为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

滤膜法测定总大肠菌群

2017-12-05 4页 doc 15KB 67阅读

用户头像

is_589748

暂无简介

举报
滤膜法测定总大肠菌群滤膜法测定总大肠菌群 滤膜法测定总大肠菌群 1 主题内容与适用范围 本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。 本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。 2 方法提要 用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在选择性培养基上,经培养后,计 数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。 3 培养基与试剂 3.1 品红亚硫酸钠培养基 3.1.1 成份 A 蛋白胨 10g B 酵母浸膏 5g C 牛肉膏 5g D 乳糖 10g E 琼脂 15~20g F 硫酸...
滤膜法测定总大肠菌群
滤膜法测定总大肠菌群 滤膜法测定总大肠菌群 1 主内容与适用范围 本规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。 本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。 2 方法提要 用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴在选择性培养基上,经培养后,计 数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。 3 培养基与试剂 3.1 品红亚硫酸钠培养基 3.1.1 成份 A 蛋白胨 10g B 酵母浸膏 5g C 牛肉膏 5g D 乳糖 10g E 琼脂 15~20g F 硫酸氢二钾 3.5g G 无水亚硫酸钠 5g左右 H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mL I 蒸馏水 1000mL 3.1.2 储存培养基的制备 先将琼脂加到500mL蒸馏水中,煮沸溶解,于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏,加热溶解,倒入已溶解的琼脂,补充蒸馏水至1000mL,混匀后调pH为7.2~7.4,再加入乳糖,分装,115? 高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。 3.1.3 平皿培养基的配制 将上法制备的储存培养基加热融化,用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中,再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中,加灭菌水少许,使其溶解后,置沸水浴中煮沸10min以 灭菌。 用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止,将此亚硫酸钠与 碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基15mL倾入已 灭菌的空平皿中。待冷却凝固后置冰箱内备用。此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡 粉色变为深红色,则不能再用。 3.2 乳糖蛋白胨培养基 3.2.1 成份 A 蛋白胨 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化钠 5g E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL F 蒸馏水 1000mL 3.2.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,调整pH为7.2~7.4,再加入1mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液, 充分混匀,分装于装有倒管的试管中,115?高压灭菌20min,贮存于冷暗处备用。 4 仪器 4.1 滤器。 4.2 滤膜,孔径0.45~0.65μm。直经根据滤器规格,目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。 4.3 抽滤设备。 4.4 无齿镊子。 4.5 培养箱: 36?1?。 4.6 冰箱: 0~4?。 4.7 天平。 4.8 显微镜。 4.9 平皿: 直径为9cm。 4.10 灭菌刻度吸管: 1mL,10mL。 5 检验步骤 5.1 准备工作 5.1.1 滤膜灭菌: 将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置于沸水浴中煮沸灭菌三次,每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次,以除去残留溶剂。 5.1.2 滤器灭菌: 用点燃的酒精棉球,火焰灭菌。也可用121?高压灭菌20min。 5.2 过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,帖放在已灭菌的滤床上、,固定好滤器,将100mL水浴(如水样含菌数较多,可减少过滤水样量,或将水样稀释)注入滤器中,打开滤器阀门,在负0.5大气压下抽滤。 5.3 培养 水样滤完后,再抽气约5s,关上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放在品红亚硫酸钠培 养基(36.1.3.1)上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入 37?恒温箱内培养22~24h。 6 观察结果 6.1 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 紫红色,具有金属光泽的菌落。 深红色,不带或略带金属光泽的菌落。 淡红色,中心色较深的菌落。 6.1.1凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养基液,于37?培养24h,有产酸产气者,则判定为总大肠菌群阳性。 6.1.2 计算滤膜上生长的总大肠菌群数,以每100mL 水样中的总大肠菌群数之(CFU/100mL) 总大肠菌群菌落数(CFU/100mL)=???????????????????????………(36-1) 过滤的水样体积(mL)
/
本文档为【滤膜法测定总大肠菌群】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索