[整理]实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定

[整理]实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定 实验三 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与鉴定 小檗碱又称黄连素，是在高等植物中分布比较广泛的、有明显生理活性的化学成分。主要存在于黄连、黄柏、三颗针等中草药中。小檗碱具有显著的抗微生物、抗原虫的作用，临床用其盐酸盐(即盐酸黄连素)治疗细菌性感染如痢疾、急性肠胃炎、呼吸道感染等症。 黄连为毛茛科黄连属植物黄连(Coptis chinensis Franch。)，三角叶黄连(C。deltoidea C。 Y。Cheng et Hsiao)或云连(C。teetoides C。Y。 Cheng)的根茎，含有小檗碱(1)、巴马汀(2)、黄连碱(3)、甲基黄连碱(4)、药根碱(5)等生物碱，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，小檗碱以盐酸盐的形式存在于黄连中。 目前制药工业提取小檗碱主要以三颗针为原料。三颗针来源于小檗科小檗属(Berberis)多种植物，其根皮含生物碱约2%，主要含小檗碱、小檗胺、药根碱、巴马汀等生物碱。 R R R R R12345CH CH CH H1332RO1 CH CH CH H+33332?-CHNOHRO2CHCHOR223 H3R5 CHCH23244 CHOR H CH CH CH H 3335 小檗碱 (Berberine)属异喹啉类生物碱，自水和乙醇中结晶出来的小檗碱为黄色长针状结晶，含5个结晶水，在100?干燥时即失去结晶水，转为棕黄色，加热至110?时，其颜色加深变暗色。Mp.145?至160?即分解。 HCO3OCH3NCH3NHN3HOCH3HO O OH 小檗胺 游离小檗碱能缓缓溶于水，在热水及热乙醇中易溶，而在冷乙醇中溶解度为1:100，但难溶于苯、氯仿、丙酮等溶剂。醇式和醛式小檗碱则具有一般生物碱的通性，难溶于水，易溶于有机溶剂。 小檗碱的盐类除中性硫酸盐、磷酸盐外，一般在水中的溶解度均较小。小檗碱及其盐类在水、乙醇中的溶解度如下: 名称 水 乙醇 小檗碱 1:20 1:100 盐酸小檗碱(B.Cl) 1:500 几乎不溶 酸性硫酸小檗碱(B.HSO) 1:100 微溶 4 中性硫酸小檗碱(B.SO) 1:30 可溶 24 中性磷酸小檗碱(B.PO) 1:15 可溶 34 小檗碱还能与苯、氯仿、丙酮等溶剂结合成分子缩合物，有完好的结晶状态，可作为小檗碱的识别之用。如用过量的氢氧化钠处理小檗碱盐类，使其转变为醇式小檗碱，就能与丙酮缩合成结晶型的丙酮小檗碱。 一、实验目的 1. 学会从黄连中提取、精制盐酸小檗碱的方法; 2. 学会小檗碱的化学与色谱检识方法。 二、实验原理 利用小檗碱的硫酸盐在水中的溶解度较大，而盐酸盐几乎不溶于水的性质，先将药材中的小檗碱转变为硫酸盐用水提出;再使其转化为盐酸盐，结合盐析法降低其在水中的溶解度，制得盐酸小檗碱。 三、实验内容 (一)盐酸小檗碱的提取 1.润湿 取黄连粗粉50g置烧杯中，加0.3%硫酸约10ml润湿，放置30 min 2.装筒(分次装入渗漉筒并排气) 3.浸渍 用0.3%硫酸浸泡过夜 4.渗漉 收集9—10倍量的渗漉液 等待空余时间: 10g硅胶G + 30ml(0.8 % CMC-Na)研匀，铺板 (二)分离 1.取渗漉液，加40% NaOH调PH至11,12，放置过夜; 2.抽滤，将滤液加浓盐酸调PH值2,3，加入6% NaCl，搅拌均匀，放置过夜; 3.抽滤(尽量抽干),滤取结晶,即得盐酸小檗碱粗品。 (三)精制 1.将上述粗品放入25倍量沸水中，于水浴上加热使溶解，趁热过滤液在65?时加浓盐酸调PH值2,3，放置过夜 2.抽滤(尽量抽干),滤取结晶,即得盐酸小檗碱精品。 (四)检识 1. 取自制精制盐酸小檗碱 50mg，加水 5ml，缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试液2滴显橙红色，放冷，加丙酮4滴，即发生浑浊，放置后，生成黄色沉淀，即为丙酮小檗碱。 2. 取自制精制盐酸小檗碱少许，加入稀硫酸8ml溶解，搅拌均匀，分置两支试管中，一支加漂白粉少量，即显樱红色;另一支加入2滴浓硝酸,也显樱红色。 3. 取自制精制盐酸小檗碱少许，加稀硫酸12m1使溶解，分置于三支试管中，分别加入碘化汞钾试剂、碘化铋钾试剂及硅钨酸试剂，观察其产生的现象。 4. 盐酸小檗碱的薄层层析 吸附剂:硅胶G硬板(未活化) 样 品:?自制精制盐酸小檗碱乙醇溶液 ?盐酸小檗碱标准品乙醇溶液 展开剂:?氯仿,乙醇(9:1) ?甲醇,丙酮,乙酸 (4:5:1) 显色剂:先置于紫外光灯(365nm)下检视，再喷雾改良碘化铋钾试剂，观察斑点颜色，并与标准品对照。