复方甘露醇注射液细菌内毒素的检测

复方甘露醇注射液细菌内毒素的检测 中国病原生物学杂志2008年8月第3卷第8期 JournalofPathogenBiologyAugust2008,Vo1.3,No.8?635? ? 论着摘要? 复方甘露醇注射液细菌内毒素的检测 王洪礼,纪伟华. (1.天津医科大学第二医院检验科,天津300211;2.天津医科大学基础医学院病原生 物学教研室,天津300070) 【摘要】将医用甘露醇注射液作1:3稀释,采用鲎试剂抑制或增强试验,检测细菌 内毒素,并与家兔法进行对比.结果 表明,该注射液经过一定稀释后,对测定无干扰.该法适合医院对甘露醇注射液中 细菌内毒素的检测. 【关键词】甘露醇注射液;细菌内毒素;鲎试剂 【中图分类号】R378【文献标识码】B【文章编号】1673—5234(2008)08—0635 —01 [JournalofPathogenBiology.2008Aug;3(8):635,604.] Thedetectionofbacterialendotoxinincomplexprescriptionmanicolinjection WANGHong-li,JIWei— hua.(1.DepartmentofLaboratoryDiagnostic,TheSecondHospital,TianjinMedical University,Tianjin300211,China;2.Departmentofpathogenicorganism,TianjinMedicalUniversity,Tianjin 300070,China) [Abstract]Medicalmannitolinjeetion,whichwasdiluted1:3usingTALinhibitorenhancethetest,wasusedtode— tectbacterialtoxins,comparedwiththerabbit.Theresultsshowedthattheinjectioninacertaindilutionhasnoeffecton thedetermination.Themethodcanbeusedinthedetectionofbacterialtoxinsinmannitolinjec tioninhospitals. [Keywords]Manicolinjection;bacterialendotoxin;tachypleusamebocytelysate(TAL) 2O甘露醇注射液为一过饱和溶液,在贮存,运输及应用 过程中易析出结晶.在输注过程中产生结晶容易出现类似热 原反应"症状的一种所谓"应激反应",且造成血栓.为此参照 中国药典1995版将这一制剂改制成复方甘露醇(15甘露醇, 1O山梨醇)注射液],其脱水及利尿作用与甘露醇注射液基 本相同,在寒冷环境下也无结晶析出.本实验参照中国药典 2000年版"细菌内毒素检查法"_2中的干扰试验基本原理及细 菌内毒素检测方法对复方甘露醇注射液的细菌内毒素检测方 法进行了研究,对鲎试剂法(LT法)检测甘露酵注射液中细菌 内毒素的可行性进行探讨. 《中国药典》用家兔法检测20甘露醇注射液的内毒素. 鲎试剂法(LT法)检测内毒素具有快速,灵敏度高,结果可靠, 操作简便的优点,比家兔检查法(RT法)灵敏度高1O倍以上. 鲎试剂法检测内毒素已被各国广泛使用,但在使用过程中有时 发现有假阳性反应,即非内毒引起的G因子活化激活凝固酶 原,从而激活凝固酶,凝固酶激活凝固蛋白原,凝固蛋白使鲎试 剂产生凝胶.G因子鲎试剂排除了某些药物激活G因子这一 旁路的干扰,使鲎试剂对内毒素发生反应具有专一性. 1材料与方法 1.1材料鲎试剂(批号20060810,0.1ml/支,灵敏度0.5 Eu/支),细菌内毒素工作品(批号20060912,10Eu/支),细 菌内毒素检查用水(批号20050328,2ml/支)购于福州东方鲎 试剂厂.甘露醇注射液原液(批号:0610241,0611222,0611232, 0612011,0612032,0612051,25ml/瓶)为本院自制,热原检查法 检查均合格. 1.2方法 1.2.1细菌内毒素限量计算中国药典2000年版附录"细菌 内毒素检查法"L.药品细菌内毒素限值L—K/M,K为细 菌内毒素的致热阈,注射剂人最大可接受的内毒素剂量K一5 Eu/kg.M为热原检查剂量,甘露醇热原检查注射液剂量M= 10ml/kg.本品细菌内毒素理论限值L一0.5Eu/ml. 1.2.2鲎试剂灵敏度标定按照中国药典2000年版附录"细 菌内毒素检查法"_2],细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素等 比稀释成系列浓度的溶液,与鲎试剂混合,置37?水浴60min 后测定b. 1.2.3干扰实验最大有效稀释倍数L值确定后,根据所用鲎 试剂的值确定样品的稀释倍数,最大有效稀释倍数MVD一 一 L/k.本实验确定一0.5Eu/ml的鲎试剂,复方甘露醇注 射液MVD=1,即原液不必稀释. 1.2.4干扰试验]取待检样品6批,分别将内毒素L作标 准品稀释成同样4种浓度:1.0,0.5,0.25,0.125Eu/kg,每种浓 度样品各取0.1ml,加入鲎试剂0.1ml,混合进行抑制增强实 验.每一浓度平行做4管,37?保温60min测b. 1.2.5样品细菌内毒素检测取热原检查合格的复方甘露醇 注射液6批,与0.5Eu/ml鲎试剂混合,每批供试品做4管,每 管加0.1ml供试品和0.1ml鲎试剂,同时设阳性对照和阴性 对照各1管,37?水浴保温60min测. 2结果 2.1鲎试剂灵敏度复核结果见表1. 表1鲎试剂灵敏度复核结果 中国病原生物学杂志2008年8月第3卷第8期 . 604.JournalofPathogenBiologyAugust2008,Vo1.3,No.8 (上接635页) 2.2干扰试验结果测定干扰试验的4份样品,值均相同, 证明复方甘露醇注射液对鲎试剂检测细菌内毒素无干扰作用 (表2). 表2干扰试验结果 2.3样品检测结果用鲎试剂检测6批热原检查合格的复方 甘露醇,结果均为阴性(表3). 表3样品细菌内毒素检测 3讨论 提高鲎试剂的灵敏度可提高MVD,减少干扰作用.鲎试 剂对5批供试品测得的E值均在0.5,O.2E之间,证明细菌内 毒素检查法代替热原检查可行.多次用鲎试剂和家兔法检测 复方甘露醇注射液,两种方法平行对照,统计结果表明鲎试剂 检测复方甘露醇注射液细菌内毒素比家兔检查法简便快捷且 灵敏度高,可以用其代替家兔法检测复方甘露醇注射液的热 原. 检测时要保证检测试管轻拿轻放,防止破坏凝胶造成假阳 性结果.鲎试剂检测时实验品最佳pH值为4.0,7.0,在此范 围外的待检品应调节pH值并作干扰抑制实验.使用不同批 次,不同厂家的鲎试剂应复合灵敏度防止误差. 鲎试剂法检测复方甘露醇注射液细菌内毒素,方法经济, 安全适用,结果准确,适合于基层医院使用. 【参考文献】 Eli中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典[s]. 1995版,化学工业出版社,1995.附录76. [2]国家药典委员会.中国药典(二部)IS].2005版.化学工业出版 社,2000.附录86,204. [3]罗琳,刘芳艳,黄永可.细菌内毒素检查泛影葡胺注射液的热原 EJ].中国医院药学杂志,1999,19(6);380 [4]黄清泉,夏振民.药品细菌内毒素检查实验设计[J].中国药学杂 志,1997.2. 【收稿日期】2008—03—19【修回日期】2008,07—04