头孢氨苄颗粒.doc

头孢氨苄颗粒.doc 上海健坤制药有限公司 头孢氨苄颗粒微生物限度检查法 验证 方 案 起 草 人 起草日期 年 月 日 质量管理部审核 审核日期 年 月 日 总经理批准 批准日期 年 月 日 编号:V/RF003-00 上海健坤制药有限公司 验证项目立项 编号:QA(A)-201 -R1-00 申请部门 QC中心 申请日期 年 月 日 立项题目 头孢氨苄颗粒微生物限度检查法验证 完成日期 年 月 日 验证原因 对测定方法的可靠性进行验证 类 别 验证要求及目的: 由于头孢氨苄颗粒具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，对供试品的抑菌活性、测定方法及检查法的可靠性进行验证。 立项部门负责人签名: 主管部门意见 签名: 年 月 日 QA中心意见 签名: 年 月 日 验证委员会意见 签名: 年 月 日 编制验证方案的要求及完成日期 验证完成要求及日期 总经理签名: 年 月 日 备注: 上海健坤制药有限公司 头孢氨苄颗粒微生物限度检查法验证实验方案 1、概述: 1.1微生物限度检查法是检查非无菌制剂和非无菌原料、辅料受微生物污染程度的方法。不同的处方和工艺条件生产出的样品、不同的仪器或材料及实验环境条件、不同实验方法等均可能对检验结果产生影响。当检验样品有抑菌性时，它们会掩盖药品已受污染的事实或造成低于实际污染水平的菌检结果。本方案主要依据《中国药典》2005版二部附录微生物限度检查法制定。验证步骤包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 2、验证目的: 依据《中国药典》2005版要求，制订了微生物限度检验操作，使用之前，必须做计数方法的验证。以证明该方法对头孢氨苄了颗粒微生物限度检验的准确性和可靠性。 3、验证范围: 本公司现生产工艺生产的头孢氨苄颗粒产品的微生物限度及控制菌检查。 4、责任: 4.1 QC检验员对实验过程负责，确保数据的准确性。 4.2 复核人员对实验数据进行复核，确保验证方案的准确性。 5、验证内容: 5.1验证所需环境、设备器具及其灭菌条件。 5.1.1 操作室: 阳性对照室、微生物限度检查室。 5.1.2洁净级别:洁净度10000级，局部放置100级净化工作台。 5.1.3主要设备、器具: 序号 设备名称 型号 厂家 1 高压蒸汽灭菌器 LS-B50L 上海华线医用核子仪器有限公司 2 微波炉 WP700(MS-2089T) 天津乐金电子电器有限公司 3 净化工作台 SDJ 上海淀山湖净化设备厂 4 电子天平 JA2003 上海天平厂 5 生化培养箱 SHP-150 上海精宏实验设备有限公司 6 霉菌生化培养箱 SHP-150 上海精宏实验设备有限公司 上海健坤制药有限公司 5.1.4设备器具灭菌条件:应在121?高压蒸汽灭菌30min或160?烘干灭菌2小时达无菌。 5.3. 所需菌种 大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44 102] 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003] 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501] 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001] 5.4方法:薄膜过滤法 5.4.1 取供试品加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液溶解稀释成1:10，得供试液; 5.4.2在直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45?的溶化的营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固。取1ml上述制备的试验菌液，滤过，取出膜，贴在已经浇好琼脂培养基的平皿上，测定其加入的试验菌菌数。 5.4.3 在适当的条件下培养，观察其是否有微生物生长。 5.4.4 然后将培养基分四组，试验组、菌液组、供试品对照组、稀释剂对照组。至少应进行3次独立平行试验，并分别计算供试品组和对照组试验菌回收率。 5.4.5 合格判断 3次独立的平行试验中，阴性对照不得有菌生长，稀释剂对照组的菌回收率应均不低于70%。若试验组的菌回收率均不低于70%，则该试验方法适用本公司头孢氨苄颗粒微生物限度 5.5具体操作 5.5.1检品来源:上海健坤制药有限公司 批号:取2008年生产的连续三批产品 5.5.2 菌液的制备 A 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤 培养基中，培养18,24小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含50,100cfu的菌悬液。 B 白色念珠菌的培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养24,48小时，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含50,100cfu的菌悬液; 5.5.3 供试液的制备 取供试品10g，加 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，制成即为1:10供试液。 5.5.4 回收率测定 上海健坤制药有限公司 A 阴性对照试验 取4个平皿，分成两组，一组倾注营养琼脂培养基，另一组倾注玫瑰红钠琼脂培养基，分别取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，薄膜过滤，作为阴性对照组。阴性对照不得有菌生长。 B 试验组 取8个平皿，分成四组，一、二、三组倾注营养琼脂培养基，四组倾注玫瑰红钠琼脂培养基。分别取1?10供试液1ml薄膜过滤、冲洗3次，每次100ml，在最后一次冲洗液中加入试验菌株，一组加入1ml浓度为50-100cfu金黄色葡萄球菌试验菌，二组加入1ml浓度为50-100cfu 枯草芽孢杆菌试验菌，三组加入1ml浓度为50-100cfu 大肠埃希菌试验菌，四组加入1ml浓度为50-100cfu 白色念珠菌试验菌，，取出膜，正面贴在已经浇好琼脂 -35?培养箱培养24-48小时观察结果。置23-28?的培养箱培养24-72培养基的平皿上，置30 小时观察结果。作为试验组。 C 菌液组 取8个平皿，分成四组，一、二、三组倾注营养琼脂培养基，四组倾注玫瑰红钠琼脂培养基。用薄膜过滤法，一组加入1ml浓度为50-100cfu金黄色葡萄球菌试验菌，二组加入1ml浓度为50-100cfu 枯草芽孢杆菌试验菌，三组加入1ml浓度为50-100cfu 大肠埃希菌试验菌，四组加入1ml浓度为50-100cfu 白色念珠菌试验菌，滤过，取出膜，正面贴在已经浇好的平皿上，一、二、三组置30-35?培养箱培养24-48小时观察结果。四组置23-28?的培养箱培养24-72小时观察结果。作为菌液组。 D 供试品对照组 取4个平皿，一组倾注营养琼脂培养基，二组组倾注玫瑰红钠琼脂培养基，分别取1?10供试液1ml薄膜过滤、冲洗3次，每次100ml，取出膜，贴在已经浇好琼脂培养基的平皿上，一组置30-35?培养箱培养24-48小时观察结果。二组置23-28?的培养箱培养24-72小时观察结果，作为供试品对照组。 E 稀释剂对照组 取8个平皿，分成四组，一、二、三组倾注营养琼脂培养基，四组倾注玫瑰红钠琼脂培养基。用薄膜过滤法，每张膜上均加入ph7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，抽滤后，一组加入1ml浓度为50-100cfu金黄色葡萄球菌试验菌，二组加入1ml浓度为50-100cfu 枯草芽孢杆菌试验菌，三组加入1ml浓度为50-100cfu 大肠埃希菌试验 上海健坤制药有限公司 菌，四组加入1ml浓度为50-100cfu 白色念珠菌试验菌，滤过，取出膜，贴在已经浇好琼脂培养基的平皿上，一、二、三组置30-35?培养箱培养24-48小时观察结果。四组置23-28?的培养箱培养24-72小时观察结果。 5.5.5 回收率的计算 细菌培养温度控制为30~35?，时间为48小时，逐日点计菌落数，以48小时的菌落数报告和计算回收率; 霉菌、酵母菌培养温度控制为23~28?，时间为72小时，24小时、72小时分别点计菌落数，以72小时的菌落数报告和计算回收率。 稀释剂对照组菌落数 稀释剂对照组菌回收率%= × 100% 菌液组的平均菌落数 试验组平均菌落数 —供试品对照组平均菌落数 试验组的菌回收率%= ×100% 菌液组的平均菌落数 5.6控制菌检查验证 5.6.1大肠埃希菌检查法:常规法 5.6.2供试液的制备 取供试品10g，加 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml溶解，制成即为1:10供试液。 A试验组:取1:10供试液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，同时加入上述大肠埃希菌液10-100cfu,置35?培养箱24小时，取上述培养物0.2ml，接种至含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。管内培养物应呈现荧光，为MUG阳性;观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，观察结果。 B阴性菌对照组:设定阴性对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性，验证大肠埃希菌的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。 取1:10供试液10ml加入100ml胆盐乳糖培养基中，同时加入上述金黄色葡萄球菌菌液10-100cfu，置35?培养箱内培养24小时，观察结果。 5.6.3 合格判断标准 试验组应为阳性即检出试验(大肠埃希菌)菌;阴性菌对照组为阴性即不得检出阴 上海健坤制药有限公司 性对照菌。 验证总评价 编号:QA(A)-201 -R3-00 验证项目名称 验证起始日期 验证小组成员 参加验证部门 验证结果报告概要: 结论: 验证小组组长: 年 月 日 验证委员会评价: 总负责人: 年 月 日 备注: 上海健坤制药有限公司 验证证书 编号:QA(A)-201 -R2-00 验 证 项 目 验证要求及目的 验证报告编号 验证报告名称 该验证项目及报告已经审核无误，予以批准。 特此证明。 QA主管: 年 月 日 总经理: 年 月 日 上海健坤制药有限公司