大鼠双氢睾酮(DHT)酶联免疫吸附测定试剂盒

大鼠双氢睾酮(DHT)酶联免疫吸附测定试剂盒 (DHT) 产品编号：E0443r TMUSCNLIFE www.uscnlife.cn 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中DHT含量。 用纯化的DHT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或品、生物 素化的DHT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的DHT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。 1、 一块（96孔） 2、 （冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml， 盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 pmol/mL，然 后做系列倍比稀释，分别配制成10 pmol/mL，5 pmol/mL，2.5 pmol/mL，1.25 pmol/mL，0.625 pmol/mL，0.312 pmol/mL，0.156 pmol/mL， 样品稀释液直接作为空白孔 0 pmol/mL。如配制5 pmol/mL标准品：取0.3ml （不要少 于0.3ml ）10 pmol/mL的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混 匀即可，其余浓度以此类推。 3、：1×20ml。 4、 ：1×10ml。 5、 ：1×10ml。 6、 ：1×120 /瓶（1:100）。临用前以1:100稀释（如：10 检 测溶液A / 990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总 量配制（100/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 ：1×120 /瓶（1:100）。临用前以1:100稀释。稀释方法同检 测溶液A。 8、 ：1×10ml/瓶。 9、 ：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10、：1×10ml/瓶（2 mol/L H SO）。 24 11、：5张 12、1份 1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、 微量加液器及吸头，EP管 3、 蒸馏水或去离子水，滤纸 1、 血清：全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可 检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。 2、 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于 1000g离心15分钟，取 上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。 3、 其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保 存，但应避免反复冻融。 实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37溶解；试剂或样品配制时， 均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。 计算时再乘以相应的稀释倍数。 1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加 或待测样品100，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触 及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37温育2小时。 2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 100（临用前配制），酶标板加 上覆膜，37温育1小时。 3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻 拍将孔内液体拍干）。 4、 每孔加（临用前配制）100，加上覆膜，37温育1小时。 5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。 6、 每孔加90，酶标板加上覆膜37（反应时间控制在15-30分钟，当 标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。 7、 每孔加50，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 液的加入顺序相同。 8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（值）。 ： 1、 所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照#说明#保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 2、 加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不 同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括 标准品及所有样品）最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。 3、 为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发； 洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给 定的温育时间和温度。 4、 ：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中 吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。 5、Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁 或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、工作液、工作液请依据所需 的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确 配制标准品及工作液，尽 量不要微量配制（如吸取时，一次不要小于10），以避免由于不准确稀 释 而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、工作液、工 作液。 6、加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如 颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 7、 底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 1、 手工洗板方法：将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，吸去（不可 触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几 次；根据需要，重复此过程数次。 2、 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠DHT，且与其它相关蛋白无交叉反应。 各标准品及样本 值扣除空白孔 值后作图（七点图），如设置复孔，则 应取其平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标（对数坐标），值为横坐标（对数坐标），在对数坐标 纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如 curve expert 1.3，根据样品值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为 样品的实际浓度。 0.156 pmol/mL - 10 pmol/mL，绘制标准曲线请取用以下浓度值：10 pmol/mL，5 pmol/mL，2.5 pmol/mL，1.25 pmol/mL，0.625 pmol/mL，0.312 pmol/mL，0.156 pmol/mL。 ：0.039 pmol/mL 1、 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析， 本产品可能存在一定的质量技术风险。 2、 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必 准备充足的标本备份。 3、 只有全部使用试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他 制造商的产品。只有严格遵守试剂的实验说明才会得到最佳的检测结果。 4、 在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的 污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 5、 试剂盒保存：请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20，其余试 剂短期保存请置于4，长期保存则置于-20。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于 -20，避免潮湿。 6、 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 7、 刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 8、 有效期：6个月。 9、 本操作说明适用于48T试剂盒，但48T试剂盒所有试剂减半。 豆丁致力于构建全球领先的文档发布与销售平台，面向世界范围提供便捷、安全、专业、有效的文 档营销服务。包括中国、日本、韩国、北美、欧洲等在内的豆丁全球分站，将面向全球各地的文档拥 有者和代理商提供服务，帮助他们把文档发行到世界的每一个角落。豆丁正在全球各地建立便捷、安 全、高效的支付与兑换渠道，为每一位用户提供优质的文档交易和账务服务。