应用FMR1基因检测脆性X综合征
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应用FMR1基因检测脆性X综合征
赵述亚,常东,王晶,陈波,,刘锐,李琳
(哈尔滨医科大学第一临床医学院遗传与不育诊疗中心,黑龙江哈尔滨150001)
[关键词]FMR1基因;脆性x综合征;Southen杂交
[中图分类号]R715.5[文献标识码]A[文章编号]1000—1905(2004)01一O022—01
脆性x智力低下综合征(hx)是发病率仅次于先天愚
型的最常见的遗传性智力低下疾病【1].FraX的遗传方式是
x连锁遗传占x连锁遗传性智力低下的40%C.FraX综
合征在群体中,男性患病率为1/1250,女性患病率为1/2000, 平均人群患病率为11850.FraX女性中的携带者频率为1, 700.我国年出生婴儿2000万,计算起来我国每年将出生 x患儿2.3万,FraX携带者1.4万,这将严重影响我国人口 素质.本文应用Soughern杂交的
对智力低下患儿和有 智力低下阳性家族史的孕妇进行FMR-1基因检测,这将对防 止hx的患儿出生,提高我国人口素质有很重要的意义. 1临床资料和方法
1.1研究对象
15例受检者均来自我院遗传咨询门诊,其中39岁12 例,成年女性3例.12例儿童患者均
现为不同程度的语言 发育障碍,学习困难,注意力不集中,祈祷性语言,特殊外貌 和情感交流障碍等特点;成年女性1例表现为长脸,大耳,性 格孤僻,社会交往能力差,上学时学习成绩差,是一位智力低 下患儿的母亲;另一位成年女性有1个在外院应用细胞遗传
其本人表现型正常,因 学方法诊断为脆性x综合征的孩子,
妊娠要求做产前诊断;另一位成年女性也生育了1个智力低 下病儿,其本人表现型正常,现妊娠第2胎来做产前诊断. 1.2方法
1.2,1外周血标本采集:每个病人采集外周血25ml,加入 EDTA抗凝管中备用.
1,2,2羊水标本采集:妊娠1620周孕妇,在超声定位引 导下,经腹部抽取羊水10ml,离心后将沉淀物加入25IIll的培 养瓶中做细胞培养.
[收稿日期】2O03—09—15
[作者简介】赵达亚(1957一),女,黑龙江哈尔滨人,主任医师,硕士 研究生导师.g-通讯作者
1.2.3FMR-1基因检测:应用Southern杂交方法检测样本, 包括提取样本DNA,酶切,电泳,转印,杂交,放射性自显影和
结果判定等步骤.
2结果
15份外周血标本检测结果显示12例为阴性结果,3例 结果为阳性.阳性结果病人中2例为母子.2份羊水标本 的FMR1基因检测结果为阴性,详见附表. 附表15例智力低下患儿或其母亲FMR-1基因检结果 3讨论
患脆性x智力低下综合征者多数人x染色体上有一个 脆性部位,因此被称为脆性x综合征.智力低下的人群中有 5%左右是由x引起的,其智力低下的程度轻重不等.除 (下转29页)
第1期王颖,等.血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗肺癌的实验研究-29?
却不能很好地抑制肿瘤的生长.VEGF.SODN组与 对照组肿瘤生长速度均较快,瘤重较大,二者无明显 差异(P>O.o5).
由于肿瘤的生长受多种因素的调控,本实验中 所用的VEGF反义寡核苷酸是利用计算机设计程序 的特异的互补于VEGF基因第三外显子的反义寡核 苷酸L3J,通过封闭VEGFmRNA的表达来抑制VEGF 蛋白质的合成,从而抑制血管的形成.这样,在基因 水平上通过阻断肿瘤细胞的血供来减少其生长.这 说明,基因药物治疗肿瘤是完全可行的.而VEGF 正义寡核苷酸由于其碱基序列与VEGF基因的序列 相同,因此不能封闭VEGFmRNA的表达,血管形成 不受抑制,肿瘤细胞的生长不受影响.
肿瘤的基因疗法虽然在理论上可抑制肿瘤的生 长,但是并不能将肿瘤组织"杀死",只能延缓其生 长,主要原因有以下几个方面:?肿瘤的发生发展是
多种因素相互作用的结果,涉及到多个基因,癌基因 和抑癌基因的种类和数量处于不断地动态变化之 中,因此单基因治疗不能取得良好的治疗效果.任
正刚等认为多种反义寡核苷酸联合应用可以提高 基因药物的疗效.?基因药物半衰期短,容易降解. 刘宏伟等L5认为将基因药物中的某些碱基进行硫代 修饰和质脂体包裹可以减少其半衰期,增加穿透细 胞的能力.?基因药物的浓度,量效关系,治疗时
间,用药间隔等还需进一步摸索.
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(上接22页)
了智力低下外曲x还表现为学习困难,注意力不集中,多动, 语言障碍,说话反反复复,低语呈'祈祷性'语言,性情孤僻和 害羞等.体征为面部异常,包括方额,长脸,下颌大而突出,大 耳朵及大睾丸等.FraX如前所述其发病率是很高的,但是, 在我国hx的诊断率却很低,常常有些hx的病儿被诊断 为儿童孤独症,这与我们国家的检测方法有关.
目前国外少数几个发达国家已经开展了应用基因检测的
方法诊断hx综合征.我国对hx的诊断应用的是细胞遗 传学方法,还没有进行hx的基因诊断和产前诊断.细胞遗 传学方法检测hx综合征存在几个缺点,首先是诱导方法均 在不同程度上降低了有丝分裂指数,使可用于脆性x染色体 分析的细胞数减少;其次由于hx的低频率表达,要求计数 更多的细胞才能达到更可靠的诊断,否则有可能出现假阴性 结果;第三随着细胞计数的增多,又因非特异性末端损害造成 部分假阳性,由此使得细胞遗传学方法在诊断hx综合征方 面有一定的局限性bj.据统计大约25%的细胞遗传学方法产 前诊断病例,其hx的阳性率低于4%,这些人出生后确诊为 X综合征.解决x综合征产前诊断中假阳性和假阴性 问
的最好方法是进行FMR-1基因检测j.
FMR-1基因的5端有一个精氨酸编码的CGG三核苷酸串 联重复序列,在正常人群中(cGG)n存在多态性.分析表明, 无临床症状的携带者其重复片段重复60,200次,而有临床 表现的个体其重复次数>230次,并伴有异常甲基化.具有前 突变的个体无智力低下表现,且没有异常甲基化;全突变时有 智力低下和体征异常,存在高度的体细胞异质性,并在相邻的 序列中出现异常甲基化.通过FMR-1基因检测可以测出CGG 重复序列的长度和甲基化的状态,通过CGG重复序列的长度 j;蘧疆蒌耍''
来判断病人是前突变还是完全突变.FIVlR-1基因检测无论是 筛查携带者还是诊断病人其结果是百分之百准确L5j,因此,开 展基因检测方法诊断hx是非常重要的.
本文检测的12个病儿均有程度不同的智力低下,3位成 年女性中有一位表型轻度异常.FMR-1检测结果阳性3例,3 例阳性结果均为完全突变.脆性x基因完全突变的男性患 病,而女性可以不受累,或者症状很轻,因为她们的另1条x 染色体通常是正常的.这就是为什么母亲症状轻,儿子却是
严重智力低下的原因.但是,即使女性无任何临床症状,脆性
x突变基因却可以在家族中世代传递,导致后代发病.脆性
x综合征的突变基因位于x染色体上,可以预测它的遗传方
式.女性携带者将该突变基因传给子女的几率为5o%,而男
性携带者只会传给女儿不会传给儿子.因此,适时的遗传咨
询和产前诊断是防止hX综合征病人出生的有效方法.
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