免疫组化

免疫组化 免疫组化步骤 (1)石蜡切片脱蜡，二甲苯?、二甲苯?、二甲苯?室温下浸泡各15分钟。 (2)梯度酒精水化:100,酒精室温下浸泡5分钟 95,酒精室温下浸泡5分钟 80,酒精室温下浸泡5分钟 75,酒精室温下浸泡5分钟 (3)自来水反复冲洗3×5分钟。 (4)PBS冲洗3×5分钟。 (5)抗原修复:,先将盛有枸橼酸盐缓冲液Tris的抗原修复盒放入微波炉内预 热5分钟，再将切片放入修复盒内，置微波炉内加热，使修复盒内液体温 度保持在92?-98?之间并持续15分钟，取出容器，室温冷却40分钟。 (6)去除内源性过氧化物酶3,HO溶液室温孵育20分钟，PBS冲洗3×5分钟; 22 )滴加山羊血清工作液，室温孵育15分钟后倾去; (7 (7)滴加一抗，湿盒中4?冰箱过夜。次晨，复温20分钟后，PBS冲洗3×5 分钟; (8)滴加二抗，室温孵育10分钟PBS冲洗3×5分钟。 )滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液，室温孵育10分钟PBS冲洗3×5分钟。 (9 (10)DAB显色:将DAB显色液滴加于每张切片上，显微镜下观察显色结果，待 阳性部位出现特异性染色而背景无着色时，自来水冲洗终止显色。 (11)苏木精溶液浸泡2分钟。 (12)自来水冲洗。 (13)盐酸酒精分化15秒。 (14)自来水冲洗。 (15)温水返蓝。 (16)梯度酒精脱水:75,、80,、95,、100,酒精浸泡各5分钟。 (17)二甲苯?、?、?各3分钟透明。 (18)待干后树胶封片。