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颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平变化的研究

2017-11-15 7页 doc 21KB 22阅读

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颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平变化的研究颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平变化的研究 颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO 水平变化的研究 ? 246?广东牙病防治2130"/年6月第15卷第6期 ? 基础与应用研究? 颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平 变化的研究* 高占巍,刘曙光,王大章,马海欢 1卫生部中日友好医院整形外科,北京(100029);2广东省1:2腔医院?南方医科大学附属1:2腔医院; 3四川大学华西1:2腔医学院颌面外科 【摘要】目的研究一氧化氮(N0)与颞下颌关节骨关节病(TMJOA)模型的关系.方法选用...
颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平变化的研究
颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平变化的研究 颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO 水平变化的研究 ? 246?广东牙病防治2130"/年6月第15卷第6期 ? 基础与应用研究? 颞下颌关节骨关节病动物模型关节滑液NO水平 变化的研究* 高占巍,刘曙光,王大章,马海欢 1卫生部中日友好医院整形外科,北京(100029);2广东省1:2腔医院?南方医科大学附属1:2腔医院; 3四川大学华西1:2腔医学院颌面外科 【摘要】目的研究一氧化氮(N0)与颞下颌关节骨关节病(TMJOA)模型的关系.方法选用9只山羊通过关节 上腔内注射0.5%胶原酶制造TMJOA实验动物模型,注射前,注射后4,8,12,24周分别抽取关节滑液,以硝酸还原 酶法检测关节滑液中NO的水平变化.结果实验性TMJOA山羊关节滑液中NO水平明显升高,以注射胶原酶后 12周为最高.结论NO可能在TMJOA发生,进展过程中起着重要的作用. 【关键词】颞下颌关节;骨关节病;一氧化氮 Thea啪geofNOintheSynovialFluidofExperimentalTemporomm~bularJointOsteoarthrmisinGo atsGAO Zhan-wei.,LIUShu-guang,WANGDa-zhang,eta1..DepartmentofPlasticSurgery,China-J apanFriendshipHospital,Bei- jing100329,China 【Abstract】 ObjectiveToobservethechangeoflevelofNOinthesynovialfluidofexperimentaltempommandibularjoint(IS— teoarthrosisingoat.MethodsNinegoatswereusedinthisstudy,thebilateralexperimentalTM JOAwereinducedbyintra-artic. ularinjectionof0.5%eollagenase.Beforeinjectionandafterinjection4,8,12,24weeks,thesy novialfluidofallthegoats' 删 sweremeasuredforNOproduction.ResultsThelevelsofNOaftertheinjectionofcollagenasesignificantlyelevated,espe— ci~Uyatthe12thweekafterinjection.ConclusionNOmayphyanimportantroleintheinitiationandpmgrossionofTMJOA. 【Keywords】Temporomandibularjoint;Osteoarthrosis;Nitricoxide 骨关节病(osteoarthrosis,OA)是一种退行性关节 疾患,发病率较高,但病因不清,一般认为与创伤,感 染,衰老等多种因素引起的软骨代谢异常有关.近 年的研究证实OA的关节局部组织可产生大量细胞 因子(IL-1,IL-6,TNFa等),但这些细胞因子对关节的 损害和对软骨细胞代谢的作用途径尚无定论.一氧 化氮(NO)作为一个新的细胞信使和效应分子,参与 了机体许多组织和器官的病理生理过程,由于其独 特的物理和生化特性,如气体性小分子,渗透力强 等,对于缺乏血供的颞下颌关节纤维软骨的作用可 能尤为重要,国内外为数不多的研究提示NO参与了 颞下颌关节骨关节病(temporomandibulariointOSteo-ar— throsis,TMJOA)的病理过程.本研究通过建立山 羊实验性TMJOA模型,动态检测关节滑液中NO的 水平变化,结合以往的研究结果,进一步探讨NO与 TMJOA间的关系. 材料和方法 1.山羊实验性TMJOA模型的建立 实验选用无角骟努比山羊9只,体重18,22kg, *基金项目:国家博士后科学基金项目(2oo5037777) 年龄1.5,2.5岁,均属成年山羊,雄性5只,雌性 4只.实验前圈养1周,观察无明显全身疾患,无失 牙及关节运动异常者纳入本实验.山羊均用青饲料 及及粉末状混合饲料饲养.根据王大章等的方法 制造实验性TMJOA动物模型. 2.山羊颞下颌关节滑液的抽取 行3%戊巴比妥钠静脉注射全麻,颞下颌关节区 备皮,消毒.针尖紧贴关节凹的表面滑行进入关节 上腔.用玻璃注射器注入生理盐水1mL,反复回抽, 注入3次后,尽量回抽,并注入经高压消毒的玻璃离 心管中,离心后封盖一20?冷冻保存备测.随后在 关节腔内注入0.5%胶原酶(CollagenaseTypeI,美 国Sigma公司)溶液0.8mL.关节腔内注射胶原酶 后4,8,12,24周用同样方法抽取关节滑液备测. 3.关节滑液中NO的测定 NO试剂盒(酶法测NO:一/NO3一含量,深圳晶美 生物工程有限公司).按说明书操作,550n/n, 0.5cm测各吸光度值,然后根据公式计算NO浓度. No浓度=×100tnnol/L 4.统计学处理 使用SPSS14.0统计软件,应用t检验对各时问 广东牙病防治2007年6月第15卷第6期?247? 段数据之间的差异进行统计分析. 结果 肉眼观察注射胶原酶前及注射后4周的关节液 标本无明显异常,8,12,24周的关节滑液标本较 稠,12周个别标本有少许絮状物飘浮其中. 注射胶原酶前后关节滑液标本的NO浓度见 表1.关节腔内注射胶原酶后4,8,12,24周滑液 中NO含量与注射前及比较均有统计学差异(P< 0.01),且注射胶原酶后各时间段组标本与注射组标 本之间的NO含量比较差异也有统计学意义(P< 0.01).表明关节腔内注射胶原酶后,其滑液中NO 含量显着升高,其中以12周为最高,至24周滑液中 NO含量又有所降低,与伽OA的组织病理学相对 应. 表1注射胶原酶前后关节滑液标本 NO浓度i?s.umol/L 观察时间浓度 注射前 注射后4周 注射后8周 注射后12周 注射后24周 15.27?2.81 37.56?4.36 56.9O?7.32 69.94?12.46 48.53?1O.53 讨论 目前诱导动物实验性TMJOA常用的方法有手 术和关节腔内注药两种.手术造模主要有关节盘打 孔,髁状突表面软骨切除HJ,关节盘摘除及关节盘移 位等.但这些方法共同的特点是均要采用手术切开 关节腔,甚至破坏关节重要结构,其操作复杂,破坏 程度不易控制,创伤大,并可能引起手术并发症. 关节腔内注射药物也可造成类似骨关节病的病 变,常用的药物有皮质激素,木瓜蛋白酶,碘乙酸钠 及胶原酶等.王大章等b于1993年成功建立了关节 上腔内胶原酶诱导山羊TMJOA动物模型,具有简便 易行,创伤小,可靠性高等优点.该动物模型出现病 变的发展速度适中,发展过程清晰,从关节表面的轻 微病变直至盘穿孔和骨质改变,病变均可被清楚地 观察到,是一种较为理想的研究TM.IOA骨关节病的 病理改变与发病机理的动物模型. 本实验选择此动物模型,并根据其病理进程,选 择抽取注射前及注射后4,8,12,24周滑液标本,既 可定期检测实验性TMJOA各发展阶段关节滑液NO 水平变化,又可避免过多关节腔冲洗影响炎症进展. NO是一种重要的气体性细胞信使分子,由一氧 化氮合酶(NOS)催化L一赖氨酸而生成,无需特殊受 体可自由穿透细胞膜,作用于细胞内的靶分子发挥 效应.NO具有许多生物活性,在舒张血管,传递神 经信息和调控免疫功能等方面起着重要的作用. Sakurai等研究表明,正常人滑膜在基础状态下,表 达少量诱导型NOS(iNOS),在IL-I~和TNFa的联合 刺激下,炎症滑膜和软骨生成NO增加数倍以上.另 有研究表明颞下颌关节紊乱症患者关节滑液中NO 水平明显高于正常人.. 高浓度NO既可抑制软骨细胞增殖,促进软骨细 胞凋亡,又可加速软骨细胞糖酵解,还能抑制软骨细 胞基质合成.有实验发现IL-1能刺激体外培养的人 胚髁状突软骨细胞产生大量NOJ.可见,NO作为 一 种细胞信使和效应分子,在骨关节病的发生和发 展过程中有着重要的作用,各种致病因素导致关节 局部IL-1,TNFa等细胞因子分泌增加,产生高浓度的 NO,加速病变发展,使骨关节病进入一个不断循环加 重的过程. 本研究结果表明,在山羊TMJOA的动物模型关 节滑液中NO的含量随着炎症进程逐渐增高.近年 来咖0A在人群中的发病率有增高的趋势,阻断NO 的生成能否减缓或阻断TMJOA的发生和发展,将可 能为TMJOA的治疗提供新的思路与方法,利用NOS 抑制剂治疗TMJOA,尚待进一步研究证实及阐明其 作用机制. 参考文献 [1]TAKAHASHIT,KONDHNT,KAMEIK.eta1.Elevatedlevel8ofnilric deinsynovialfluidfmrnpatientswithtemporomandibulardisorders. OralsurgOralMedOralPatholOralReadiolEnded,1996,82(5):505— 5O9. [2]焦岩涛,胡静,王大章.醋酸强的松龙关节内封闭治疗T/~llD滑液 NO含量变化.临床口腔医学杂志.1998,14(2):76-78. [3]胡波,王大章.颞下颌关节骨关节病动物模型的建立.中华口腔医 学杂志.1995.30(6):370-372. 14J1SHIMERUJ,GOSSAN.Amodelforosteoarthritisoft}Ietemporoman— dibularjoint.MaxillofacSurg,1992,50(11):1191—1195. 【5JSAKURAIH,KOHSAKAH,LIUMF,eta1.NitricoxideDroduction andinducibleofnitricoxidesynthaseexpressionininflammatoryarthriti— des.JClinInvest,1995,96(15):2356-2363. [6]胡静,焦岩涛,王大章,等.1I,1及地塞米松对人髁状突软骨细胞 NO生成的影响.口腔医学纵横,1999,15(2):69-71. (收稿日期:20o7—03—30) (编辑刘曙光)
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