宁波第九医院检验科管理文件SOP

宁波第九医院检验科管理文件SOP 宁波市第九医院检验科管理文件 分析项目SOP文件 编号:LJ-FXXMSOP-02 版本:2010-A/0 生效日期:20101001 生化室操作程序 (SOP) 2008年12月 1 宁波市第九医院检验科管理文件 分析项目SOP文件 编号:LJ-FXXMSOP-02 版本:2010-A/0 生效日期:20101001 文件首页 文件类别:分析项目SOP文件 文件编号:LJ-XM/YQSOP-02 文件版本:2010年第一版，未修改。 启用日期:2010年 10 月01日 有效时间:至2012年09月30日 发出文件数:2份。分别由科主任和生化室存放与使用。 文件编写者:王旭晓 文件签发者:刘 波 文件有效期年 月 日。复审后自动延长有效期两年。 复审通过审批者: 2 宁波市第九医院检验科管理文件 生化项目sop目录 3 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清总蛋白测定(缩写TP);组合项目申请:肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15?,25?)下可稳定一周，普通冰箱中(2?,8?)稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2?,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 双缩脲法。碱性溶液中的铜离子和蛋白质或多肽分子中的肽键反应，生成紫红色络合物，络合物在波长540nm处的吸光度和蛋白质的浓度成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:双缩脲法测定总蛋白试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:保存于2-8?，避光保存可稳定12个月。开盖后放于仪器的 4 试剂仓冰箱中至少稳定30天。 4.3 试剂盒准备:液态试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分 4.4.1 R1:氢氧化钠400mmol/L，酒石酸钾钠89 mmol/L 4.4.2 R2:硫酸铜24.3 mmol/L，碘化钾61 mmol/L，氢氧化钠400mmol/L，酒石酸钾钠89 mmol/L。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，2个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间7天，批校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 化学原理:双缩脲法;测定原理:比色法;测定方法:一点终点法;反应方向:正反应;单位:g/L;校准模式:线性;校准周期:14天;校准点:2个;波长: 主波长540nm，辅助波长700 nm;样本量:3.0μl;试剂:R1 150μl;测定时间:4.0-7.7sec;分析范围:10-120g/L。 10 结果计算 总蛋白浓度(g/L),(ΔA标本/ΔA标准) × 校准液蛋白浓度 (g/L) ΔA:ΔA,A546nm ,ΔA660nm; 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 5 11.2 报告范围:2,150g/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:血清/血浆:批线性范围:2,150g/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:甘油三酯达11.3mmol/L时影响小于2%，血红蛋白达5g/L时影响小于9%，胆红素达547umol/L时影响小于10%。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围:60,80 g/L。 14 临床意义 14.1 血浆总蛋白包括血浆中所有的蛋白质，其中主要有白蛋白和球蛋白两大类。血浆蛋白主要的生理功能是维持血浆胶体渗透压和pH值、运送多种物质的载体、参与凝血和抗凝血、免疫作用和营养作用等。 14.2 TP,ALB,球蛋白(含量)，并可由此得出A/G比值。 14.3 血清TP增高 (1)多数反映高免疫球蛋白血症。 1)各种单克隆性免疫球蛋白病，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症等。 2)自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿病、类风湿性关节炎。 (2)多种原因引起的明显脱水使血浆浓缩，致TP相对增高。这种情况A/G比值变化不大，为假性蛋白增多血症。 14.4 血清TP降低:多反映白蛋白合成减少或蛋白质丢失。 (1)肝脏合成减少:各种慢性肝病，吸收不良综合症，蛋白质营养缺乏等。 (2)蛋白质尤其是白蛋白丢失:肾病综合症、急性肾炎和慢性肾炎从肾脏丢失;严重烧伤从创面丢失;溃疡性结肠炎等胃肠疾病从胃肠道丢失;大量失血和浆膜腔渗液也可使蛋白丢失。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负 责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与白蛋白、血清蛋白电泳、丙氨酸氨基转移酶等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件 17.1 Hitachi 7600型自动生化分析仪仪器标准操作规程。。 6 17.2 生化检验室参考文献 18.1 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社， 2004. 18.2 北京利德曼生化技术有限公司双缩脲法测定总蛋白试剂盒说明书。 18.3 Kaplan，L.A.and Pesce，A.J.(Des)，Clinical Chemistry Theory，Analysis and Correlation，2nd Edition，C.V. Mosby Co.，1989. 18.4 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006. 19 本SOP变动程序 任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。 20 本SOP涉及的记录与单 20.1 试剂装载 20.2 试剂质量记录表 20.3 质控记录 20.4 失控及失控处理记录 20.5 检验结果审核记 7 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清白蛋白测定(缩写ALB);组合项目申请:肝功能测定项目组合。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定一周，普通冰箱中(2,8?)稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 溴甲酚绿法。在pH 4.0的溶液中，溴甲酚绿与白蛋白立即反应形成绿色复合物，此复合物在波长600nm处的吸光度与白蛋白的浓度成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:溴甲酚绿法测定白蛋白试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:保存于2,25?，不开盖情况下至标签的失效期。开盖后放于仪器的冰箱中至少稳定30天。开盖后避免污染。变质指示:当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 4.3 试剂盒准备:液态单试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:琥珀酸盐缓冲液(pH 4.2)100mmol/L，溴甲酚绿0.2mmol/L，含有 稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.(Cat.No.155211)，其 8 白蛋白浓度值可溯源至国际标准参考物质(CRM)470。 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，2个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 7 适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:1 Point End;Reaction Time:5;Assay Point:7;Wave Length Sec:700;Wave Length Prim:600;Sample N:2.0，D:25,4.0,75，I:4.0;R1:200;Abs. Limit:32000 Increase;Calibration Type:Logit,Log 4P;Point:4;Span 3;Time Out:Full 20;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1 ABS Limit:44300 44400;Unit:g/L;Technical Limit:10 60。 10 结果计算 计算公式:白蛋白浓度(g/L),(A标本,A空白)/(A标准,A空白)× 校准液 白蛋白浓度(g/L) 注:根据双波长测定，A ,A340nm,A700nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围:19,60g/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:10,70g/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:甘油三酯达11.3mmol/L时影响小于10%，血红蛋白达4.5g/L时影响小于10%，胆红素达684μmol/L时影响小于2%。 13 参考范围及医学决定水 平 13.1 参考范围:35,57g/L。 13.2 医学决定水平 13.2.1 20 g/L:低于此值，肝病患者提示严重预后不良。还应测定尿蛋白，以 9 查明有无过多的蛋白丢失。 13.2.2 35g/L:此亦为参考范围下限，凡低于此值时，各种引起白蛋白降低的因素均应列入考虑范围，如肾病、肝功不全、严重的营养不良、急、慢性炎症、恶性肿瘤等。 13.2.3 57g/L:在此值以上的，应考虑脱水的可能性，并进行红细胞比积测定，以检查其是否增高。 14 临床意义 14.1 血浆白蛋白的生理功能很多，包括营养、维持渗透压、是血管结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与总蛋白、血清蛋白电泳、丙氨酸氨基转移酶等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (本项不作规定) 17 有关引用程序与文件 17.1 Hitachi 7600型自动生化分析仪仪器标准操作规程。 17.2 生化检验室参考文献 18.1 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社， 2004. 18.2 北京利德曼生化技术有限公司白蛋白测定试剂盒说明书。 18.3 Kaplan，L.A.and Pesce，A.J.(Des)，Clinical Chemistry Theory，Analysis and Correlation，2nd Edition，C.V. Mosby Co.，1989. 18.4 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006. 19 本SOP变动程序 任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。 20 本SOP涉及的记录与表单 20.1 试剂装载记录表 10 20.2 试剂质量记录表 20.3 质控记录 20.4 失控及失控处理记录 20.5 检验结果审核记录 11 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清总胆红素测定(缩写TBIL);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:血液胆红素见光易分解，标本注意避光保存。室温(15,25?)下可稳定2h，普通冰箱中(2,8?)稳定12h。-15,-25?度可以稳定3个月,4个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 为矾酸氧化法。在表面活性剂存在下，胆红素被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，在一定波长处测定吸光度的减少，与胆红素的浓度成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:矾酸氧化法测定总胆红素试剂盒，由日本和光公司出品。 4.2 试剂盒保存:保存于2,8?，试剂未启封情况下可稳定至标签的失效期。启封试剂在仪器的试剂仓冰箱中至少稳定30天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或空白吸光度,0.5时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.3 试剂盒准备:即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:Tris-HCl缓冲液(pH 8.2) 50 mmol/L，化学氧化剂 80 mmol/L。含有表面活性剂和保护剂。 12 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的校准液(Cat.No. C.f.a.s.)，其胆红素浓度值可溯源至美国国家标准技术研究所(NIST)标准参考材料(SRM)470。 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，3个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full，7天;Blank，1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的一个定值质控血清，产品号为 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:2 Point End;Reaction Time:10;Assay Point:16,34;Wave Length Sec:660;Wave Length Prim:405;Sample N:4.6，D:6.0,4.6,94，I:9.0;R1:117 ;R3:39;Abs. Limit:32000 ;Increase;Calibration Type:Linear;Point:6;Span :3;Time Out:Full 160， Blank 20;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:0 100;Unit:μmol/L;Technical Limit:1 520。 10 结果计算 计算公式:总胆红素浓度(μmol/L),标本A(520,660)nm 校准液总胆红素浓度(μmo l/校准液A(520,660)nmL) 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围:1.7,1026 μmol/L。超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:总CV 0.8%,3.6%。 12.2 准确度:回收率98.7,,101.5,。 13 12.3 线性范围:1.7,1026 μmol/L。 12.4 方法的有限性及干扰因素:甘油三酯达10.2mmol/L时影响小于6%，血红蛋白达250mg/L时影响小于10%。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围:3,22 μmol/L 14 临床意义 14.1 血清总胆红素和结合胆红素多用于黄疸的诊断和鉴别诊断。由于胆红素和肝脏功能密切相关，总胆红素是重要的常规肝功能指标。 14.2 各种原因引起的黄疸都有血清总胆红素增高，如胆汁性肝硬化、胆道梗阻、阻塞性胆红素、肝细胞性胆红素，如肝炎、肝硬化，溶血性黄疸、新生儿胆红素或输血错误。 14.3 血清总胆红素可作为暴发型肝衰竭(FHF)和自体免疫性肝炎(AIH)预后死亡的独立危险因子，TBIL,255µmol/L预测FHF预后死亡的敏感性为77.5%，特异性为46.8%。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与直接胆红素(DBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷胺酰转移酶的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 16.1 ,255µmol/L为应引起临床重视的紧急值，可能有较严重的肝细胞坏死或暴发型肝衰竭的情况。 16.2 处理程序 16.2.1 检测人员立即报告审核者。 16.2.2 审核者首先根据审核程序，分析质控、定标、试剂的情况是否正常，当天其他已做标本本项目的总体情况有无异常，确认实验有关的基础是在正常状态中。 16.2.3 出现紧急值的标本有无异常，该标本其他相关项目有无异常，尤其是该患者其他肝功能的情况。 16.2.4 对该标本进行一次重复测定，确认紧急值是否重现。 16.2.5 报告技术质量主管及科主任，立即与临床联系，了解临床相关情况。 16.2.6 确认此紧急值是可报告的，由技术主管或科主任立即电话向主管临床医生报告，并作好电话报告记录，包括电话报告时间和对方接听人员的标识。 16.2.7 及时签发正式检验结果报告。 17 有关引用程序与文件 17.1 Hitachi 7600型自动生化分析仪仪器标准操作规程。 17.2 生化检验室Tietz，N.W.(Ed)，Fμndamentals of Clinical Chemistry，3rd Edition，W.B.Saμnders，1987. 14 18.2 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社， 2004. 18.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006. 19 本SOP变动程序 任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。 20 本SOP涉及的记录与表单 20.1 试剂装载记录表 20.2 试剂质量记录表 20.3 质控记录 20.4 失控及失控处理记录 20.5 检验结果审核记录 15 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清结合胆红素测定(缩写DBIL);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:血液胆红素见光易分解，标本注意避光保存。室温(15,25?)下可稳定2h，普通冰箱中(2,8?)稳定12h。-15,-25?度可以稳定3个月,4个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 矾酸法测定结合红素。结合(直接)胆红素在间接胆红素抑制剂和表面活性剂的存在下，被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，在一定波长处测定吸光度的减少与结合胆红素的浓度成正比。。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:矾酸法测定结合红素试剂盒，由日本和光公司出品。 4.2 试剂盒保存:保存于2,8?，试剂未启封情况下可以稳定至失效期。启封试剂在仪器的试剂仓冰箱中至少稳定30天。 4.3 试剂盒准备:即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:酒石酸缓冲液(pH 3.0) 200 mmol/L，化学氧化剂 4.0 mmol/L。含有表面活性剂和保护剂。 16 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的校准液(Cat.No.)，其结合胆红素浓度值可溯源至美国国家标准技术研究所(NIST)标准参考材料(SRM)470 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，3个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full，7天;Blank，1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定质控血清。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 10 主要分析参数 Assay Code:2 Point End;Reaction Time:10;Assay Point:16,34;Wave Length Sec:660;Wave Length Prim:570;Sample N:6，D:6.0,6,94，I:9.0;R1:117 ;R3:39;Abs. Limit:32000 Increase;Calibration Type:Linear;Point:6;Span :3;Time Out:Full 160，Blank 20;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1 ABS Limit:0 100;Unit:μmol/L;Technical Limit:1 180。 10 结果计算 计算公式: 结合胆红素浓度(μmol/L),标本A(570,660)nm 校准液结合胆红素浓度(μ校准液A(570,660)nm mol/L) 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围:1.7,342μmol/L。超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:总CV 2.9%,4.8% 。 17 12.2 准确度:回收率99.2%,106.7%。 12.3 线性范围:1.0,180μmol/L。 12.4 方法的有限性及干扰因素:甘油三酯达到10.2 mmol/L时影响小于10%，血红蛋白达到200mg/L时影响小于10%。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围:0,5μmol/L 14 临床意义 14.1 血清结合胆红素常和总胆红素一起用于黄疸的诊断和鉴别诊断。结合(直接)胆红素是重要的常用肝功能指标。 14.2 肝炎、肝硬化时肝细胞受损引起的肝细胞性胆红素和胆汁性肝硬化、胆道梗阻等所致的梗阻性胆红素，均有直接胆红素增高的情况。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与总胆红素(DBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷胺酰转移酶(GGT)的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件 17.1 Hitachi 7600型自动生化分析仪仪器标准操作规程。 17.2 生化检验室参考文献 18.1 Tietz， N. W. (Ed)， Fμndamentals of Clinical Chemistry，3rd Edition， W.B.Saμnders， 1987. 18.2 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社， 2004. 18.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 (第三版). 东南大学出版社，2006. 19 本SOP变动程序 任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批准。 20 本SOP涉及的记录与表单 20.1 试剂装载记录表 20.2 试剂质量记录表 20.3 质控记录 20.4 失控及失控处理记录 20.5 检验结果审核记录 18 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清总胆汁酸测定(缩写TBA);组合项目申请:肝功能测定加选本项目。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定一周，在冰箱中(2,8?)稳定一个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。 2.3.2 不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。 3 方法原理 循环酶法。胆汁酸被3a,羟基类固醇脱氢酶(3a,HSDH)及β,硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio,NAD)氧化，生成3酮类固醇及β,硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio,NAD)。生成的3酮类固醇在3a,羟基类固醇脱氢酶及β,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio,NAD)存在下，生成胆汁酸及β,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio,NAD)。如此进行循环反应，最后测定生成的β,硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio,NAD)的吸光度，求得胆汁酸浓度值。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:酶循环法测定总胆汁酸试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:保存2,25?，试剂未启封情况下可稳定至标签的失效期。启封使用后在仪器的试剂仓冰箱中可以稳定30天。 4.3 试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 19 4.4 试剂盒主要成分:试剂?:硫代,NAD 2mmol/L，Good’s缓冲液 200 mmol / L，pH 7.0。试剂?:3α,HSD 15 kU/L，NADH 3 mmol/L，Good’s缓冲液200 mmol/L，pH 8.0。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由试剂盒配套的校准液。 5.2 校准类型和数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间7天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?当仪器进行全面保养后;?重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:即开即用，无需特殊准备。 6 质控品与室质控液重建方法:即开即用，无需特殊准备。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ? 结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:2 Point End;Reaction Time:10;Assay Point:19,28;Wave Length Sec:660;Wave Length Prim:405;Sample N:2.5，D:5.0,2.5,95，I:10.0;R1:120;R2:30;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;TimeOut:Blank 20 Full 160;SD Limit:0.1;S1ABS Limit:10 120;Unit:μmol/L;Technical Limit:5 180。 10 结果计算 计算公式: 胆汁酸浓度(μmol/L),(测定管ΔA/校准管ΔA)×校准液TBA浓度(μmol/L) 注:ΔA,A546nm ,ΔA660nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围:2.5,100μmol/L。超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:5,180μmol/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:胆红素 < 850μmol/L，血红蛋白< 5 g/L，抗 20 坏血酸< 2.84mmol/L，乳酸< 24 mmol/L，乳酸脱氢酶< 10000 U/L时，偏差均< ?5 % 。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围:(空腹) 1,12μmol/l。 14 临床意义 14.1 血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一个重要指标。餐后TBA测定对检出轻度肝脏病变的灵敏度优于所有其他肝功能试验。对检测酒精或工业化学品引起的肝细胞损伤的灵敏度优于其它肝功能试验。 14.2 急性肝炎时血清TBA可达参考范围上限的10,100倍，急性肝炎恢复时TBA与ALT同时下降至正常水平，如持续不降有可能转为慢性。 14.3 血清TBA对慢性肝炎的鉴别以及预后的判断有意义。慢性肝炎患者如空腹TBA> 20μmol/L可能处于活动期。 14.4 肝硬化患者的空腹TBA和餐后TBA均增高，其异常率高于所有其他肝功能试验。 14.5 TBA测定对肝外胆管阻塞和肝结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、谷胺酰转移酶及胆红素的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 21 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清丙氨酸氨基转移酶测定(缩写ALT);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定48h，普通冰箱中(2,8?)稳定7天。,20?保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。 3 方法原理 ALT丙氨酸, ,酮戊二酸 谷氨酸,丙酮酸测定反应以如下的原理进行: LDH，丙酮酸,NADH 乳酸，NAD ALT催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙氨酸和L-谷氨酸。LDH催化丙氨酸还原的同时将NADH氧化成NAD+。NADH吸光度的下降速率和ALT的活力成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒，由日本和光公司出品 。 22 4.2 试剂盒保存:未启封试剂盒在2,8?保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:R1:Tris缓冲液(pH 9.0) 25 mmol,L，L-丙氨酸 200 mmol,L，LDH?12000 U/L ，NADH 0.31 mmol,L;R2:Tris缓冲液(pH 4.8) 260 mmol,L，L-丙氨酸 1150 mmol,L，α-酮戊二酸 46.5 mmol,L。含有稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:6,10;Wave Length Sec:405;Wave Length Prim:340;Sample N:10.0，D:3.0,6.0,147，I:12.0;R1:200;R2:100;Abs. Limit:5000 Decrease;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;Time Out:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:,20 10;Unit:U/L;Technical Limit:3 1400。 10 结果计算 以校准品计算活性:ALT(U/L),标本A(340,405)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(340,405)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 23 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围: 3,1500U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:2 ,1400 U/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:EDTA(200mg/dl)，柠檬酸钠(116mmol/L)对本试验有干扰。胆红素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L无明显干扰。 磷酸吡哆醛能使血清中ALT显示最大活性，使用不含有磷酸吡哆醛试剂测定ALT活性，某些疾病患者如肾脏病患者，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致ALT活性低估。 13 参考范围及医学决定水平 血清丙氨酸氨基转移酶参考范围(酶测定温度37?) 男: 3,50 U/L; 女: 2,45 U/L 14 临床意义 14.1 ALT存在于各种组织细胞肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT从细胞某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可至肝脏受损，亦可以ALT活性升高反映。 14.4 实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性胆红素、肝ALT与AST联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT,AST比值小于1，但在传染性肝炎及其它原因引起的肝脏炎症时，ALT,AST比值升高;肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肌炎时，AST升高的幅度高于ALT。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与肝功能组合中其他项目、胆汁酸的关系，ALT/AST比值是否与疾病一致。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 16.1 ,1000/L为应引起临床重视的紧急值，可能有较严重的肝细胞坏死或受损的情况。 16.2 处理程序 16.2.1 检测人员立即报告审核者。 16.2.2 审核者首先根据审核程序，分析质控、定标、试剂的情况是否正常，当天其他已做标本本项目的总体情况有无异常，确认实验有关的基础是在正常状态 24 中。 16.2.3 出现紧急值的标本有无异常，该标本其他相关项目有无异常，尤其是该患者其他肝功能指标的情况。 16.2.4 对该标本进行一次重复测定，确认紧急值是否重现。 16.2.5 报告技术质量主管及科主任，立即与临床联系，了解临床相关情况。 16.2.6 确认此紧急值是可报告的，由技术主管或科主任立即电话向主管临床医生报告，并作好电话报告记录，包括电话报告时间和对方接听人员的标识。 16.2.7 及时签发正式检验结果报告。 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 25 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清天门冬氨酸氨基转移酶(缩写AST);组合项目申请:心肌酶谱或肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定48h，普通冰箱中(2,8?)稳定7天。,20?保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。 3 方法原理 AST门冬氨酸, ,酮戊二酸 谷氨酸,草酰乙酸测定反应以如下的原理进行: MDH，，草酰乙酸,NADH,H 苹果酸,NAD AST催化L,天门冬氨酸的氨基转移至α,酮戊二酸，生成草酰乙酸和L,谷氨酸。MDH催化草酰乙酸还原的同时将NADH氧化成NAD+。NADH吸光度的下降速率和AST的活力成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒，由日本和光公司出品。 26 4.2 试剂盒保存:未启封试剂盒在2,8?保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:R1:Tris缓冲液(pH9.0) 35mmol/L，L,天门冬氨酸 100mmol,L，MDH?2900 U/L ，NADH 0.31mmol,L;R2:Tris缓冲液(pH5.6) 178mmol/L，L,天门冬氨酸 420mmol,L，α,酮戊二酸 31mmol,L。含有稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:6,10;Wave Length Sec:405;Wave Length Prim:340;Sample N:10.0，D:3.0,6.0,147，I:12.0;R1:200;R2:100;Abs. Limit:5000 Decrease;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;TimeOut:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:,20 10;Unit:U/L;Technical Limit:3 1500。 10 结果计算 以校准品计算活性:AST(U/L),标本A(340,405)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(340,405)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和 27 审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围: 3,1200 U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:3,1500U/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:EDTA(200mg/dl)，柠檬酸钠(116mmol/L)对本试验有干扰。胆红素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L无明显干扰。 13 参考范围及医学决定水平 血清丙氨酸氨基转移酶参考范围(酶测定温度37?) 男性:2 ,40 U/L; 女性:2,38 U/L 14 临床意义 14.1 AST存在于各种组织细胞与ALT相比，AST分子小，血浆中半衰期较短。肝细胞受损时，血清中AST水平变化早，恢复快，但升高幅度不如ALT。 14.3 慢性肝炎、肝硬化时AST往往高于ALT，因此用作判断肝炎痊癒指标AST更有意义。 14.4 正常人AST/ALT比值为1.15，此比值变化对急性肝炎的预后判断有意义。急性肝炎时此比值,1，病情好转时恢复正常，比值增大有转为慢性可能，慢性活动性肝炎、肝硬化和肝癌时此比值明显升高。 14.5 心肌受损后AST大量进入血液，因此血清AST活性也常作为“心肌酶谱”检测的一 项实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性胆红素、肝结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与肝功能组合中其他项目、胆汁酸的关系， ALT/AST比值是否与疾病一致。作为心肌酶谱项目时分析与其他酶的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 16.1 ,1000/L为应引起临床重视的紧急值，可能有较严重的肝细胞坏死或心肌细胞受损的情况。 16.2 处理程序 16.2.1 检测人员立即报告审核者。 16.2.2 审核者首先根据审核程序，分析质控、定标、试剂的情况是否正常，当天其他已做标本本项目的总体情况有无异常，确认实验有关的基础是在正常状态中。 16.2.3 出现紧急值的标本有无异常，该标本其他相关项目有无异常，尤其是该患者其他肝功能指标或心肌酶谱的情况。 28 16.2.4 对该标本进行一次重复测定，确认紧急值是否重现。 16.2.5 报告技术质量主管及科主任，立即与临床联系，了解临床相关情况。 16.2.6 确认此紧急值是可报告的，由技术主管或科主任立即电话向主管临床医生报告，并作好电话报告记录，包括电话报告时间和对方接听人员的标识。 16.2.7 及时签发正式检验结果报告。 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 29 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清碱性磷酸酶测定(缩写ALP);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定48h，普通冰箱中(2,8?)稳定7天。,20?保存稳定60天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。 3 方法原理 IFCC推荐的连续监测法 碱性条件下磷酸对硝基苯胺(p-NPP)被ALP水解释出对硝基苯胺，于405nm波长处产生吸收。以双波长速率法于405nm波长连续监测p-NP增加速率，推算出ALP活力。 ALPp,NPP,AMP p,NP,AMP,PO4 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:碱性磷酸酶测定试剂盒，由由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:未启封试剂盒在2,8?保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定14天。开盖后避免污染。 30 4.3 试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:R1:AMP(pH 10.4)0.36mol/L，醋酸镁 2.49mmol/L，硫酸锌 1.24mmol/L，HEDTA 2.49mmol/L; R2:AMP(pH 10.4)0.36mol/L，磷酸对硝基酚99.6mmol/L。含有稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211，或以p,硝基苯(405nm)毫摩尔吸光系数17.9计算ALP活性。 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi 7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:10,16;Wave Length Sec:546;Wave Length Prim:405;Sample N:2.4，D:3.0,2.4,97，I:12.0;R1:120;R2:24;Abs. Limit:25000 Increase;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;TimeOut:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:0 30;Unit:U/L;Technical Limit:3 800。 10 结果计算 以校准品计算活性:ALP(U/L),标本A(405,546)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(405,546)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围: 3,1200 U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 31 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:3,800 U/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:胆红素浓度1197μmol/L，血红蛋白浓度5g/L，甘油三酯浓度45.2mmol/L没有明显干扰。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围(U/L):成人 50,140 U/L 儿童 40,390 U/L 14 临床意义 14.1 ALP在碱性条件下水解各种磷酸酯键，又具有磷酸转移酶的作用。广泛分布于各组织细胞膜上和体液中，以骨骼、肝、肾、肠和胎盘含量较多。ALP有4种同工酶。 14.2 血清ALP活性测定是鉴别肝胆疾病和骨质增生不可缺少的检查项目。肝胆疾病如胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积等ALP升高，骨疾病如Paget病、骨软化症(佝偻病)、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等也有ALP升高。 14.3 霍奇金病、充血性心衰、溃疡性结肠炎等疾病时ALP可有中度升高。 14.4 妊娠3个月时可有非病理性升高。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与肝功能组合中其他项目的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 32 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清 -谷氨酰转移酶测定(缩写GGT);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定48h，普通冰箱中(2,8?)稳定7天。,20?保存稳定60天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。 3 方法原理 ,GTGluCANA,gly.gly Glu.gly.gly,5,氨基,2,硝基苯甲胺 双波长速率法。以 -谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺(GLUCANA)为底物，将底物上的谷氨酰基转移至受体双甘肽，生成对硝基苯胺(p-NP)和 -谷氨酰双甘肽。P-NP在405 nm波长处有光吸收峰，吸光度升高的速率与标本中GGT活力成正比。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂: -谷氨酰转移酶测定试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:未启封试剂盒在2,8?保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 33 4.4 试剂盒主要成分:R1:NaOH 76mmol/L，双甘肽 189mmol/L;R2: -谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺 215 mmol/L。含有稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211，或以p-NP(405nm)毫摩尔吸光系数9.5计算GGT活性。 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的两个不同水平定值质控血清，产品号为616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 Hitachi7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:10,16;Wave Length Sec:546;Wave Length Prim:405;Sample N:5.0，D:3.0,6.0,147，I:12.0);R1:115;R2:23;Abs. Limit:25000 Increase;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;Time Out:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:0 20;Unit:U/L;Technical Limit:1 700。 10 结果计算 以校准品计算活性:GGT(U/L),标本A(405,546)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(405,546)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报单上指出。 11.2 报告范围: 1,1200 U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 34 12.1 精密度: 批线性范围:1,700 U/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:胆红素浓度752μmol/L，血红蛋白浓度2g/L，甘油三酯浓度20.5mmol/L没有明显干扰。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围: 女性 7,32 U/L;男性 11,50 U/L 14 临床意义 14.1 血清GGT主要来自肝脏，急性与慢性肝炎、淤胆型肝炎，脂肪肝，肝炎后肝硬化、肝某些药物如抗惊厥药物诱导GGT合成，致使血清GGT单独升高，可高于参考范围上限3倍以上。 14.3 嗜酒者的血清GGT常升高。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与肝功能组合中其他项目的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 35 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清胆碱酯酶测定(缩写CHE);组合项目申请:肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定48h，普通冰箱中(2,8?)稳定7天。,20?保存稳定60天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。 3 方法原理 速率法 丁酰硫代胆碱，H2O---CHE---硫代胆碱 + 丁酸根 硫代胆碱 ， DTNB------5-硫代-硝基苯甲酸 DTNB,5、5-二硫代-2-硝基苯甲酸 410nm测定5-硫代-2-硝基苯甲酸的增高速率，推算出CHE活力 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:胆碱酯酶测定试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:未启封试剂盒在2,8?保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定30天。开盖后避免污染。 36 4.3 试剂盒准备:液态双试剂型，临用前将底物倒入R2中与R1组成双试剂 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:20,24;Wave Length Sec:405;Wave Length Prim:505;Sample N:2.0，D:3.0,6.0,147，I:12.0;R1:200;R2:100;Abs. Limit:25000 Increase;Calibration Type:Linear;Point:2;Span 3;TimeOut:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:200;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:0 4000;Unit:U/L; Technical Limit:35 12000。 10 结果计算 以校准品计算活性:ChE(U/L),,标本A(480,660)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(480,660)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围: 35,12000 U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 12 操作性能 12.1 精密度:批线性范围:35,12000 U/L。 12.3 方法的有限性及干扰因素:胆红素浓度1026μmol/L，血红蛋白浓度 37 8.5g/L，甘油三酯浓度28.5mmol/L时，无明显干扰。 13 参考范围及医学决定水平 参考范围: 4500,13000 U/L 14 临床意义 14.1 CHE主要由肝脏合成并且和白蛋白的合成代谢相平行，所以在肝炎、肝硬化及肝肿瘤时CHE活性常下降，且降低程度与肝病病情相一致，可作为肝功能评价的指标之一，用于判定肝脏的蛋白合成功能及估计病情预后。 14.2 CHE与其它肝功能指标联合测定有助于肝功能的准确评价。 14.3 有机磷中毒时，CHE活性显著下降，故可用于有机磷中毒的诊断及预后估计。 14.4 能水解乙酰胆碱的酶有两类 一类是乙酰胆碱酯酶，亦称真胆碱酯酶或胆碱酯酶?，真胆碱酯酶主要存在于红细胞、肺、脾、神经末梢及大脑灰质，它能水解神经末梢释放的乙酰胆碱。另一类胆碱酯酶是酰基胆碱酰基水解酶，通常称之为假胆碱酯酶、苯甲酰基胆碱酯酶或胆碱酯酶?。尽管此酶存在于肝、脾、心、大脑白质及血清中，但其生物学功能不明。通常测定的是血清中胆碱酯酶即胆碱酯酶?。两类胆碱酯酶均可被新斯的明及毒扁豆碱竞争性抑制，也可被某些有机磷化合物不可逆抑制。此外，两类胆碱酯酶还可被吗啡、奎宁、胆盐、柠檬酸、氟化物及硼酸盐所抑制。 15 结果审核以及分析与相关项目的联系 15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。 15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。 15.3 相关项目:审核与肝功能组合中其他项目的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。 16 威胁生命的“紧急值”及报告规定 (此项不作规定) 17 有关引用程序与文件(同前) 18 参考文献(同前) 19 本SOP变动程序(同前) 20 本SOP涉及的记录与表单(同前) 38 宁波市第九医院检验科管理文件 1 检验申请 单独检验项目申请:血清乳酸脱氢酶(缩写LDH，LD)测定，各种体液乳酸脱氢酶测定。组合项目申请:心肌酶谱项目测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的黄色盖子SST真空采血管，如为急诊标本，使用浅绿色盖子PST试管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间，如为急诊标本，加上急查标识。 2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5 下列标本为不合格标本 2.1.5.1 标本量不足:少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 接收标本后在30min标本保存时间:室温(15,25?)下可稳定8h，普通冰箱中(2,8?)稳定24h。,20?保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。 2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2,8?冰箱标本采集的注意事项 2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。 2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。 2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。 3 方法原理 LDH 丙酮酸,NADH 正向反应(碱性条件下):L,乳酸,NAD 乳酸脱氢酶催化L-乳酸与NAD+反应生成NADH。NADH在340nm处有特异吸收峰，吸光度增高的速率与血清中的LDH的活性成正比。在340nm处测定NADH的增加速率，推算出LDH活性。以双波长连续监测法测定。 4 试剂及其他用品 4.1 试剂:乳酸脱氢酶L-P/紫外连续监测法试剂盒，由宁波美康生物科技有限公司出品。 4.2 试剂盒保存:未开瓶的试剂储存在2,8?可稳定至有效期。试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊， 39 或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率>0.8时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.3 试剂盒准备:液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分:R1:缓冲液 pH 9.4，L-乳酸80mmol/L，2-氨基-2-甲基1-丙醇250mmol/L; R2:起动液，NAD+ 9mmol/L。含有稳定剂与保护剂。 5 校准品与校准模式 5.1 校准品:由罗氏公司提供的多项目校准液 C.f.a.s.155211 5.2 校准类型和校准点数目:线性模式，4个校准点。 5.3 校准周期:校准间隔时间:Full 3天;Blank 1天。但在:?更换试剂批号或出现质控漂移时;?仪器进行全面保养后;?仪器的重要零件更换后;均须进行一次校准。 5.4 校准液重建方法:用3.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6 质控品与室质控品采用由BIO-RAD公司提供的定值质控血清，产品号为 616/1UN 6.2 质控液重建方法:用5.00ml蒸馏水溶解，轻轻混匀，20min后即可使用。 6.3 质控品测定:在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。 6.4 质控规则:采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。 6.5 如出现失控情况，按室适用仪器 适用Hitachi7600型全自动生化分析仪。 8 标本检测步骤 装载试剂 ? 进行校准 ? 进行质控 ? 输入标本检测项目 ? 加载标本 ? 标本测定 ?结果复核 ? 报告。 9 主要分析参数 Assay Code:Rate A;Reaction Time:5;Assay Point:10,16;Wave Length Sec:405; Wave LengthPrim:340;Sample N:2.4，D:3.0,2.4,147，I:12.0);R1:120;R2:24;Abs. Limit:20000 Increase;Calibration Type:Linear;Point:4;Span 3;Time Out:Full 72，Blank 24;SD Limit:0.1;Duplicate Limit:32000;Sensitivity Limit:0;S1ABS Limit:0 80;Unit:U/L;Technical Limit:20 1200。 10 结果计算 以校准品计算活性:LDH(U/L),标本A(340,405)nm ×C标准 (U/L) 校准液A(340,405)nm 仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。 11 检验结果的报告及范围 11.1 结果的报告 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。 11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。 11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。 11.2 报告范围: 25,1200 U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如:系根据标本稀释后重复测定的结果。 40