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【doc】性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究

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【doc】性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究【doc】性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究 性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相 关性研究 ? 44?坌堕墨堂皇堕!笙!查箜塑!:!!:』!三二:..:!:. 性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究 张佳婕,安振梅(成都大学附属医院检验科610081) ? 论着? 【摘要】目的对性激素结合球蛋白(SHBG)商品试剂盒进行方法学评价,以确定其分析性能是否符合临床 实验室应用的要求;建立SHBG的实验室参考范围,并分析其与睾酮,雌二醇的相关性.方法依据美国临床实验 室标准化协会颁布的EP5一A...
【doc】性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究
【doc】性激素结合球蛋白测定的方法学及相关性研究 性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相 关性研究 ? 44?坌堕墨堂皇堕!笙!查箜塑!:!!:』!三二:..:!:. 性激素结合球蛋白测定的方法学评价及相关性研究 张佳婕,安振梅(成都大学附属医院检验科610081) ? 论着? 【摘要】目的对性激素结合球蛋白(SHBG)商品试剂盒进行方法学评价,以确定其分析性能是否符合临床 实验室应用的要求;建立SHBG的实验室参考范围,并分析其与睾酮,雌二醇的相关性.方法依据美国临床实验 室化协会颁布的EP5一A,EP6一P文件,分别对SHBG试剂盒进行批内和日间精密度,线性评价;评价分析方法 的最低检测限.通过健康人建立实验室SHBG的参考范围,分析睾酮或雌二醇水平与SHBG的相关性.结果不 同SHBG浓度批内精密度变异系数(CV)分别为2.50和2.16,日间精密度CV分别为4.33和2.63;线性范 围为0.8O,183.60nmol/l时测定结果为线性;其他指标符合性能评价要求.男,女性SHBG呈正态分布,6O岁以 下男性sHBG参考范围确定为8.76,6】.44nmol/I,6O岁以上男性SHBG参考范围确定为2O.41,97.43nmol/ I;女性SHBG参考范围确定为10.26,129.94nmol/L.总睾酮或总雌二醇与SHBG无相关性.结论Roche公司 生产的SHBG试刺盒在精密度,线性范围等方面的性能满足实验室要求.总睾酮或总雌二醇与SHBG无相关性. 【关键词】性激素结合球蛋白;诊断试剂盒;精密度;参考值;睾酮;雌二醇;评价研究 DOI:10.3969/j.issn.1672—9455.2011.01.020文献标志码:A文章编号:1672— 9455(20I1)01—0044—03 Methodevaluationandcorrelationresearchofhumansexhormone-bindingglobulinZHANGjia—Jie,ANZhen—met (DepartmentofClinicalLaboratory,A,.,iliatedHospital,ChengduUniversity,Chengdu610081,China) [Abstract]ObjectiveToevaluatethemethodperformanceofhumansexhormonebindingglobulin(SHBG),to identifywhetheritcanmeettheclinicalrequirement,toselupthereferencerangeofSHBGandtofindoutthecorre— IationofSHBGtotestosteroneor?estradio1.MethodsThecommercialSHBGreagentkitwasusedtoassaySHBGin serumanditsprecision,linearityevaluationandthelowlimiteddetectionaccordingtotheCISIEP5一A,EP6一Pfiles. TosetuptheSHBGreferencerangeinlab.ToanalyzethecorrelationoftestosteroneorcstradioltoSHBG.Results Thewithinrunvariationformiddleandlowvalueswas2.5and2.16.The}mtween-dayvariationformiddleand lowvalueswas4.33and2.63.Iinearityevaluation:0.80— 183.60mnol/I.Thereferencerangeofmaleunder 60一year-oldwas8.76—61.44nlTlol/I.Thereferencerangeofmaleover60一 yearoldwas8.76—61.44nmol/I,The referencerangeoffemalewas10.26— 129.94mnol/I.Therewasnocorrelationofthetotaltestosteroneortotales— tradioltoSHBG.ConclusionThemethodperformanceofSHBGfitstherequirementoflab.Thereisriocorrelation oftotaltestosteroneortotalestradioltoSHB(. [Keywords]sexhormonebindingglobulin;reagentkits,diagnostic;precision;referencevalues;tes— tosterone:estradio1;eva1uationstudies 性激素结合球蛋白(SHBG)是由肝细胞合成分泌的一种 循环固醇类结合糖蛋白.SHBG的主要功能是特异性地结 合并转运性激素,主要结合睾酮,其次是雌二醇,其水平是维持 雄激素/雌激素相对平衡的间接指标,并与胰岛素抵抗有明显 关系].因此SHBG可作为体内睾测定的补充,并埘内分 泌代谢性疾病有重要意义.为评价双抗体夹心法SHBG商品 试剂盒的性能指标,本研究依据美国临』术实验室标准化协会 (CISI)颁布的EP5一A和EP6一P文件对该试剂盒进行精密度, 线性范围等评价,并对华西医院200名健康人群进行SHBG 检测,建立适合该实验室的四川I地区的参考范嗣,分析了61例 患者睾酮或雌二醇与SHBG的相关性. l与方法 1.1材料' 1.1.1仪器RocheModularEl70电化学发光免疫分析仪. 1.1.2试剂Roche公司生产的SHBG检测试剂盒(舣抗体 夹心法),规格为M:链霉素包被的微粒(透明瓶)1瓶,6.5m1, 链霉素包被的微粒0.72mg/mI;防腐剂.R1:生物素化的抗 SHBG抗体(灰色瓶)1瓶,10mI,生物素化的抗SHBG单克隆 抗体(鼠)1.25mg/mI;磷酸盐缓冲液100mmol/L,pH7.2;防 腐剂.R2:钌Ru(bpy3.标记的抗SHBG抗体(黑色瓶)1瓶, 10m1,钌复合物标记的抗SHBG单克隆抗体(鼠)1.25rag/ m1;磷酸盐缓冲液100mmol/I,PH7.2;防腐剂. 1.1.3校准品SHBG校准品由Roche公司提供. 1.1.4临床样本四川大学华西医院体检中心健康人群,经 体检无心,肺,肝,肾等主要脏器疾病,无脑血管病,糖尿病,原 发性高血J玉等代谢性疾病,共200名,其中男性100名(21,84 岁,平均46.6岁),女性10?0名(21,81岁,平均40.5岁).61 例患者为排除其他疾病的睾酮或雌二醇水平异常者,男33例 (19,94岁,中位年龄39岁),女28例(23,67岁,中位年龄 36岁). l_1.5样本采集符合上述标准的人群,用BD真空血清采 血管,按常规采血步骤采血4mI,1h内以3000r/min离心10 检验医学与临床2011年1月第8卷第1期IabMedClin,January2011,Vo1.8,No.1?45? min,血清完全分离后上机检测. 1.2方法 1.2.1分析方法电化学发光免疫法. 1.2.2评价前准备分析者对分析方法,仪器和评价进 行了解熟悉,对仪器进行常规维护,以保证仪器在评价期间处 于良好状态. 1.2.3校准使用Roche公司提供的SHBG校准品进行完 整校准(FullCalibration). 1.2.4精密度试验选择两份不同SHBG浓度的虹清标本, 按照CISIEP5A文件要求,分别进行批内和日间重复性试 验.批内重复性试验方法为存同1天内重复测定待测物2O 次,日间重复性试验方法为连续20d内每日测定待测物1次, 并分别计算均值(),标准差(s)及变异系数(CV). 1.2.5线性范围试验患者低(7.26nmol/I),中(78.68 nmol/I),高(183.60nmol/I)值血清SHBG标本分别用Roche 通用样本稀释液(rocheuniversaldiluent)各稀释为4,5个不 同浓度(最低0.80nmol/I;最高183.6nmol/I),随机排列,每 个浓度测定两次,分段检测线性,当天完成. 1.2.6最低检测限试验重复测定Roche通用样本稀释液 lO次,按XI一+2s计算.xI为方法的最低检测限(1owlimit— eddetection,LID). 1.2.7参考范围的确定对200份检测结果按男,女分成两 组,再以20岁起间隔10岁分组,男,女各5组. 1.2.8SHBG-与睾酮,雌二醇的相关性分析对睾酮水平异 常(<2.0ng/ml)的成年男性标本33份,成年女性标本28份 分别测定其SHBG水平,并分析睾酮及雌二醇水平与SHBG 的相关性. 1.3统计学方法用SPSS11.5软件对数据作统计学处理, 绘制频数分布图,计算出各组,并作均数t检验. 2结果 2.1精密度试验结果两份不同SHBG浓度的血清标本批 内和日间精密度结果见表1,2.表1显示分析方法的批内精 密度均小于1/4总允许误差(TE),表2显示日间精密度均小 1}3"FEn 表1SHBG批内精密度分析结果("一20次) 2.2线性范同试验结果按CISIEP6一P文件进行线性试 验,结果见图1,3.图1,3线性范围分析显示低,中,高浓度 均成线性,故SHBG线性范围为0.80,183.60nmOl/I. 2.3最低检测限试验结果<0.49nmol/I. 2.4参考范围确定结果SPSS11.5统计软件分析结果显 示,男,女性数据的频数分布呈正态.由于SHBG低,高值都 有临床价值,故用正态分布法统计95参考值范围.对男,女 性相同年龄段数据进行t检验(表3),并对男性各年龄段进行 方差分析,合并年龄段后再进行方差分析;女性分析方法亦如 此.最终计算出6O岁以下男性与6O岁以上男性的SHBG差 异有统计学意义,而女性不同年龄段之间SHBG无统计学差 异.故6O岁以下男性SHBG参考范围确定为8.76,61.44 nmol/L(平均35.10nmol/I),60岁以上男性SHBG参考范围 确定为2O.4l,97.43nmol/I(平均58.92nmol/I);女性SH— BG参考范围确定为l0.26,l29.94nmol/I(平均70.1O nmol/I). 二 g 坦 艘 8.?) 6.瀚 4.00 200 O.00 O002O04,O800800 实测值(nmo}儿) 注:线性回归分析,Y一0.9734X+0.1863;rE0.9999. 图1低浓度线性范围结果 表2SHBG日间精密度分析结果(,z一20d) l一 斟 000200040006000800010000 实测值(nnlOl/L) 注:线性回归分析,Y一1.0061x+0.4968;r一0.9992. 图2中浓度线性范围结果 二 l一 趔 刚 0O050O01O0.O01S00020O00 实测值(r肝DI/L) 注:线性回归分析,y一1.0276x5.7826;r一0.9998. 图3高浓度线性范围结果 表3200名健康成人SHBG与年龄,性别的关系 2.5SHBG与睾酮,雌二醇的相关性33例男性患者睾酮水 ?? ? 46?检验医学与临床2011年1月第8卷第1期LabMedClin,January2011,Vo1.8,No.1 平与SHBG水平未见显着相关,一0.01l4(图4);28例女性 患者雌二醇水平与SHBG也未见显着相关,r一0.0015 (图5). 0l0203o?50 SItSG浓度trH?I/L 图4睾酮与SHBG的相关性 051015?2530 SNtfi浓度(rmI/L) 图5雌二醇与SHBG的相关性 3讨论 传统SHBG的测定方法有酶联免疫吸附试验(EIIsA), 放免法等,但其重复性不高,操作较繁琐,且有一定放射性危 害.Roche公司推出了适用于RocheModularE170等分析仪 的双抗体夹心法sHBG商品试剂盒.其原理是,样本与生物 素化的SHBG特异性单克隆抗体,钌标记的SHBG特异性单 克隆抗体形成夹心复合物.再加入链霉亲和素包被的磁性微 粒,利用生物素和亲和素之间的特异性作用将复合物结合到固 相微粒表面.磁性微粒被吸附到电极表面,加入反应液洗去未 结合物质,同时电极加压,电化学活性物质产生化学反应并发 出光子被光电倍增管接受. 按CIIA88要求,日内精密度(cv%)应小于1/4TEa,而 日间精密度应小于1/3TEA,该检测系统在不同浓度及不同时 间下的精密度均满足要求.但对精密度进行评价时,除了方法 , 学本身外,校准品的稳定性也会对结果造成很大影响.因此精密度试验时应严格按照规定的校准方法进行校准,且 整个试验应尽量用同一批号试剂和校准品进行.本研究的线 性试验采用分段检测法,目的是为了避免标本过度稀释出现的 基质效应.sHBG的线性试验证实厂家提供的范围是可以达 到的.方法的分析范围确定,其报告范围也随之确定,对于超 过线性范围的样品,应用适当的稀释液和稀释方法进行稀释后 重新分析,但需注意不可超过最大稀释倍数进行稀释.由于本 研究采用电化学发光免疫分析双抗体夹心法检测,使用了生物 素化的单克隆抗体,若患者接受高剂量生物素治疗或产生高滴 度的链霉素抗体等会对测试产生干扰,故应待患者生物素完全 吸收后再采样或将标本稀释后测定. 虽然电化学发光法检测SHBG是采用罗氏的封闭检测系 统,所有的试剂和消耗品都来自于罗氏,但厂家说明书提供的 所有参数都是厂家在国外的最佳条件下完成的,而不同实验室 的外部条件和最佳条件都存在较大的差异,如水质,电压,实验 室温湿度,人员的操作习惯等.因此,每个实验室最好建立自 己的方法学参数j. 本研究选定体检中心的健康成人标本建立SHBG的参考 范围.考虑到SHBG与性激素有关,因此本研究分性别,年龄 段进行了检测与统计.结果显示,男,女性两组检测值均呈正 态分布,并且由于SHBG高,低值均有l临床价值,故参考区间 取双侧正态分布设立.通过相同年龄段不同性别的SHBG比 较显示,每个年龄段女性的SHBG值均高于男性,与同性别不 同年龄段相比,女性随着年龄的升高,SHBG值略有上升,这可 能与绝经前后激素水平的不同有关,但统计学比较显示女性不 同年龄段之间的测定值无统计学差异,故最终女性参考范围是 将所有年龄段测值合并而得到,为1O.26,129.94nmol/L. 而男性6o岁以下SHBG无明显变化,6o岁以上的sHBG显着 升高,统计学比较显示有统计学差异,故男性参考区间为6O岁 以下8.76,61.44nmol/L,60岁以上2O.41,97.43nmol/L. SHBG在血浆中主要与睾酮或雌二醇结合,但本研究发现 血浆总睾酮或总雌二醇水平与血浆SHBG水平无相关性.推 测SHBG与游离雌二醇而非总雌二醇相关,同样推测SHBG 与游离睾酮而非总睾酮相关,故下一步可进行该方面验证. 综上所述,该SHBG试剂盒用RocheModularE170电化 学发光免疫分析仪测定特异性好,重复性高,结果准确,有一定 推广价值,能满足临床检测要求.男女性别之间SHBG值有 显着差异,各年龄段也有一定差异,但由于地区人群差异以及 实验室环境差异,各实验室应建立自己的SHBG参考范围. 总睾酮或总雌二醇与SHBG无相关性,下一步可进行游离性 激素与SHBG的相关性验证. 参考文献 [1] [2] [3] [--4] [5] [6] HammondGL,AvvakumovGV,MullerYA.Structure functionanalysesofhumansexhormone—.bindingglobu—. lin:effectsofzinconsteroid-bindingspecifieity[-J].Ster— oidBiochemMolBiol,2003,85(2-5):l95—200. 王素美,迟闺珠,张震宇,等.妊娠期糖尿病性激素结合球 蛋白与胰岛素抵抗的相关性研究[J].中国全科医学, 2007,10(6):459-460. TokEC,ErtuneD,EvrukeC,eta1.Theandrogenicprofile ofwomenwithnon-insulindependentdiabetesmellitus 752. [J].ReprodMed,2004,49(9):746— LivingstoneC,CollisonM.Sexsteroidsandinsulinresist— ance[-J].ClinSci,2002,102(2):151-166. 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