青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响

青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响 ,,年 ,月第 , 卷第 ,期 ,, , 成都 中医药大学学报 , , , , ,, 。 ( , ,( , ,， , ( , ,, , , ,, , , , , ,,,, , , , ,,,, , ,, , , ,,,, , , , , , ? , ? — — — — 青藤 碱 对小 鼠骨 髓树 突状 细胞 免 疫 功 能 的影 响 高永翔 龚立 田艳 勋 杨 雪 汤洪萍 成 ,) ,, , , , ( 都中医药大学 ， , , 成都 ,,, ) 摘 ,,, ; , , 免疫功能的影响。方法 小鼠骨 , ;, , 要 : 目的 研 究青藤碱对小鼠骨髓树 突状细胞(,, , ,, ) ,— , 培养 ,, 再加入不 同浓度青藤碱培养 , ,髓细胞用 , , , 。 , , 。流式细胞仪检测细胞达 , ,—,,的能 ,，, 混合淋 巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果力，, ,检测 细胞产生的细胞 因子 。 青藤碱刺激后的 , , ,、 ,细胞表达 , ,— , 产生细胞 因子和刺激同种 同基 因 ,细胞增殖的能力显著低于正常 ,,细胞。结论 青藤碱可抑制 , ,的发育成熟和免疫应答功能。 关 键 树突状细胞 ; 青藤碱 ; 免疫应答 ,,, , , , 中图分 类 号 : , , (;,词 : ,, 文献标 识码 :, ,,,, (,,, ,,, 文 章 编 号 :,,一,, ,, ),, ,—, , ;,, , , , , , , , ， , , ,; ,,, ,, , ,,, , , , , , , , , , , , , , ,, , ;, , , ,, , , , —,, , , , ,,; , , , ,, , , , , , — , ,, , ,, , , ,,,, , , , , ,, ,, , 一 ,, ,，,,,, , , ,, , —, ,，, , , ， ， ,, , , , , ,,,, , ,, , ,,,,, , , , , ,; , , ,,,,, ，, , , ,, , ,, , ; , ( ,,, , , , , ,,,,, , , ,,, ，, , , ，,,, ,, ) ,, ;: ,;, : , , , ,,, ,, ,, , ,,,,, , , , , ,, ,, , , ,, , , , ,, , , , , , , ,,,,,, , , ,, , , ; , , , ,, , ,,, , , , , , , , ; , , ,, , , , ,, , , ; ,, , , ,, ,, , ,,,,, , ,, , , ( , , : ,, ,, , ;, , , , , , , ,, , ,—,, , ,,,;;, ( , , ),, , , , , , ,,, ,—, ,, ,,,,, ,—, , , , ,,, ,, , , , ,, , , , , , , ,, , ,, , ,, , , , , ,, ,, ,, , , ( , , ,, , , , ,,,, ,, , , , , ;、 , , , ,, , , ,, , , ; , ,, , , , ,, , , , , , , ,,, , , ; ,; , ,, , —,, , ,,, , ,, ,, , , , , , , ,,, , , , ; , ,,, , ,,, ,, , , , ,, , , , , ;, , , , , ,, , , , , , , , , , , , , , ,, , ,, , ( , , ,, ,,, , , , , , , ,, , , , ( , , , , , , , ,, , , , , , , , , , , , , ,,,, , ,, , , ; , , ,, ( , , , , , , , ,; , , , , , ; , ,, ,, , , ,,, ,, , ,, , , ,,,, ,, , ,,,, ,, ,,,,,: ,,, ,,,, , ,, ,, ,, , ,, ,,, , ,, , ,,, , , ,, , , , , ,,, ,、 , ， , , , , , ,, , ,— , , , — , , , ， 一 , , ,,,, ,, ,, , , ,, ,, , ,, ,,, ,, , , , ,,; , ;, ( , , , ;, , , , , ,, , , , , ,,, , , ,,,,, ,,, , , , , , ;, ,,:, ,, ,,, ,, ,, ,, ,, ,, , , , , , , , ,, , ,,, , , ,, , , , , , , ; ,,,,, ,, , , , , , , , , ,,;, , , ,, , , ,,, ,,, , ; , ,, ,( , ,, , : , , , , ; , , , ; , ;, , , , , , ; , ,, , , ,, ,, , , , , , , , , , ,, , , , , , 树 突状 细 胞 ( , 是 一 种 数 量 少但 分 布广 泛 并 , ) 藤碱对 , , , ,—, 表 达水 ,表面 白细胞 抗 ( , ,)可迁移的抗原递呈细胞( , )来源于 , , 骨髓干 ,, ， 原 一, ,, 平和细胞 因子产生及 , 并 ,免疫功能 的影 响 ， 进一 细胞 ， 目 已知功能最强 的专职 , , , 是 前 , 。, 可调节 步探讨该影响在青藤碱调节机体免疫状态 中的可能 各种效应细胞的功能并在调控免疫应答 中起核心作 作用 。用，最大的特点是捕获外来抗原 ， 并迁移至引流淋巴 , 材 料和 方 法 ( ,, 主 要 试 剂 生启动和诱导 ,细胞分化产 结发育成熟并递呈抗原 ， 免疫反应或直接激活 ,细胞及产生免疫记忆。 , ,—, ,和 ,， ,, , ,,,; ,公 ,,一,均 购 自 ,,,,,, , , , ,, ) 青藤碱(, , , ,为青风藤 的主要有效成分， , 司 ;, ， ,,购 自 ,,, 司 ; ,, —, ,, , , , 一,, , 公 ; , , ,, , , ,, , 免疫抑制、具有抗炎 、 降血压、 镇痛 、 抗心律失常等药 — ,,单克隆抗体( ;, 和异硫氰酸荧光素 (，, ,,) , , ) 临床使用青藤碱治疗类风湿性关节炎等各 理作用 ， 为 , , 公司产品; 鼠 , 一 和 几一, , ,检 , ,, 小 , , , ,, ， ,种风湿 自身免疫疾病取得较好疗效。但不清楚青藤 , 测试剂盒购 自深圳晶美生物技术公司 ;,胸腺 嘧啶 ,碱是否通过 , 而发挥药理作用。本实验将研究青 , 脱氧核苷(, 豫 ) 为中国科学院上海核技术开发 四川省科 学技 术厅科 研基金应用基础研 究项 目(基金项 目: , , , ,,) ,, , 编号 : , ,, ,, 高永翔 ， , , ,作者简介 : , 男， , 年 ,月生 ;医学博 士， 副教授 ; 究方 向: 医药与 免疫。 研 中 ? , , ? 成都 中医药大学学报 ,, , ,, 年第 , 卷 公 司产品。 孑 平均值表示。 果以 , , ,, 实验 动 物 ( , 实验 结果 ,,; 仑， — 周龄 ，, ,, 由成都 中 , , , 小 鼠， , , , — ,， ( , , —, , , 对 , 表 面 , , ,表达水平的影响 医药大学动物实验中心提供。 经青 藤 碱 刺 激 后 , , ,表 面 , ,—,,表 达 水 平 ( ,, , ),, 骨髓 , ( , , 的分 离与 纯化 明显 下 降。见 表 , 放入 , ,酒精浸 泡 , 颈椎脱位法 处死 小 鼠， , , 表 , 小 鼠骨髓树突状细胞 加 —,,表 达水平 与青藤 ,，,,在超净工作台下无菌取小 鼠后肢股骨 、 胫骨 ， 利 ,,, ) 碱 浓度的关 系 ( , , 液(,, () , 用 , , , ,, , ,注射器冲洗出骨髓细胞 ， 青 藤碱浓度 ( ，, ,, ) ; ,, , ,,—, , , — ,, , ,洗 ,次 ， 含 用 , , ,,溶 去 红 细 胞 后 ， , 用 , ,( ( , ,? , ,, ,—, , , ,, ),,,, , ( ,, ) , (,,, , 、 ,一, ,,, , 的完 全 培 , ,( ( , ,? , , ( ×,, 个, , 铺 , ,养基重悬至 ,, , , ， 于 , 孔培养板上 ， , , ,( ( , ,? , ,, 孔 于 ,,，,;,培养箱中培养 。第 , 轻轻 ，，, ， ,, , ; , , , ( , , ,?,( 吸弃全部上清 ，晃动培养板 ， 、 及 去除 , ,和粒细胞 ， 第 时补入 含细胞因子浓度相 同的完全培养基 ， ,, ( , ,, ， ,, 墨 墨终 丝 , ,, (, ,, ,, (, 置于培 轻轻吹吸下疏松粘 附于培养板底的聚集体 ， ( ,, 对 ,,产 生细胞 因子 的 影响 养瓶中并加入等量的上述完全培养基 ， , 继续培养 , 经青藤碱刺激后 , , —, , ,分泌 , , 和 皿 一, 均 , 。 表 , 不 同浓度青藤碱对小 鼠骨髓树 突状细胞 因有不 同程度的下降。见表 , 子 产生的 影响 (,, 给药与培养 ，,,) (, ,?, ,细胞 ， , , 收集上述 , , 用 , 洗涤后加入上述 调整 细胞浓度 为 , ,个, ,进行分 完全培养基 ， ×,, , 分别 组实验 。根据加入 的药物浓度不 同共分 四组 ， , 、,, ,, , , , ,为空白对照组和青藤碱 ,, , , ,, 、, , ,孔 培 养板 上 ， ，, ， , ?， ,度组 ， 于 , ， ,, 孔 于 浓 铺 , , , 培养箱中培养 , , ,, ,。 量 墨丝 些筮 , ,, ， ,, ,,, (, ,, ,, (, ( ,表面 ,,—, ,, , ,表达水平的检测 ( ,, 对 ,,抗 原提 呈 功能 的影 响 ,, ×,, , ， 调 整 , ,浓 度 为 , ,个, , 每 个 小 离 心 经青藤碱刺激后 ,,对 同种混合 淋巴细胞的增 ,管中加 , 细胞悬 液， 加入 , 按间接免疫荧光法 ， , , 标记的抗 ,, , ， , , ,。用 , ,, ，, , , , ,— , 置 ? ,,, , 殖作用下降 ， 反映其抗原提呈功能降低。见表 , 表 , 不同浓 度青藤 碱对 小 鼠骨 髓树 突状 细胞 提呈 抗 通过 , ,检测 , 表面 ， ,— ,表达水 洗涤 ,次 ， , , , , 原能 力的影响 ( , ,,, ) 表达为荧光值( , )平， , ,。 .