【doc】 PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞的影响

【doc】 PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞的影响 PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜 内淋巴细胞的影响 安徽技术师范学院,2005,19(6):1,4 JournalofAnhuiTechnicalTeachersCollege PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞的影响 金光明,王珏,宁康健,吕锦芳,李升和,应如海 (安徽科技学院动物科学学院,安徽风阳233i00) 摘要:试验研究了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞分 布的影响.试验选用4月龄长白×大约克夏二元杂交母猪12头..结果表明:鼻腔接种可使猪子宫角,体 和颈黏膜上皮内淋巴细胞的数量较对照组增加,差异显着(P<0.01). 经鼻腔接种时,子宫黏膜固有层中 多见淋巴细胞聚集成群,并向黏膜腔表面排放.说明PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜及上皮 内淋巴细胞的分布具有显着影响. 关键词:生殖道黏膜;子宫黏膜;鼻腔接种;淋巴细胞;猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV);弱毒疫苗 中图分类号:$852文献标识码:A文章编号:1672—3589(2005)06—0001—04 EffectofInoculatedofAttenuated--PRRSVVaccinethroughNasalon LymphocyteofUterusMucosalinSows JINGuang--ming,WANGJue,NINGKang--jian,LVJing—fang,LISheng —he,YINGRu—hai (DepartmentofAnimalScience,AnhuiScienceandTechnologyUniversity,Fengyang233100,China) Abstract:Attenuatedvaccineofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)hasbeen inoculatedbynasalintheexperiments.12of4一 month—oldSOWofLandracelargeYorkshiretwo—way crossbredwereusedintheexperiments.Theresultsshowthatthenumberofintraepitheliallymphocyte cellinuterusofSOWSinoculatedthroughnasalmoreincreasedthanthatofcontrolgroup.Andthediffer— encewassignificant(P<0.01).WhenPRRSVvaccinewasinoculatedbynasal,Thelymphocytecellin mucosalweregatheredincolony,whichpassedthroughtheepithelialandarrivedtheepithelialsurfacein uterus.Ourresult:showedthatthesignificanteffectofdifferentnasalandintramuscularofattenuated-- PRRSVvaccineonintraepitheliallymphocytecelldistributionandmucosalofuterus. Keywords:Genitaltractmucosal;Mucosalofuterus;Nasalinoculated;Lymp hocyte;Porcinereproduc— tiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV);Attenuatedvaccine 黏膜系统主要是分布于胃肠道,呼吸道,泌尿生殖道,泪道,唾液腺分泌管和乳腺等u].黏膜系统不仅 是动物有机体与外界环境的防御屏障,而且还具有体液及细胞免疫功能.黏膜中淋巴组织构成黏膜免疫 基础,局部抗原刺激能够有效地刺激机体黏膜分泌大量的分泌型免疫球蛋白(SIgA)L2].黏膜组织形成了 防御体系——黏膜免疫系统,以防御有害微生物通过黏膜进入体内,其中,免疫细胞起着非常重要的作 用口].Rossow等[.0报道PRRSV感染后出现抗原特异性的免疫细胞增生,重复感染后细胞增生反应的幅 度加大.黏膜免疫是近几年来人们研究的热点内容之一,黏膜是与抗原接触的第一个部位,黏膜的局部免 疫和系统免疫对于防御病原体进入有机体至关重要.PRRSV弱毒疫苗可以用来对母猪免疫接种而使幼 仔猪获得被动免疫,作为黏膜免疫系统,特别是呼吸道,消化道,泌尿生殖道和乳腺等黏膜内发生的免疫活 收稿日期:2005--07--24 基金项目:安徽省科技厅年度重点科研项目(04023071). 作者简介:金光明(1962一),男,安徽省桐城市人,学士,教授,主要从事 动物黏膜免疫学与基础兽医学教学与研究. 2安徽技术师范学院 动越来越受到人们关注.但有关PR’RSV弱毒疫苗黏膜免疫方面的组织学特征目前尚无报道.本试验研 究了PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞的影响. 1材料与方法 1.1疫苗 试验应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗由南京农业大学动物医学院提供.病毒 TCIDso为1O?mL_..免疫接种剂量为每头1.0mL. 1.2实验动物 试验选择长白×大约克夏二元杂交母猪8头,平均年龄为4月龄,且未配种.试验猪场没有PRRSV 病发病史. 1.3试验方法? 试验母猪随机分成2组,4头/组.A组经鼻腔黏膜通过呼吸道接种PRRSV弱毒疫苗;B组为对照 组.PRRSV弱毒疫苗均为1.OmL/头.试验期为60d. 在60d试验结束时,宰杀并采集所有母猪的子宫角,子宫体,子宫颈等样品,立即置于波氏固定液中进 行固定.常规石腊切片,H—E染色.Olympus显微镜观察,拍照. 1.4上皮内免疫细胞计数及数据统计 每组母猪选择2O张组织切片,每张切片随机选择1O个视野,统计子 宫黏膜上皮内淋巴细胞数.用 SSR法进行数据间的差异显着性分析. 2结果 图1鼻腔接种组子宫体黏膜上皮内淋巴细胞(HE600×) Fig.1Intraepitheliallymphocyteofmucosalinnasal immunegroup(HE600×) 图3鼻腔接种组子宫角黏膜淋巴细胞聚集成群 并向表面排放(HE200×) Fig.3lymphocyteofintramucosalweregottogether, lymphocytewerearrivedintheepithelialsurface (HE200×) 图2对照组子宫体黏膜上皮内淋巴细胞(HE600×) Fig.2Intraepitheliallymphocyteo/mucosalin controlgroup(HE600×) 图4对照组子宫角黏膜淋巴细胞聚集成群 并向表面排放(HE200×) Fig.4lymphocyteofintramucosalweregottogether, lymphocytewerearrivedintheepithelialsurface incontrolgroup(HE200×) 第19卷第6期金光明,等PRRSV弱毒疫苗鼻腔接种对母猪子宫黏膜内淋巴细胞的影响3 图5鼻腔接种组子宫颈黏膜毛细血管内淋巴细胞图6对照组子宫颈黏膜毛细血管内无淋巴细胞 (HE600×).(HE600×) Fig.5IntracapillarylymphocyteofuterusmucosalinnasalFig.6Intracapillar ylymphocyteofuterusmucosal immunegroup(HE600×)incontrolgroup(HE600×) 鼻腔接种对母猪子宫黏膜及上皮内淋巴细胞的分布具有显着影响.鼻腔接种组母猪子宫角,体和颈 黏膜上皮内淋巴细胞数量比对照组显着增多(图1)(图2)(P<O.01). 鼻腔接种组多见子宫黏膜固有层中 淋巴细胞聚集形成淋巴细胞群(图3),集中向黏膜腔表面排放.而且鼻腔接种组较对照组子宫黏膜固有 层中淋巴细胞聚集的数量多(图4).鼻腔接种组较对照组子宫黏膜固有膜的毛细血管中的淋巴细胞数量 也增多(图5)(图6),推测黏膜上皮内淋巴细胞可能来源于黏膜中的毛细血管. 3讨论 本试验中,鼻腔免疫组母猪子宫黏膜及上皮内淋巴细胞显着增多,表明鼻腔免疫接种途径对防制 PRRSV是有效的.金光明等[5]研究发现PRRSV弱毒疫苗株通过生 殖道黏膜免疫导致母猪子宫黏膜及 上皮内淋巴细胞显着减少,PRRSV弱毒疫苗株直接刺激子宫黏膜对黏膜内淋巴细胞产生了抑制作用,并 导致母猪子宫黏膜上皮变矮,上皮内免疫细胞减少.PRRSV疫苗病毒株Resp生殖道黏膜免疫的失败告 诉我们通过生殖道黏膜免疫预防PRRSV的效果是不可靠的. 杨倩等[6]研究表明黏膜表面相关的淋巴细胞是由一个巨大的细胞群体构成,上皮内淋巴细胞和固有 膜中淋巴细胞数量可随抗原的刺激而增加,猪的小肠黏膜中淋巴细胞随着年龄的增长而明显增多,并向肠 上皮方向移行,随着上皮内淋巴细胞数量的显着增加,形成淋巴细胞的”腔排”现象. Benfield等[7]研究的结果表明妊娠母猪接种PRRSVVR一2332株弱毒苗对随后的强毒(NADC一8) 攻击产生了一定程度保护.Lager[8]等通过研究母猪免疫NADC--8株弱毒苗的保护效果,证实了同源株 免疫保护的完全性,这种保护可长达604d,而NADC一8株宫内接种对异源株(Lelystad株)攻毒仅提供有 限的保护性免疫. 生殖道黏膜,尤其是子宫角,体和颈黏膜内和黏膜下含有较多淋巴细胞,甚至有一层淋巴细胞分布,可 防止病原体通过生殖道入侵机体[9].子宫颈和阴道上皮内存在 CD8,CD4T淋巴细胞,浆细胞和MHC 一 ?[1...在人和灵长类动物罗猴上的研究表明,抗原诱导阴道黏膜免疫反应后,子宫颈过渡区域,子宫颈 外部和阴道上皮中产生IgALl?. 因为PRRSV主要通过鼻黏膜和呼吸道黏膜上皮进入猪体内,病毒在鼻腔黏膜,呼吸系统的巨噬细胞 和淋巴细胞中完成最初的复制,然后通过血液循环到达继发复制部位[J引.因此,根据PRRSV的生物学 特性,本试验未进行消化道黏膜免疫. 黏膜免疫主要是通过分泌SIgA和IgM发挥作用.IgA可通过中和黏膜上皮内病原体和细胞毒素, 限制病毒增殖和阻止侵入黏膜产生作用.黏膜免疫具有局部抗体出现早,效价高,维持时间长等特点,开 展猪呼吸道黏膜免疫对预防猪主要传染性疾病具有重要意义. 参考文献: [1]Bran&megP.Moh~ularandcellularaspectsofthes~remryimmunol ogbulinsystemEJ].APMIS,1996,103(1):1—19. [2]KagnoffMF.Mucosalimmunology:Newfrontiers[J].ImmunolToday,19 96,17(2):57—59. 4安徽技术师范学院2005焦 [31杨淑静.黏膜免疫[J].国外医学免疫学分册,2001,24(6):296--298. 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