二参三草汤对胃低级别上皮内瘤变PTEN、PCNA表达影响讨论

二参三草汤对胃低级别上皮内瘤变PTEN、PCNA表达影响讨论 二参三草汤对胃低级别上皮内瘤变PTEN、PCNA表达影响讨 论 胃癌癌前病变(precancerous lesion of gastriccancer，PLGC)按照WHO消化系统肿瘤病理(2010 年)可划分为胃低级别上皮内瘤变(gastriclow grade neoplasia，GLIN)与胃高级别上皮内瘤变(gastric high garde neoplasia，GHIN)。肠型PLGC是指GIN，弥漫型胃癌癌前病变PLGC是指腺管颈部异型增生(球状异型增生)。肠型PLGC据Correa序列表述为从萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)、肠化(intestinal metaplasia，IM)到异型增生(dysplasia)。GLIN包括轻度异型增生无显著结构改变的中度异型增生。GLIN 的对策，国际上推荐药物干预与定期随访。中药复方治疗GLIN取得了较理想的成果。本文观察二参三草汤对GLIN的临床疗效，以及对增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen，PCNA)，第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologydeleted on chromosome ten，PTEN)表达的影响，并探讨机制。 1 资料与方法 1.1 资料 随机抽取江苏省中医院消化科2010-2012 年门诊及病房21例GLIN 患者，男10 例，女11 例，平均年龄57.65 周岁，其中轻度异型增生16例，轻- 中度异型增生2例，中度异型增生3例。 1.2 诊断标准 参照WHO Classification of tumors of thedigestive system(2010年)，中国慢性胃炎共识意见(2006 年)，病理诊断标准参照Management ofprecancerous conditions and lesions of gastric cancer。 1.3 治疗方法 “二参三草汤”由太子参15 g、丹参10 g、仙鹤草15 g、白花蛇舌草15 g、炙甘草5 g、生黄芪15 g、炒薏苡仁15 g、炒白术10 g组成，煎服，每日2 次，6 个月为1 疗程;中上腹疼痛感较强者，加炒白芍15 g，木香6 g ;消化性功能差者，加炒莱菔子12 g，炒麦芽12g，焦山楂12 g，炙鸡内金10 g ;中上腹胀痛，嗳气，加醋制柴胡10 g，炒枳壳10 g，香橼皮10 g，佛手10 g ;反酸，加黄连3 g，吴茱萸2 g，栀子10 g，丹皮10 g ;舌苔黄腻，脉濡，加黄 芩10 g，石菖蒲6 g ;舌质紫，脉涩，加赤芍10 g，失笑散(包煎)6 g ;舌质红，舌苔较少或无，加北沙参10 g，麦冬10 g，石斛10 g ;睡眠障碍，加合欢皮30 g，生龙齿30 g，百合20 g。 1.4 临床疗效标准 参照中药新药治疗萎缩性胃炎的临床研究指导原则。 1.5 统计方法 前后对照方法;临床疗效指标分为胃脘疼痛、闷胀、嘈杂泛酸、嗳气、纳呆少食等5项，从轻到重分别为0、3、5、7 分;胃镜疗效指标分为充血、水肿、糜烂、黏膜白相、颗粒增生、胆汁反流等6项，按照有无分为1、0 分;病理疗效分为无异型增生、轻度异型增生、轻-中度异型增生、中度异型增生、中-重度异型增生，分别记为1、2、3、4、5 分。 1.6 免疫组化方法 PCNA、PTEN分别购自福州迈新生物技术有限公司，北京中杉金桥生物技术有限公司;将石蜡标本包埋，作厚度为5 μm 的连续切片，每例切片2张。HE染色，光镜观察染色结果，进行病理学分类 诊断，免疫组化采用S-P染色法，常规二甲苯脱蜡，逐级酒精脱水，3%过氧化物酶阻断10 min，热修复法为经多聚赖氨酸处理切片置于含0.01 mol/L pH 6.0的柠檬酸缓冲液的有盖容器中，沸水浴10 min，然后冷却至室温，抗血清封闭非特异性抗原，加入一抗室温下温育60 min，依次生物素标记二抗，DAB显色，苏木素衬染。PCNA、PTEN阳性结果均以北京中杉金桥生物技术有限公司提供的胃癌阳性切片为对照。 1.7 免疫组化结果判断 PTEN、PCNA阳性细胞均为细胞核呈棕黄色颗粒状;阳性细胞数占视野内总细胞数的比例，选5 个高倍视野统计平均值，按百分率分别评分，阳性细胞≤ 5%(0 分)，6%~25%(1 分)，26%~50%(2分)，51%~75%(3 分)，≥ 75%(4 分)。 1.8 统计 SPSS19.0 统计软件进行分析，所有的统计数据均采用双侧检验，P <0.05 为差异有统计学意义，计量数量符合正态分布者用均数±标准差(x-±s )表示，偏态分布者用中位数(Q1，Q3);计数资料或等级资料用百分率表达。计量数据组建比较符合正态分布者用t 检验，不符合正态分布者采用非参数检验;计量数据组内 比较符合正态分布者用t 检验，不符合正态分布者采用非参数检验;计数数据比较用卡方检验，等级数据采用秩和检验。 2 结 果 2.1 临床疗效 临床痊愈0例，显效14 例，有效6 例，无效1 例，总有效率为95.23%。 2.2 症状积分比较 治疗前、后症状积分分别为(18.76±3.93)、(6.38±3.91)分，P <0.05。治疗后的症状积分明显低于治疗前。 2.3 胃镜疗效比较 治疗前、后胃镜积分分别为(2.57±1.66)、(2.09±1.04)分，P <0.05。治疗后的胃镜积分明显低于治疗前。 2.4 病理积分比较 治疗前、后病理积分分别为(2.38±0.74)、(1.71±1.14)分，P <0.05。治疗后的病理积分明显低于治疗前。 2.5 PCNA、PTEN积分比较 治疗后，PCNA积分明显低于治疗前，PTEN积__分明显高于治疗前。 3 讨 论 PTEN基因定于10a23.3，全长200 kb，包含9 个外显子和8个内含子，mRNA长5.5 kb。PTEN是由403个氨基酸组成的多肽，相对分子质量55 kDa，由N端磷酸酶结构域、C2结构域和C端尾部结构域组成。PTEN基因是迄今为止第1个具有磷酸酶活性的基因，其编码蛋白为具有脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性的双重特异性磷酸酶。GC中PTEN表达下调，焦点黏附激酶(FAK)与磷酸化焦点黏附激酶(p-FAK)表达上调。PTEN可以抑制P13K/AKT途径，促进胃癌细胞凋亡。贾海江报道PTEN在GC中表达缺失率为52.7%，PTEN阳性表达的患者术后5年生存率高于阴性表达的。孙桂彬报道在Correa 序列 中，PTEN是呈明显下降趋势。 PCNA 是一种仅在增殖细胞中合成和表达的分子量为36 kD的多肽，为DNA多聚酶δ的辅助蛋白，直接参与细胞DNA的复制。PCNA 表达、合成与细胞的增殖周期有关。G1 期细胞PCNA 表达逐渐增多，S期达高峰，G2期开始下降。苗龙、孙永红分别报道在Correa序列中，PCNA 呈明显递增趋势。 传统医学理解，二参三草汤体现了益气健脾、清热解毒、活血祛瘀的治疗原则。生黄芪、太子参益气健脾、扶正固本;丹参功同四物，活血补血;炒白术、炒薏苡仁运脾燥湿;仙鹤草健胃补虚，清热止血;白花蛇舌草清热解毒;甘草缓中。在药理层面，二参三草汤中组成的中药大多被报道有抗肿瘤功效。黄芪多糖(astragalus polysaccharide，APS)增强T 淋巴细胞功能，调节Th1/Th2 反应;增强自然杀伤细胞(NK)功能;参加单核-巨噬系统;提高树突状细胞(dendritic cell，DC)功能。冯玉光等、卢业才等、戴支凯等分别报道丹参酮?A(Tan ?A)抑制GC细胞增殖。王敏等、郭莉婷等分别报道薏苡仁酯(薏苡仁油)降低人胃癌BGC-823细胞的CD44、CD133的表达，下调B7-H4mRNA表达，上调B7-H3mRNA表达，抑制肿瘤细胞侵袭，转移。仙鹤草抗肿瘤的机制包括调控细胞分裂周期，抑制DNA 的复制，诱导细胞凋亡，抗氧化与清除自由基，调节自身免疫功能等。白花蛇舌草抗肿瘤作用包括:增强免疫机制，对人外周血单核细胞(PBMC) 增殖的促进作用，诱导肿瘤细胞凋亡，引起肿瘤细胞DNA片段掉落，促进肿瘤细胞氧化，阻断肿瘤细胞信号通路。 二参三草汤改善GLIN的临床症状、胃镜表现、病理疗效，这可能与降低PCNA 表达、提高PTEN 表达有关。展望:研究PTEN信号通路，设立中成药的对照组，进一步揭示二参三草汤对GLIN的治疗机理。