC0—12为(435.4_4-192.8)gg?h?L,;tl/2为(3.9?1.2)h. 参比制剂中胸腺肽_a1的主要药物动力学参数C?m为(90.774-35.45)Fg?L-;,为(1.94-0.4)h;AuC12为 (427.64-187.8)gg?h?I,;tl/2为(3.94-1.3)h.受试制剂的相对生物利用度F为101.7?8.O.结论2种 制剂具有生物等效性. 关键词:胸腺肽;生物等效性;高效液相色谱一质谱联用 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1672—2981(2OO6)O4一O278一O4 Bi0equiValenceofThymosinAlpha1forinjectionin healthyChinesesubjects FuJian,WuHai-tao(DepartmentofPharmacology,HainanMedicalCollege,Haikou571101) ABSTRACT:OBJECn? T0evaluatethepharmacokineticsandbioequivalencebetweennativeandforeignThymosin Alpha1forinjectioninthehealthyChinesesubjects.METHODSAccordingtoarandomizedcross--overdesign,a singledoseof1.6mgofsubcutaneousinjection(testorreferencepreparation)wasgivento20Chinesehealthyyoung volunteers.Bloodsampleswerecollectedatserialintervalforaperiodof12haftertheinjectionandthedaybeforin— jection.ThymosinAlpha1concentrationintheplasmawasanalyzedbyHPLC-MS/MS.Thepharmacokineticspa— rametersofnativepreparationwereanalyzedtoestimatethebioequivalencetoforeignpreparation.RESULTSThe mainpharmacokincticparametersofthetestdrugandreferencedrugwereasfollows:lTla(1.84-0.4)hand (1.94-0.4)h;C(90.954-35.05)}上g?Iand(90.774-35.45)}上 g?L_;tl/2(3.94-1.2)hand(3.9?1.3)h; AUC0—12(435.4?192.8)gg?h?L一 and(427.64-187.8)g?h?Lrespectively.Therelativebioavailabilityof ThymosinAlpha1was101.74-8.O.CONCLUSIONSThebioequivalenceof ThymosinAlpha1wasconsistent betweenthetestdrugandthereferencedrug. KEYWORDS:ThymosinAlpha1;bioequivalence;HPIC-MS/MS 胸腺肽为一种人工合成的多肽类免疫调节剂,由28 个氨基酸组成,主要用于治疗慢性乙型肝炎,也可作为免疫 增强药用于免疫受损者.我们采用双周期交叉,自身对照的 方法,用液相色谱一质谱法测定人血浆中的胸腺肽浓度, 比较进口制剂与国产制剂在中国健康人群的药物动力学,考 察其相对生物利用度及生物等效性,为临床合理用药提供参 作者简介:符健,男,教授,硕士生导师,主要从事临床药理学工作 Tel:(0898)66893152E-mail:fujian.hnmc@163.com 中南药学2006年8月第4卷第4期 CentralSouthPharmacy.August2006,Vo1.4No.4 考依据. 1材料与方法 1.1药品和试剂 受试制剂:海南中和药业股份有限公司生产的注射用胸 腺肽,批号20050101,规格:每瓶含胸腺肽1.6mg. 参比制剂:美国赛生药品(香港)股份国际有限公司生产的 注射用胸腺肽(El达仙),批号PO01C,规格:每瓶含 胸腺肽1.6mg.胸腺肽对照品:海南中和药业股份有 限公司提供(纯度:99.2,批号:19503B);非那雄胺 (内标)对照品:上海迪赛诺制药有限公司提供(纯度: 99.3O,批号:040301);乙腈为色谱纯(美国Tedia公 司),乙酸胺,甲酸为分析纯,其余试剂均为分析纯. 1.2仪器 菲尼根液质联用仪(LCqAdvantageMax型,美国菲 尼根公司生产);国产旋涡混匀仪. 1.3对象与方法 1.3.1受试对象选择受试者年龄为22~25岁,体重61, 7Okg,身高为165~182cm,无烟酒嗜好;试验前经病史询 问,体格检查和实验室检查HR,BP,ECG,肝功能均正 常,无药物过敏史和药物依赖史,无精神病史以及其他慢性 疾病史.受试者2周内未服用任何药物,受试期间统一进清 淡饮食,禁烟酒.试验经伦理委员会批准.受试者均签 署知情同意书. 1.3.2分组与给药采用双周期随机交叉试验设计,2O名 受试者随机分为2组,每组1O人.每周期试验时间为2d, 共计4d,受试者于每次试验采样前均禁食12h.试验第1d 不给药,采集体内不同时点的空白基础值;试验第2d早晨 在临床观察室皮下注射试验制剂或参比制剂.用药后30rain 统一进低脂肪早餐,试验期间不严格控制饮水量.受试者用 药后避免剧烈运动,也不得长时间卧床,12h内不能离开 临床观察室.第1轮试验于给药后12h结束.试验过程中 由研究人员记录准确采血时间和药物不良反应.经过1周洗 脱时间后开始第2周期试验,方法同第1轮.样品收集与分 析在服药后6周内完成. 1.3.3样本采集根据生物等效性研究指导原则要求和胸 腺肽的人体药物动力学特点设计采血时间点.给药前1d 早晨8时空腹抽取肘静脉血4mI,并于之后的1.0,2.0, 3.0,4.0,6.0,8.0,12.0h分别抽取肘静脉血4mL,用 于测定基础值. 给药当天,早晨8时空腹皮下注射给药,于给药前和给 药后10min,20min,40rain,1.0h,1.5h,2.0h,2.5 h,3.0h,4.0h,6.0h,8.0h,12.0h抽取肘静脉血4 mL.第二周期采血方法同.分离血浆于一2O?保存. 1.4血药浓度测定方法 1.4.1样品处理移取0.5mL血浆于1.5mL离心管中, 加入100I内标(浓度为500/zg?L非那雄胺水溶液), 旋涡振荡10S,10000r?rain离心5min,取上清液500 L,上柱萃取,流程为:1mL甲醇活化——1mL水平衡 —— 上样——含0.1甲酸的水1mL洗涤——含0.1氨水 的甲醇3mL洗脱——6O?下N2吹干——1O0L流动相 (水相一甲醇==80:20)定容,进样1OI. 1.4.2色谱分析条件BDSHypersilC18柱(50rnrrl×2.1 mm,5m,美国热电公司),流动相为水(含50mmo]? L1醋酸胺及0.1甲酸,pH6.O):甲醇混合液,采用梯 度洗脱,O,1min水相一甲醇一80:20,1,2min比例变为 水相一甲醇=20:80,2,4min水相一甲醇=20:80,4min 后立即变为水相一甲醇一80:20,保持2rain,流速0.2mL ?min一,柱温为4O?,进样量为5L. 1.4.3质谱条件电喷雾电离源(ESI),电离源电压;5.1 kV,喷雾气流速为44个单位,毛细管中压:llV,毛细管 温度:275?;MRM(选择反应监测):胸腺肽: 1036.5,1037.5;扫描时间:200ms;非那雄胺(内标): 373.4/3o5.3;碰撞能量:44V;扫描时间:200ms. 1.5数据处理 受试者在每周期给药前1d按给药后的取血点,抽取整 时间点的空白血,进行体内基础值的测定,用给药后血浆中 药物浓度减去相应空白基础值进行药物动力学计算.以 3P97软件计算主要药物动力学参数.和用实测值; Aucz用梯形面积法求得,以消除相血药浓度的对数值与 对应点时间的线性回归求算胸腺肽的体内消除半衰期. 以Wilcoxon方法作非参数检验,将C,AuC0—12经对 数转换后进行方差分析,双单侧t检验和(1一A)置信区间 分析,以评价2种制剂的生物等效性. 2结果 2.1方法的专属性 胸腺肽一al及内标通过色谱柱后与血浆杂质可获得较好 的分离,血浆中无内源性物质干扰测定.该检测方法具有灵 敏度高,保留时间短等优点.质谱分析结果如图1所示,胸 腺肽的保留时间约为2.2rain. 2.02.5 吣 ,fmin) B D ,ffni吣 t(min) E 图1典型色谱图 A.胸腺肽选择离子色谱图,B.内标选择离子色谱图, C空白血浆+胸腺肽一n1选择离子色谱图,n空白血浆+ 标准+内标选择离子色谱图,E.受试者服药后血浆样品选 择离子色谱图 一0f_ 000000 08642 v CentralSouthPharmacy.August2006,Vo1.4No.4中南药学2006年8月第4卷第4期 2.2线性范围和最低定量限 在空白血浆中,加入含胸腺肽IoH的标准溶液,配制成 浓度分别为7.8,15.6,31.5,62.5,125.0,250.0,500.0 g?I『的标准系列,然后参照”样品处理”余下步骤制成 标准系列样品,测定胸腺肽IoH峰面积/内标峰面积,并与浓 度进行回归,得标准曲线方程y一0.0119x一0.1655,r2 一O.9938.以标准曲线线性范围的最低点浓度作为定量限, 最低定量限为7.8g?L一. 2.3样品回收率 分别配制高(250?L),中(62.5?L),低 (15.6g?L)3个浓度的标准血浆,精密加入内标物质, 按”1.4.1”项下进行操作,将样品的胸腺肽峰面积/内 标峰面积比用标准曲线进行定量,所得的值除以用流动相配 制的该浓度样品测得值为胸腺肽一a的萃取回收率.在浓度 分别为250,62.5,15.6Fg?L1时样本的绝对回收率分别 为52.5,51.4,54.6. 2.4准确度与精密度 分别配制高(250?L1),中(62.5?L1),低 (15.6p.g?L1)3个浓度的标准溶液,直接进样,其回收率 为97.38,97.52,99.O6%;用混和空白血浆将胸腺肽一 a标准储备液配制上述3种浓度的标准血浆各5份,按 “1.4.1”项下操作,计算批内相对标准差(RSD).高浓度, 中浓度的批内RSD均<10,低浓度的批内RSD<15; 样品测定期间每批样品配制高,中,低不同浓度标准血浆作 为质控样品,测定批间RSD,进行质量控制,得高,中, 低3个浓度的批间RSD均<1O,符合质控要求. 2.5稳定性试验 将浓度为250g?L的对照品溶液连续进样5次,比 较胸腺肽峰面积的变化,考察仪器稳定性;配制浓度为 250g?L的血浆样品,按血样处理方法项下处理,处理 后的样品在放置0,1,6,12,24h后进样分析,通过考察 胸腺肽的浓度变化来判断处理后样品室温放置稳定性; 配制3mL浓度为125g?L1的标准血浆样品,取0.5 mI,按样品处理方法处理血样,测定胸腺肽的含量,余 下样品置于一2O?冷冻,并分别于放置的第5,第1O,第 15,第2Od时取出,室温融解后取0.5mL?次_.,按前法 操作,测定胸腺肽的含量;结果仪器稳定性符合测试要 求,样品在24h内稳定,于上述储藏条件经反复冻融不影 响血浆中胸腺肽一a的含量测定. 2.6药物动力学参数 2O名健康志愿者皮下注射1.6mg胸腺肽后的血药 浓度一时间曲线如图2所示,计算得主要药物动力学参数见 表1. 140 —120 100 80 言460O 20 0 图2皮下注射胸腺肽一dl后的血药浓度一时间曲线(一2O) 表1胸腺肽一m的药物动力学参数(;?s) 2.7方差分析与生物等效性检验 主要药物动力学参数经方差分析显示,2种制剂间无显 着性差异(P>0.05);试验制剂C伽的9O可信区间为 94.92,1O5.36,未超出参比制剂Gm7O%,143的范 围.试验制剂AUG-.z的9O%可信区间是98.91%, 105.22,也没有超出参比制剂AUG—l28O%,125的范 围.将C舳对数化后行双单侧检验,tn及t.值分别为 11.852和11.886,均大于单侧t?5(1.734).将AUC12 对数化后行双单侧检验,th及tl值分别为13.633和 9.101,均大于单侧t5(1.734).经Willcoxon检验, 不同制剂间无显着性差异(z一--0.401,P=O.688).试验 制剂的相对生物利用度F为101.7?8.O. 3讨论 本试验表明,胸腺肽皮下注射后的体内过程符合一 室模型;试验结果与文献相近[1].胸腺肽?为内源性的免 疫物质,在正常人体内会随昼夜节律有所波动?2].为避免内 源性物质干扰测定结果,本试验将志愿者在每周期给药前1 d按给药后的取血点,抽取整时间点的空白血,进行体内基 础值的测定,再用给药后的测得的浓度减去基础值得到血药 浓度;内源性胸腺肽浓度有较大的个体差异,但周期间差异 较小,为此须严格齐同双周期试验条件.胸腺肽一旺1以往用 酶联免疫法测定?1],参考文献[h36]建立了检测方法,能够 满足药物动力学研究的要求. 本试验研究结果显示两种制剂的达峰时间和消除半衰期 基本一致;受试剂,参比剂浓度达峰时间相当;经方差分析 及双单侧t-检验进行生物等效性评价,表明该公司的胸腺肽 与进口制剂在临床可视为生物等效. 致谢:感谢海南中和药业股份有限公司提供样品. 参考文献 ,,—,,,,—, 1-1]孙培红,周颖,王惠珍,等.胸腺肽粉针剂在健康志愿者体内 的生物等效性研究I-J].中国临床药理学杂志,2003,19 33. (1):30— [2]钟英英.胸腺肽的研究现状和临床应用[J].中南药学, 2005,3(2):116—118. I-3]张海松,刘卫红,张基展,等.口服胸腺肽微球在大鼠体内的 药代动力学和生物利用度I-j].中国生化药物杂志,2000,21 (1):15—17. [4]张海松,邹晓军,,等.胸腺肽在家兔体内的药代动力学 I-j].中国生化药物杂志,2001,22(3):132—133. [5]RostKL,WierichW,MasayukiF,eta1.Pharmacokineticsof thymosin6tlaftersubcutaneousinjectionofthreedifferentfor— mulationsinhealthyvolunteers[J].IntJClinPharmacol 中南药学2006年8月第4卷第4期 CentralSouthPharmacy.August2006,Vo1.4No.4 Ther,1999,37(1):51—57. [6]MolineroP,SouttoM,BenotS,eta1.Melatoninisresponsi— bleforthenocturnalincreaseobservedinserumandthymusof thymosin0tlandthymulinconcentrations:observavationsinrats andhumans[J].JNeuroimmunol,2000,103(2):180—188. (收稿日期:2OO6一O4—14修回日期:2OO6一O5—29) 高效液相色谱法测定五酯分散片中五昧子酯甲的含量 胥新元,彭艳梅.,胡薏冰.(1.湖南省中医药研究院附属医院,长沙410006;2.湖南省中医药研究院中药研究所, 长沙410013) 摘要:目的建立五酯分散片中五味子酯甲的高效液相色谱法测定方法.方法采用KromasilODS-C18(250mrn ×4.6mm,5色谱柱,流动相为四氢呋喃一水(:,检测波长为,流速为1.?,,柱温,urn)3565)254nm0mLmin 为4O?.结果五味子酯甲在125.2,1002ng具有良好的线性关系,r=0.9999;平均回收率98.72,RSD为 0.72.结论该方法操作简单,重现性好,适用于五酯分散片中五味子酯甲的含量测定. 关键词:高效液相色谱法;五酯分散片;五味子酯甲 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1672—2981(2006)04--0281--03 DeterminationofwuweiziesterAinwuzhidispersibletabletbyHPLC XuXin-yuan,PengYan—mei,HuYi—bing(1.HospitalAttachedtoHunanA cademyofTraditionalChineseMedi— cine&MateriaMedica,Changsha410006;2.HunanAcademy0厂TraditionalChineseMedicine&Materia Medica,Changsha410013) ABSTRACF:O 珏,ECFIVEToestablishamethodforthedeterminationofwuweiziesterAinwuzhidispersibletablet byHPLC—EISD.METHODSTheHPIsystemconsistedofKromasilODS-C18column(250mm×4.6mm,5 um).Themobilephasewastetrahydrofuran-water(35:65).Thedetectionwavelengthwas254nnlandtheflow ratewas1.0mL?min,.Thecolumntemperaturewas40?.RESULTSTheli nearrangeofwuweiziesterAwas goodwithin125.2, 1002ng,r=0.9999,theaveragerecoverywas98.72andRSDwas0.72.CONCLUSIONS ThismethodiSsimple.feasibleandreproducible.Itcanbeusedforthequalitycontrolofwuzhidispersibletablet. KEYW0RDS:HPLC;wuzhidispersibletablet;wuweiziesterA 五酯分散片是南五味子醇浸膏通过现代成型工艺制备而 成的,主要含五味子酯甲,是由收载于《国家药品监督管理 局标准wS-10557(ZD-0557)-2002(试行)》中的片剂通过 剂型改造而成.本品能降低血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT),可用于慢性,迁延性肝炎ALT升高者.五味子酯 甲易溶于苯,氯仿和丙酮,可溶于甲醇,乙醇,难溶于石油 醚,不溶于水,其甲醇溶液有较强的紫外吸收,原质量标准 中含量测定方法为紫外分光光度法,样品前处理烦琐,现通 过参考文献l1]和试验建立本文HPLC法测定样品中五味子 酯甲的含量,样品前处理简单,误差小,专属性强. 1仪器与试药 Waters高效液相色谱仪(检测器型号:SPD一1OAVP, 自动进样器:S几一10ADVP,柱温箱:ST()_一1OAVP).五 味子酯甲对照品(中国药品生物制品检定所,纯度为 100,批号为111529—200001).五酯分散片(湖南大自然 制药有限公司,规格:0.35g?片).四氢呋喃,乙腈为 色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件 KromasilODS-C18(250mm~4.6mm,5胂)色谱柱; 流动相为四氢呋喃一水(35:65);流速为1.0mL?min,; 柱温为4O?;检测波长为254nn4. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备精密称取五味子酯甲对照品适 量,加甲醇制成含五味子酯甲2O肚g?mL叫的溶液. 2.2.2供试品溶液的制备取本品1O片,精密称定,研 细,精密称取适量(相当于五味子酯甲7.5mg),置具塞锥 形瓶中,精密加入5OmL甲醇,称定重量,超声处理(功 率250W,频率40kHz)30roan,放冷,再称定重量,用甲 醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密移取续滤液1mI于 10mI容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得. 2.2.3阴性对照液的制备取缺南五味子的阴性样品,按 作者简介:胥新元,男,副主任药师,主要从事医院药学工作Tel:(0731)8902806