滋阴明目丸对大鼠光损伤模型视膜超微结构的影响_0

滋阴明目丸对大鼠光损伤模型视膜超微结构的影响_0 滋阴明目丸对大鼠光损伤模型视膜超微结构的影响 作者:朱惠安,李传课,罗耀红【摘要】目的观察滋阴明目丸对视膜光损伤大鼠的保护作用及机理。方法将70只Sprague-Daley(SD)大鼠随机分为7组,除空白对照组外均采用自制光损伤装置视膜光损伤模型,光照„ 作者:朱惠安,李传课,罗耀红 【摘要】 目的 观察滋阴明目丸对视膜光损伤大鼠的保护作用及机理。方法 将70只Sprague-Daley(SD)大鼠随机分为7组,除空白对照组外均采用自制光损伤装置视膜光损伤模型,光照后3 d开始灌服滋阴明目丸及对照药物,连续15 d,取视膜做病理形态学检查,观察视膜超微结构。结果 受损的视细胞修复,视膜形态结构渐趋。结论 滋阴明目丸可视膜超微结构。 【关键词】 滋阴明目丸;光损伤;视膜;超微结构;大鼠 Abstrat:bjetive T investigate the prtetive effet and ehanis f Ziyininguan n retina against phti injury. ethds Seventy Sprague-Daley (SD) rats ere randly divided int 7 grups, ith 6 grups prepared as the dels f phttraua at first and anther grup taken as blank ntrl. After three days, the anials in the treatent and ntrl grups ere treated ith Ziyininguan and ntrl agent respetively fr 15 days during the perid f experient. Flling this, the retinal tissues ere exained by light and eletrn irspy. Results The retinal lesins ere repaired and the rphlgial struture f the retina as brught t nral gradually. nlusin Ziyininguan uld iprve ultrastruture f the retina. Key rds:Ziyininguan;phti injury;retinal;ultrastruture 光化学损伤是视膜光损伤中最的损伤,是退行性变性过程,其病理过程与年龄性黄斑变性等视膜变性疾病有许多相似之处[1]。滋阴明目丸以滋补肝肾、活血明目立法,对以肝肾为病机的视膜变性疾病有疗效[2-3]。2002年10月,2004年1月,笔者采用大鼠视膜光化学损伤模型,滋阴明目丸对光化学损伤大鼠视膜超微结构的,探讨其对视膜光感受器细胞的保护作用。 1 与方法 1.1 药物 滋阴明目丸:选用熟地黄、黄精、枸杞子、菟丝子、茱萸、淮药、茯苓、楮实子、黄精、 牡丹皮、三七、丹参、牛膝、当归、石决明、川芎、羌活、石菖蒲等药,按现代工艺制成浓缩丸,湖南中医药大学附属医院药剂科。杞菊地黄丸,长沙九芝堂集团有限公司生产,批号:ZZ-0193-湘卫药准字(1992)第002078号。威氏克胶囊,北京制药厂生产,京卫药准字(1996)第102088号,批号021007。 1.2 动物 选用SD大鼠70只,体重180,220 g,雌雄各半,湖南中医学院医学实验动物室。饲养条件:室温在18,25 ?,空气流通,湿度55%,70%,12 h光照维持,昼夜循环,动物自由摄食饮水,饲养10 d。 1.3 造模 参照Hanssn[4]方法自制光损伤装置。光照箱的6个面分别安装4条15 的白色荧光灯管(Philips),上方安装有排风孔,下方为密集的排气孔,箱内安放2个有机玻璃透明箱,体积为(48×24×25)3。光照箱中心向各方向平均照度为(1 900?106.9)lux,于大鼠活动时眼球的各箱壁的照度为2 000 lux,光照箱内的平均温度控制在22,24 ?,所有实验用大鼠均在12 h明(20,50 lux)12 h暗(0,12 lux) 的循环光环境下10 d,乙醚麻醉缸中约5 in吸入麻醉,缝线开睑,3 h持续光照射。光照后立即拆除开睑缝线,送回暗环境中。 1.4 分组及 70只大鼠随机分为滋阴明目丸大、中、小剂量组及杞菊地黄丸组、威氏克组、模型对照组、空白对照组。于光照后3 d开始给药,连续给药15 d。滋阴明目丸大剂量组:每天灌服23.4 g/kg混悬液(于成人剂量的3倍);滋阴明目丸中剂量组:每天灌服7.8 g/kg混悬液(于成人用量);滋阴明目丸小剂量组:每天灌服2.6 g/kg混悬液(于成人剂量的1/3倍);杞菊地黄丸组:每 天灌服1.62 g/kg混悬液(于成人剂量);威氏克组:每天灌服0.054 g/kg溶液(于成人剂量);模型对照组与空白对照组灌胃生理盐水(与滋阴明目丸中剂量组等容)。每天上、下午各灌服1次,每次给全日量的1/2。第16天将所有大鼠用25%乌拉坦腹腔注射麻醉(0.3 L/100 g),断颈处死,冰浴下摘取眼球,沿赤道部剖开,去除眼前节,剥离视膜组织。 1.5 电镜观察 取大鼠视膜标本,2.5%戊二醛固定24 h,2%锇酸固定1 h,行50%、70%、90%、100%丙酮梯度 1浸泡24 h,Epn812混合液包埋24 h (60 ?),脱水,每次10 in,Epn812环氧树脂?纯丙酮=1? 修块定位,超薄切片,醋酸双氧铀和枸缘酸铅双重染色,透射电镜下观察大鼠视膜超微结构。 1.6 光镜观察 取大鼠视膜标本,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,间断连续切片,切片厚4 μ,HE染色,光镜下观察视膜形态。 1.7 统计学方法 等级资料用秩和检验,组间用q检验。 2 结果 2.1 对大鼠视膜超微结构的 空白对照组:视膜视细胞形态,内、外节线粒体排列整齐;双极细胞,仅线粒体水肿;节细胞层结构。模型对照组:视细胞胞浆水肿,空泡状,其视盘外节部的膜盘线粒体紊乱,基质淡化,空泡区,视细胞内的线粒体也有类似,区域视杆、视锥细胞严重水肿,胞浆崩解;内核层(系双极细胞)间质水肿,核浓缩,胞浆线粒体空泡变,内核层与内层之间间质水肿,双核细胞内局部水肿,线粒体空泡变;节细胞层内线粒体空泡变,间质水肿,节细胞固缩,染色质浓染。滋阴明目丸中剂量组:视盘仅有小的裂隙,视细胞趋于;内核层,仅线粒体空泡变;节细胞内线粒体不同程度的水肿,余。威氏克组:视盘,其内裂隙更少,视细胞;内核;节细胞内线粒体水肿,空泡变较模型组稍强。杞菊地黄丸组:视盘外节部线粒体有轻微水肿,少量裂隙;视细胞内线粒体水肿,余;双极细胞内线粒体水肿,余;节细胞内线粒体水肿,核浓缩。 2.2 对大鼠视膜组织病理形态的 2.2.1 分级标准 “-”级:视膜形态,视杆细胞排列整齐,结构层次清楚。“+”级:视膜结构层次清楚,视杆细胞排列整齐,外核层灶性脱落。“++”级:视膜结构清楚,有灶性核浓缩,淡染,不规则碎核。“+++”级:各层结构不清,坏死脱落,外核层稀疏散在,有淡染,不规则破碎细胞核。 2.2.2 各组大鼠视膜组织病理形态情况 观察结果经多个样本的秩和检验,H值为37.813,P 0.005,有统计学意义,可7组标本之病理形态有不同。各组与模型对照组两两,滋阴明目丸大、中剂量组、空白对照组为P 0.01;滋阴明目丸小剂量组、杞菊地黄丸组、威氏克组为P 0.05。见表1。 表1 光镜下各组大鼠视膜组织病理形态的(略) 3 光性视膜损伤是一渐进性病理过程。视膜光损伤后可视膜外核层变薄、内外节排列紊乱;光感受器细胞核肿胀,内节线粒体肿胀,外节水肿,RPE顶端微绒毛消失,溶酶体增多等病理[1]。 本实验观察,模型对照组光镜下可见各层结构不清,坏死脱落,外核层稀疏散在,有淡染,并可见不规则破碎细胞核。电镜下观察光感受器细胞胞浆水肿,空泡,线粒体基质淡化,区域细胞严重水肿,胞浆崩解;双极细胞间质水肿,核浓缩,胞浆线粒体空泡变;内核层与内层之间间质水肿,双核细胞内局部水肿,线粒体空泡变;节细胞层可见节细胞内线粒体空泡变,间质水肿,节细胞固缩,染色质浓染。说明本实验条件下可破坏视膜的组织结构。 治疗后观察,光镜下滋阴明目丸大、中剂量组视膜病理形态,视膜结构层次渐趋清楚,视杆细胞排列整齐,仅标本外核层灶性脱落、不规则碎核,与模型对照组,有统计学意义;滋阴明目丸小剂量组、杞菊地黄丸组及威氏克组病理形态尚不。而透射电镜显示,滋阴明目丸组、杞菊地黄丸组及威氏克组视膜超微结构均有,视盘仅有小的裂隙,视细胞趋于;内核层;仅线粒体空泡变;节细胞内线粒体 不同程度的水肿,余。说明三类药物对视膜超微结构的损伤均有修复作用,而以适量的滋阴明目丸作用最佳。 【参考文献】 [1] 谢伯林,王正国,朱佩芳,等.大鼠视膜光化学损伤的病理特征[J].军医大学学报,2000,22(5):442,445. [2] 李传课,李 波.滋阴明目丸治疗肝肾阴虚视膜色素变性与老年黄斑变性的临床观察[J].湖南中医学院学报,2001,21(3):38,40. [3] 李 波,邝国平.滋阴明目丸治疗肝肾阴虚萎缩型老年性黄斑变性的临床和实验[J].中医眼科杂志,2001,11(4):206,211. [4] Hanssn HA. A histheial study f xidative in rat retina daages by visible light[J].Exp Eye Res,1970,9:285,296.