饲料微生物添加剂+地衣芽孢杆菌

饲料微生物添加剂+地衣芽孢杆菌 ICS 65(120 B 46 N Y 中华人民共和国农业行业 NY,T 1461—2007 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌 feed additives Bacillus Microorganism Licheniformis 2007—12—18发布 2008—03—01实施 中华人民共和国农业部发布 NY,T 146卜一2007 刖 置 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。 本标准由全国饲料 本标准起草单位:中国农业科学院北工业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草人:佟建明、萨仁娜、张琪、谷春京畜牧兽医研究所。 涛、彭爱铭、崔东良。 146卜一2007 NY,T 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌 1范围 本标准规定了饲料微生物添加剂一地衣芽孢杆菌产品的要求、试验、检验规则、标签、包 装、运 输、储存、保质期的要求。 本标准适用于固体和液体的地衣芽孢杆菌饲料添加剂。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用 文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研 究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB,T 4789(3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 GB,T 4789(5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB,T 4789(10食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB,T 5918配合饲料混合均匀度的测定 GB,T 6435饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 GB 10648饲料标签 GB 13078饲料卫生标准 GB,T 13079饲料中总砷的测定 GB,T GB13080饲料中铅的测定 ,T GB13081饲料中汞的测定 13082饲料中镉的测定 ,T GB,T 13091饲料中沙门氏菌的检测方法 GB,T 13092饲料中霉菌总数的测定方法 GB,T 13093饲料中细菌总数的测定 GB 14699(1饲料采样 ,T GB,T 17480饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法 3术语和定义 3(1 地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis) 属于芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，菌体杆状，革兰氏阳性，有芽 孢，中生。可抵抗不良环境条件，在饲料 工业被制成微生物添加剂使用。 3(2 杂菌数 指在选择培养基上，除地衣芽孢杆菌外的其他细菌和霉菌菌落 数之和。 3(3 杂茵率 指杂菌数在地衣芽孢杆菌数和杂菌数之和中所占百分率。 】 1461一-2007 NY,T 4要求 4 1微生物指标 4(1 1茜体形态 4(1 1(1染色:革兰氏染色为阳性。 4(1(1(2形态特征:菌体细胞(营养体)呈直杆状，单个、成对或短链排列，大小为0(6 pm,o(8 pm×1(5,um,3(5 p“，两端钝圆。有芽孢，芽孢近椭圆形，中生，大小为0(8p“×1(3肛m，具有稀疏的周生鞭 毛，能运动。孢子囊不膨大，内生孢子释放后孢子壳不是多处破裂。 4(1(2菌落形态 4 1(2(1营养琼脂(Nutrient Agar，NA):菌落杏仁白色，湿润有光泽，明略有放射状条纹。4(1(2(2桑塔斯琼],(Sauton’SAgar):菌落乳脂色，湿润有光泽，不透明，中央凸起。 4(1(2(3牛肉浸汁培养基(Beef extractAgar):菌落乳脂色，湿润有光泽，不透明，边缘毛发状。 4(1(3细胞壁化学 菌体细胞壁水解液含有内消旋二氨基庚二酸(meso—DAP)和甘氨酸，无特征性糖 (糖型c)，为细胞 壁?型。 4(1(4生理生化特征 地衣芽孢杆菌生 理生化特征见表1。 表1地农芽孢杆菌生理生化特征 特 征 结 果 特 征 结 果 +生长温度范围 15?,55? 明胶液化 上 士 淀粉水解 利用柠檬酸盐 -_硝酸盐还原 苯丙氨酸脱氨 ++0(001,溶菌酶生长 酪素分解 +7,NaCl生长 酪氨酸分解 + 5(5,8(7生长 牛奶凝固 pH 上 +厌氧洋菜生长 牛奶胨化 上 V—P反应葡萄糖+ 卵黄反应 阿拉伯糖+ 利用糖产酸十 + 接触酶反应 术糖 吲哚反应 甘露醇+ 注:+为阳性反应;一为阴性反应。 4(2感观指标 产品性状可分为液体和固体两类，应符合包装上标明的产品固有的形状、色泽、气味、均 匀程度、杂 质等，无异臭味，无异物。 4(3水分(固体菡剂) 不高于9(0,。 4 4粒度(固体菌剂】 应通过SSW0(400, mm的试验筛。 0(250 4 5微生物含量 地衣芽孢杆菌数?1× 109CFU,mL或g。4 6卫生指标 地衣芽孢杆菌饲料添加剂应符合 表2的要求。2 1461—2007 NY,T 表2地衣芽孢杆菌饲料添加剂卫生指标 项 目 指 标 ?10黄曲霉素B】(每千克产品中)，”g ?2(0 砷(每千克产品中)，mg?5(0 铅(每千克产品中)，mg?0(1 汞(每千克产品中)，mg 镉(每千克产品中)，rag ?0(5 杂菌率，, ?0( 1不得检出 致病菌(肠道致病菌和致病性球菌) ?400 大肠菌群(1009或100mL产品中)，个 霉菌总数(每克或每毫升产品中)，CFU ?2×104 5试验方法 5(1抽样 按GB,T 14699(1的规定，进行样品的采集。采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的 污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀。在卫生学调查基础 上，采取有代表性的样品。样品采集后应立即进行检验。 5(2感官检验 取一定量(固态250 mI。)的样品于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。 g、液态250 5(3水分测定 按GB,T 6435进行测定。 5 4粒度(固态添加剂)检测 5918规定执行。 按GB,T 5 5地农芽孢杆菌检测 5(5(1菌体形态检验: 5 5 1{染色:革兰氏染色和芽孢染色。 1 5(5 2形态检验:用营养琼脂，在306c条件下，培养48 h后，在无菌环境中，取菌体涂片染色，用光学 显微镜观察菌体形态。 5 5 2菌落特性检验:在营养琼脂、桑塔斯琼脂和牛肉浸汁琼脂平板上，30。C培养48 h后，观察菌落颜 色、形态和色素等。 Manual of Bacteriology))V01(?和《常见细菌系 5(5(3生理生化特征检验:参照((Bergey’S Systematic 统鉴定手册》的有关内容进行。 5(5 4活菌计数 5(5(4 1采用稀释倒平板法。按10倍稀释法制成不同浓度稀释液，从稀释液中分别吸取一定体积置 于无菌培养皿中，每一稀释度做3次重复。将事先融化并冷却至50。C左右的营养琼脂培养基，向每个 培养皿中倒人约12 mL，摇匀，待凝固后，倒置培养24 h，进行菌落计数。 5 5 4(2对培养后的每个稀释度取5个,10个菌落的菌体，涂片染色，进行显微镜识别。 5(5(4(3选择适宜的稀释度，菌落在30个,300个之间的平板进行计数。 5 5 4(4计算方法见公式(1)、(2): 专磊麓学一菌落平均数×稀释倍数×壤髓鹨罂泸×耍疆1面 ? 杂菌率(,)一百禄活香曩擎泵西薮× (2)1。。 NY,T 146卜一2007 5(6卫生检验 5(6(1黄曲霉素Bl检验 按GB ,T 17480规定执行。 5(6(2砷含量测定 按GB,T 13079规定执行。 5(6(3铅含量测定 按GB,T 13080规定执行。 5(6(4汞含量的测定 按GB,T 13081规定执行。 5(6(5镉含量的测定 按GB,T 13082规定执行。 5(6 6霉菌检测 按GB,T 13092规定执行。 5(6(7大肠菌群检测 按GB,T 4789(3规定执行。 5(6(8致病菌检测 按GB,T 13091、GB,T 4789(5和GB,T 4789(10规定执行。 6检验规则 6(1 出厂检验(交收检验) 感观指标、水分、粒度、微生物含量(含活菌数和杂菌率)指标为出厂检验项 目，由生产厂或公司的质 检部门进行检验，检验合格并签发质量合格证的产品方可出厂。6(2型式检验(例行检验) 一般情况下，企业半年进行一次型式检验。但有下列情况之一 时，亦须进行型式检验: a)更改主要原辅材料和关键生产工; b)新试制的产品或正 c)国家质量监督机构提常生产的产品停产3个月以上(或半年)，重新恢复生产时; 出要求进行型式检验。 7判定规则 a)检验中有一项指标不符合本标准时，应重新抽样，进行复检。复检结果仍有一项指标不符合本 标准时，则判定该批产品为不合格。 b)如有致病菌检出，不得复检，直接判定该批产品为不合格产品。 8标签、包装、运输、储存、保质期 8 1标签 8(1(1采用鲜明的标签贴于外包装。 8 1 10648的规定要求。 2标签内容应符合GB 8 2包装 应采用符合国家相关标准的、无毒的包装 材料。 8(3运输 运输中应避免日晒及35。C以上高温。气温低于O。C时需用保温车(8。C,10。C)运输。搬运 装卸时 4 NY,T 1461—2007 小心轻放，不得倒置，不得与有毒物质混装、混运。 8(4储存 应保存于干燥、阴凉、通风的仓库中，避免直接日晒，防止长时间35。C以上高温。不得和有 毒、有害 物质一起堆放，严防污染。 8(5保质期 本产品保质期为 12个月。 1461 2007NI,T 附录A (资料性附录) A(1营养琼脂培养基INutrient Ae(ar(NA) 蛋白胨10(0 g，牛肉提取物3(0 g，氯化钠5(0 g，琼脂15(0 g，蒸馏水1(0I。，pH7(0。 extract A(2牛肉浸汁培养基(Beef Agar) 取去脂肪的瘦肉500 g，切碎，于烧杯中加蒸馏水1(0 L，置4。C冰箱中过夜，用棉花过滤，将滤液于 水浴中煮沸1 h，使蛋白质凝固，过滤，在滤液中加入10(0 g蛋白胨和5(0 g氯化钠，调pH7(4，并将液体 补足1(0 I。，琼脂15(O g，分装后灭菌，备用。 A 3桑塔斯琼脂培养基(Sauton’S Agar) L蛋白胨20(o mL，琼脂15(0 g，MgS040(73 g，甘油15(o g，蒸馏水1(0 g，K2HPOa?3H202(5 pH7(0。