肠道菌群对双黄连口服液中连翘苷和芦丁的代谢作用

肠道菌群对双黄连口服液中连翘苷和芦丁的代谢作用 ,,,,年第,期 , ? ,? ? 方药 研究 ? : 液 中 连 翘 苷 和 芦 丁 的 代 谢 作 用 ,服 肠道 菌群对 双黄 连 , 董 珂 吴 筱 丹 李 士 敏 梁文权 浙 杭 , , , ( 江 大 学 药 学院 ? 州 , , , ) 摘 要 目的 : 观 察 和 比较 大 鼠 、 家 兔 肠 道 茵 群 对 双 黄 连 口服 液 中连 翘 苷 和 芦 丁 的 代谢 作 , , ,— 方 ， , 用 。方 法 : 采 用大 鼠 、家 兔的 新 鲜 粪 便 , ? 厌 氧培 养 ，用， , ,, 法 对 代谢 成 分 进行 分 离 定 量 分 析 。结 果 : 家 兔肠 道 茵 群 对连 翘 苷和 芦 丁的 代 谢较 快 ， 而 大鼠 肠 道 茵 群 对连 翘 苷和 芦 丁 的代 谢 过 程 相 比较 慢 。结 论 :在 离 体 务件 下 ，双 黄 连 口服 液 中连 翘 苷和 芦 丁可 以被 大鼠 、家 兔 的 肠道 菌群 代 谢 ，但 不 同种 属 动 物 之 间存 在 差异 。 关键 词 双 黄连 口服 液 连 翘 苷 芦 丁 肠 道 茵 群代 谢 高效 液 相 色谱 一质谱 联 用 黄 连翘 双 黄 连 口服 液 主要 由金 银花 、 芩 、 等 组 成 ， ,, ,, 厌 液 。取 ,, 肠 道 菌 液 ， 加 , , 氧培 养 液 中 清 适具 有 疏 散 风 热 ， 瘟 解 毒 之功 效 ， 置 , 用 于外 感 风 热 引 混 匀 后 得 肠 菌 培 养液 。 恶 喉起 的 头 痛 身痛 ， 寒 发 热 ， 痛 咳 嗽 等诸 症 。来 自连 翘 的 连 翘 苷 和 芦 丁 …是 双 黄 连 口服 液 中 的 重 要 有 效 裔 程 謦 成 分 。文 献 报 道 ， 翘苷 口服 基 本 不吸 收 ， 丁 口 连 芦 , 碳 除 空 气 后 ，密封 ，造 道 缺 氧环 境 ，置 , ? 水 作服 的 吸 收 率 也 较 低 ， 者 已成 肠 做 的 实 验 中 ， 大 鼠连 对 、 、, 、, 、, 、 , , , , ， 浴 培 养 , , 、, 、, , , 、, 、, 、, , 续 灌 胃给 以双 黄连 口服 液 ， 结果 在 血液 样 本 中也 未能 、 加 甲醇 ,, , 止 反 应 ， 涡 振 荡 , , ,, , ? , , ,, 漩 ,,，, , , , , 离 , ,取 ,, , 心 ,,,， 上 清 液 , 进 样 。同 时 做 空 白实 一检 测到 连 翘苷 和 芦丁 。而 另有 报道 ， 中草 药 以方 剂 的 形式 通 过 口服 后 ，药物 中的 有效 成 分在 进 入 肠道 之 后 取 ,,， , 验 ， 上 述 大 鼠 和 兔 肠 菌 培 养 液 各 , , 每 份 , ,，不 可避 免地 与 肠 道 菌群 发生 关 联 ， 某些 成 分经 相 应细 分 别 加, 使 , ,‘ 翘 苷 ?ヌ?水 液 ， 终 浓度 为 ,, , 较菌的 作 用 发生 代谢 转 化 后被 吸 收 ， 小部 分 的成 分则 , 余 取 ,一， 下 操 作 同 上 ， 上 述 大 鼠 和 兔 肠 菌培 养 液 以 原形 物 直 接 被 吸 收 。体 内环 境 中肠 道 菌 群 是 完成 ,,， , ， ,, 使 各 , , 每份 , , 分 别 加 , 芦 丁 单 体 水 液 ， 终 浓 中药 有 效成 分代 谢 的重 要 因 素之 一 …。为 了推 断 双 , , ,? 。， 余 度 为, , ,, 。 下 操作 同上 。 黄连 口服 液 中 的 连 翘 苷 和芦 丁 在 口服 后 的 代谢 吸收 ， ( , , —,, 法建 立 , , ，, , 方 本途 径 ， 实验 采 用离 体 方 法 分 析其 在 大 鼠 、 家免 肠 道 (( ,, , 对 双 黄连 口服 液 孵 育 液 检 测 的 色谱 条 件 为菌 的 代谢 情况 ， 以后 进一 步 的研 究提 供 参考 。 , ,, , ,, , ,( ,, 色 谱 柱 为 , ,, ,,, , ,, , ( (, ?,×, , ,，, 实验 材 料 (, ; , , ( ,醋 酸溶 液 ， , , ,)流 动 相 : , 为 甲醇 ，相 为 ,, , , 药品 与试 剂 双 黄 连 口服 液 由河 南 竹林 众 生 ( , ,,， , 梯 度 洗 脱 程 序 : , , , ,, 从 , ,线 性 变 化 到 批制 药 股 份 有 限 公 司 生产 ( 号, , , )连 翘 苷对 照 ,,, ; , , , , ,相 , , ,, , , ; ,, ,,， 从 , ,线 性 变 化 到 , , ;, 批品 购 自辽 宁 省 生 物 医 药研 发 中 心 ( 号, , , )芦 ,,, ， , ,， , , , ,,,,， , , ,,, 从 , ,线 性 变 化 , , , :, , , ,相 丁 对 照 品 购 自上 海 融 禾 医 药 科 技 有 限 公 司 ( 号 批 , , , , ,, 柱 , 保 持 , , 。流 速 : (, ? , ， 温 , ? 。 对 连 , , , )厌 氧 培 养 液 的 组 成 及 制 备 : , (, 溶液 ,, , : 取 ,, , 芦 色 翘 苷 、 丁 单 体 孵 育 液 检 测 的 色 谱 条 件 : 谱 柱 为 ,( ( ,,, ,。 , (, 液 ,( ( ,, , , ， ,, ,, ， , , ,, , , ,,,, ,, , , , , , , (,, ,(, : , ,, ,, , ,, ( , ,, ×, , ， , ,) 流 ,(,‘ , , ,,, ,， , ,,(,,, ) ) ，,(, ， (‘ , , ,( , , , ( ,醋 酸 溶 液 ， 保 持 动 ‘ , 相 : 相 为 甲醇 ， 相 为 ,, ,相,(, ? ) ? , ), —; , ,,’,, ( , , ,, ,, ， , ,,, ,, , ， ,,, , 流 ,(,，? , ， 温 , ? 。 ,,, 速 : , ,, 柱 , , ,, ,, , ， ,,,( ,,, 牛 肉 膏 ,，—, ,, ; ,, , ; ; , , , ， , , , , 质 谱 条 件 离 子 源 为 电 喷 雾 离 子 化 电离 源 白 蛋 (( 胨 , ， 蒸 馏 水 至 ,， 后 调 , ( ,, , 甲 醇 为 ,加 ,最 ,, , ( ; , , ;干 燥 气 流 速 : , (,? , : 雾 化 气 压 ( ,) , ,, , ,色 谱 纯 ， 为 重 蒸 水 ， 他 化 学 试剂 均 为 分 析 纯 ; 水 其 粪 ,, ,? 力 : ,,,;干 燥 气 温 度 : ,, :毛 细 管 电 压 : 便 采 于 健康 的 动物 体 ( 鼠 : 性 成年 ,, , — 大 雄 ,, , , ,, ,, , , ,;碰 撞 电压 :, , ,。,, , ，, , , , : 兔 : 西 兰 长 耳 白 兔 ， , , ,, , , ,, 家 , 新 ,, (( 芦 ,正 , ,, 质 谱 分 析 连 翘 苷 、 丁 在, , 离 子 全 扫 ,, ，,, , 大 鼠 和 家 免 均 由 浙 江 大 学 实 验 动 物 中 心 提 主 , , 〕 , 描 方 式 下 ， 要 分 别 生 成 〔 ， ,, 和 〔 ，,】 的 供 ， 洁 二级 ， 清 医 , ,, 号 动物 合格 证 号 : 动字 第 , , , , ) 准 分 子 离子 峰 ， 别 为 ,, , (和,, , ( ， 分 ,, , , ,, ,, 见图 ( , ,, 仪 器 , ,, ,, , ,, , 相 色 谱 一 ,,, ,, , , , , 液 ,。故将 其作 为定 量 分 析 时 的选 择 性 检 测 离 子 。 ,, 质谱 联 用 仪 ，配 有 电喷 雾 离 子 化 电离源 (, 。 ) (( , , , 方 法 专 属 性 在 双 黄 连 口 服 液 孵 育 液 检 测 , 方 法 与结 果 连 且 色 谱条 件 下 ， 翘 苷 和 芦 丁 的 分 离 度较 好 ， 孵 育 液 (, , 肠 茵培 养 液 的制 备 大 鼠 、家 兔 的 新 鲜 粪 便 中其他组分 不影响连翘和芦丁的检测 ( , 。 图 ) , , , 合制成悬浊液 ，分别与生理盐水按 比例 , :, ,, 在连翘苷 、 芦丁孵育液检测色谱条件下 ， 孵育液中其 ,, ,,,, ,? , 离 心 ,,,后 得 上 清 液 ， 即 为 肠 道 菌 , , 图 ) 他组 分 不影 响 连 翘 苷 和芦 丁 分 析 检 测 ( , 。 ,, 浙 江 医 药 高等 专 科 学 校 ?宁 波 , ,, , , , ～,浙 江 大 学 分 析测 试 中心 ? 州 , , , (,,, 杭 ,, , ,? , 黑 龙 江 中 医药 ? 湖 , ， , , , , , ,, , , , , ,? , ,, ， ? ， ,, , ( )和 连 翘 苷 ( ,, , , 的质 谱 图 图 , 芦 丁 ( ,, ,, ,, , () , , ～ , , , , , ,’ , , , , , , , ? , , 芦 丁 , 连 翘苷 图, , 兔 空 白肠 道 菌 孵 育 液 :代 谢 ,后 的 肠 道 菌 ( )孵 育液 , , 芦 丁 , 连 翘 苷 , 兔 图, ,:加芦 丁 和连 翘 苷 的 质控 肠 道 菌孵 育 液 ;,:芦 丁 代 谢 , 后 的肠 道 菌 ( )孵 育液 , 兔 ,:连 翘 苷 代 谢 , 后 的 肠道 菌 ( )孵 育 液 ((,, , 连 翘 苷 和 芦 丁 在 肠 道 菌 孵 育 液 中线 性 关 系 (项 连 按 , , 下 方 法 操 作 。 分 析 结 果 明 ， 翘 苷 在 ,,的考察 在含有, 预 先微波灭活过的肠道 菌 ( 大 、, , ,, ,? , , , , ,, ( , 浓 度范 围 积线性 , 蒸鼠 、家 兔 )孵 育液 中 ， 加入 , , 馏 水 ，精 密 内和 峰面 加入 芦 (,, ,, ， ,, , 关 系 良好 ， 丁在, , , ,, (, ,? 浓 度范 混 , 甲醇 连 翘 苷 和 芦 丁 的对 照 品 ， 匀 后 精 密 加入 ,,, ， 围内和峰 面积线性关系 良好， 线性回归方程 见表, 。 表 , 连 翘苷 和芦 丁 的 线性 回 归方 程 ,,, , 年 第,期 ? ((, ,, 方 法精 密度 和回收率试验 在 含有, , , 预 , , ? , ,, , 内 其 峰 面 积 比 值 均 大 于 ,, ( , ，表 明 两 者 在 , , 大先 微 波 灭 活过 的肠 道 菌 ( 鼠 、 兔 ) 育 液 和, 蒸 .