乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称: 乳酸脱氢酶 英文名称: lactatedehydrogenase;LDH 定义: 广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号:EC 1.1.1.27) 作用于L-乳酸;D-乳酸脱氢酶(编号:EC 1.1.1.28)作用于D-乳酸，两者均以NAD ，为氢受体。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH 的氢，形成乳酸。 应用学科: 生物化学与分子生物学(一级学科);酶(二级学科) 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH,1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH,3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4)，可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶(LDH)实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶(LDH)实验 展开 编辑本段基本信息 英文名称: LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsarfrylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清 135.0,215.0U/L; 尿 560,2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段临床意义 (1)急性心肌梗塞发作后，早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明显，导致LDH1/LDH2的比值升高。 (2)肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升高。 (3)患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也可升高。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 [1] 乳酸脱氢酶(LD)分子量为135,140KD，由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10,163小时)，多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之;肺以LD3(LD4为主;骨骼肌以LD5为主;肝以LD5为主，LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5. 编辑本段血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带，根据其 乳酸脱氢酶 电泳迁移率的快慢，依次命名为LDH1，LDH2，LDH3，LDH4，LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同，存在明显的组织特异性，人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多，骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从睾丸和精子中发现了LDHx，其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 正常参考值 琼脂糖电泳法: LDH1(28.4?5.3)%; LDH2(41.0?5.0)%; LDH3(19.0?4.0)%; LDH4(6.6?3.5)%; LDH5(4.6?3.0)%。 醋酸纤维素薄膜法: LDH1(25.32?2.62)% LDH2(34.36?1.57)% LDH3(21.86?1.38)% LDH4(11.3?1.84)% LDH5(7.97?1.59)% 聚丙烯酰胺法: LDH1(26.9?0.4)% LDH2(36.0?0.5)% LDH3(21.9?0.4)% LDH4(11.1?0.4)% LDH5(4.1?0.3)% 总之，健康成人血清LDH同工酶有如下的规律: LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。 临床意义 心肌细胞LD活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时，血清LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1，且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病心肌损害等，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。 脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时，只有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。 急性心肌梗塞发病后12,24小时，血清LDH1业已升高。若同时测定LD总活性，可发现LDH1/总LDH的比值对急性心肌梗塞诊断的阳性率与可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。 胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。 肝细胞损伤或坏死后，向血流释入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高，LDH4不增，LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5持续升高或下降后再度升高，则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人的血清LDH5(LDH4活性极高时，常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。 肾皮质以LDH1和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可增高。 肺含LDH3较多，肺部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等，LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3(LDH4常与LDH5同时升高。 血清LD总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH2<1)的病例，临床出现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬变、传染性单核细胞增多症、甲状腺机能低下、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等。 肌营养不良病人肌肉中LDH1(LDH2明显增高，LDH5显著下降;而血清则相反，LDH1(LDH2明显减少，LDH4(LDH5显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1(LDH2下降，LDH4(LDH5升高。 (4)恶性病变时LDH3常增高。 编辑本段乳酸脱氢酶高的原因 至于乳酸脱氢酶高的原因，有以下方面: 1(当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时，部分肝细胞受损，血清中LDH4和LDH5含量就会有不同程度的增高。 2(乙肝治疗方法特别是是用药不当，长期服用同一种药物时造成肾毒现象的产生。当肾毒现象出现时，血清中乳酸脱氢酶含量会迅速升高。 3(乙肝不进行合适积极的治疗，发展到一定程度时会造成肝脏代谢严重异常，导致肾脏功能衰竭，从而也会引起乳酸脱氢酶含量升高。 4(肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会引起乳酸 [2]脱氢酶的偏高。 编辑本段乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。血清乳酸脱氢酶正常范围是100,300U/L，当出现乳酸脱氢酶偏低时，常见原因如下。 乳酸脱氢酶偏低的原因1:检查过程中出现误差; 乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失调; 乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不好等。 总之，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了。因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿 [3]瘤转移所致的胸腹水时，会引起乳酸脱氢酶的偏高。 编辑本段乳酸脱氢酶(LDH)实验 概述 乳酸脱氢酶(LDH)是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶，属于氢转移酶。该酶存在于所有动物的组织中，在肝脏中活性最高，其次为心脏、骨骼肌、肾脏，在肿瘤组织及白血病细胞中也能检测到。在大多数动物组织中，它是由两种肽链按一定比例组成的5种四聚体。它的每条肽链各由一个基因编码，经转录、翻译、修饰加工等过程，最后成为有生物学活性的物质。不同的动物，不同的组织或器官在不同的发育阶段或不同的生活周 [4]期均有其特异性的同工酶酶谱。自然界中存在L和D两种乳酸脱氢酶。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗D-LDH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗D-LDH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的D-LDH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和Eppendof管 5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37?反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37?，60分钟。 3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37?，60分钟。 5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，37?避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。