卡介苗活菌计数方法的探讨

卡介苗活菌计数的探讨 中国公共卫生管理2002年第l8卷第5舅(堂箜墅塑2:丛丛::!::: 心主任签字,然后批准签发.样品检测报告未经批准不得复 制,上述程序和操作过程,均由计算机统一完成. 3样品检测的评价 检测样品的评价,随检测结果同时完成.根据相应的国家 卫生或其它标准规范,由各业务科室对本科的送检样品, 检测结果进行卫生学评价.主要用于食品卫生,公共场所,劳 动卫生,生活饮用水,学校,放射卫生,消毒效果等评价.它的 评价环节和功能有:样品送检,样品收发,卫生检验检测,卫生 学评价,领导审批,检验结果报告等. 4检测样品信息查询 4.1动态查询:反映样品是否完成送检,收样,检验,评价,审 批报告.能及时发现控制未检验,评价,审批,签发的样品.及 时地完成结果报告. 4.2综合查询:一般由样品标准名称,样品名称,被检单位名 称,送样人,项目,合格与否,送检日期等信息组合查询,并打印 输出.单位负责可以查看所有样品. 4.3检验查询:根据检验日期范围,检验性质,按检测项 目或样品编号方式查看对应的样品卡,实验记录单,结果登记, 检测报告等. 4.4检测标准的查询:检验标准的查询,可根据样品检测的项 目,列出名称,由信息中心上网查询,发现样品检测项目所需标 准已过期,立即进行修正重新按程序检测. 5检测样品管理监督 样品质量监督员应严格履行职责,进行监督检查,及时纠 正不正确的操作方法,遇到问题,停止检测,分析原因.在质量 监督员监督下,检测人员对原样重新检测,同时应对检测项目 进行检查,其检测依据,标准单位,小数位数,原始记录,仪器校 准等是否按规定符合规范. 6效果分析 6.1ISO/IEC一17025实验室认可后有利于检测样品管理规范 化,它的方针是公正,科学,准确,规范,它的最终目的是为社会 提供优质,高效的服务,为经济建设服务. 6.2实验室国家认可后,其客户送检的样品,检测项目齐全, 保密性与安全性能得到进一步加强,客户只要出示有效证件, 经中心领导批准就可直接从计算机查询.这样就直接地保护 了客户的利益. 6.3有利于样品检测卫生学评价,在计算机统一编制后,通过 局域网输送相关科室由业务科室分别填写评价内容,这样就规 范了检测报告的准确性和实用性.同时也为客户提供了有价 值的信息以及检测样品的卫生,保健,产品质量方面资料,其意 义十分重大. 6.4在样品收发,储存,检测报告中,我们引进了先进的计算 机处理系统,装备了计算机网络信息中心和标准数据库,将样 品管理员,检验人员对数据的手工操作改为计算机操作,并代 替了工作人员手工标准检索,节省了大量的人力,物力,缩短了 工作时间,减少了差错事故发生,达到了信息资源共享的目的, 掌握了整个样品管理动态信息,提高了工作质量.为国内外客 户树立了一个良好的窗口形象. 65实验室国家认可后,检测样品管理的第一关是完成整个 检测任务的重中之重.如何把好这一关我们的体会是,首先管 理人员的素质要好,要选懂相关业务技术的人员,并要有高度 的责任心.其次是一定要有一套完整的信息管理系统,并要根 据工作量,不断地更新软硬件.本中tL,信息系统解决了检测样 品监控,资料归类,整理,查询,评价等难题.这一整套程序值 得推广使用. {收稿日期:2002.07—08) 卡介苗活菌计数方法的探讨 朱甫英刘国红戴天京黄瑛吴纯华(湖北省潜江市卫生防疫站,433100) 1卡介苗的检定 生物制品单位生产的每批卡介苗均须严格的检定,合格后 方可使用. 1.1物理化学检查,液体卡介苗五乳白色菌悬液,不应含有有 异物或摇不散的菌块,每批应测PH6.4—7,2.冻千卡介苗应呈 白色疏松体状,加入稀释液后,应于3分钟内完全溶解成菌量 液.每批菌须作涂片检查,抗酸染色,均为抗酸杆菌,长1—4 微米,宽O.3O.5微米,无荚膜,鞭毛,芽胞,不应有粗大致密 的菌团. 1,2活力试验:(1)活菌计数:(另作详细介绍);(2)吸氧量的 测定,测定活菌的新陈代谢方法,用瓦勃耗氧计测定(又称瓦氏 呼吸计)卡介菌的吸氧量与活菌数之间呈平行性的相关,此法 只需2小时即可得出结果,用此法预测质量,起到快速稳定的 作用;(3)TTC(氯化三苯四氮唑)还原反应:活菌能还原TIC产 生紫色,24小时可得出结果,但不如活菌计数方法可靠. 2卡介菌的活菌计数方法 卡介苗有液体卡介苗和冻干卡介苗,使用途径不同,其浓 度也不同.(1)皮内注射菌苗含菌浓度0.5—0.75rag/ml;(2)口 服菌苗含菌浓度10—30mg/ml;(3)皮上划痕菌苗含菌浓度印一 75rag/ml;(4)多刺法菌苗含菌浓度2O一50rag/ml. 在做卡介苗活菌计数时必需首先观察瓶标,并记录菌的种 类,含菌浓度(mg/III1)批号,失效期,计数日期. 活菌计数是卡介菌重要质量指标之一.是测定每毫克卡 介苗的活菌数.常用方法是采用改良罗氏鸡蛋培养基进行活 菌数检定,以两个稀释度培养的菌落平均数计算,每毫克菌苗 应含一定活菌数.生物制品所生产卡介菌规定的质量检验指 标,活菌数应在107/毫克以上.即每毫克卡介苗有1000万上的 活菌.WHO则规定用3个稀释度,按统计学方法计算.用罗 瓦鸡蛋培养基进行活菌计数检字需46周方能得出结果. 3操作步骤 3.1常规测定方法:卡介苗的稀释方法按各种不同浓度的菌 苗而定,现以液体皮内注射菌苗每支O.75mg/ml为例:(1)取中 中国公共卫生管理2002年第眷筮塑f篁箜塑2:!!:!!:— 试管5支,标明1O,,1O,,1O,,1O一,1O,,取苏通氏稀释液 45ml,分别在5支试管中各加9ml.(2)取BCG(O.75mg/m1)5支 摇匀,吸取lml,加入第一管,制成0.1ing/ml菌液,然后按lO倍 稀释法稀释. 菌浓度mg/ml10一1O一1O一1O1O 苏通稀释液ml99999 BCG(0.75mg/m1)11111 (3)取罗氏培养基3O支,标明菌的浓度,每个浓度管取 1O,,1O,,1O三个浓度的菌液各0.1ml,摇匀在培养基的 面,放人37?恒温箱中培养46周.(4)以其中100个菌落以 下的两个浓度培养的菌数平均数计算每毫克的菌落数. 1O,,1O一,1O一 例1O管平均菌落数为>200455.5 则:10,,1O两个浓度计算 10-4==45×10 1o,=-5.5×l0 平均数箜I二:5×1o— 活菌计数为5O万/mg 因此方法的结果总量偏低,有很多缺点,活菌数高的菌落 太密无法计数,只能局限于低浓度的,但又偏低,不能代表其真 实的结果.根据这一情况,我们在冷链运转的后几年采用 WHO卡介苗活菌数的方法,其结果都很理想. 在稀释过程中应每一浓度换一支吸管,先接种低浓度后接 种高浓度. 3.2WHO卡介苗活菌计数方法.WHO规定用3个稀释度,按 统计学方法计算.(1)按常规方法稀释成1O后,再将稀释成 1OI4三个浓度.(2)取罗氏培养基20支,将1O 种接种5支,1OI4接种1O支,每支0.1ml铺匀,置37度温箱 中进行培养.(3)用三个浓度的平均数,按统计学法计算, 公式?2?+互2++2互3d1._【1-+;2+2互3) 公式(l+2+23?2w?2+23 d2?l (2w+1)一(2+23) 公式?互+2互,?2?2互,d_2? 』 公式?23?2w导?3 注:w=最适量兰州东苗W=40d=稀释倍数 例v=0.1dl=8X10d2=16k104d3=32X104 il=1/8?10的4管平均菌落数 i,=1/16?10的4管平均菌落数 i:1/32?10”的4管平均菌落数 下面举4组例子,用4个公式来计算: 第1组 2O lO 5 4管平均菌落数 第2组 2O 1O 6 第3组 40 2O 10 第4组 7O 42 20 第一组用公式?计算 :8×l法,其结果可靠. 4讨论 随着冷链运转的开展,卡介苗活菌计数已成为我们的日常 工作,在几年的实践中我们有成功的经验,也有不失败的教训, 其体会有以下几点:(1)苏通氏稀释液的PH,对活菌生长的影 响,取同一批号的卡介苗,4支,编号为O1,02,O3,o4在PH6.0— 7O时培养46周,菌落数分别为:130,99.4,94.6,123.而同样 的样品,编号,只是苏通氏稀释液PH7.27.4时,菌落分别为 359,377,341,320,这说明卡介活菌在PH7.2—7.4,生长最适宜, 偏酸对活菌影响很大,可造成生长不好,甚至不生长.(2)培养 基的干温度.将上述4支BCG接种于灭菌85?2小时拿出罗 氏培养基中培养46周,菌落分别为194,258,200,226,而BCG 接种于灭菌85?放置24小时拿出的罗氏培养基中培养46 周,菌落分别为不生长,不生长,10,102,这说明培养基的干温 度与活菌生长的关系,同样一个批号同样接种时间,只是消毒 后24小时取出的培养基,另一个是消毒后立即取出冷却后放 置冰箱中的培养基,其病菌生长结果有显着的差别.(3)温度 时间的波动对卡介苗贮存的影响,同一个批号苗子进站为 2586万活菌数,2天后出站为2316万,接种前2458万,一周后为 918万,在此期间,常停电,冰箱温度不稳定.说明贮藏温度不 稳,放置时间过长对卡介苗活菌有一定的波动. 另外,知宜的温度对活菌生长非常重要,3O一35?生长缓 慢,5周后菌落只有针尖大小1+.36—37?在培养5周时,菌 落多而大,像菜花一样4+.38.4O?不生长,温度时高时低不 生长. 通过五年的培养活菌的实践,使我们认识到活菌的多少是 恒量卡介菌质量的依据,要搞好卡介苗活菌计数除了认真负责 外,还要不断的总结经验和教训,摸清活菌培养的规律. (收稿日期:2001—02—08)