高致病性猪蓝耳病与猪链球菌2型混合感染的诊断与防控

高致病性猪蓝耳病与猪链球菌2型混合感染的诊断与防控 121111 刘兆文 茅爱华 郭林 肖焕星 姜正宗 欧伟业12(上海海利生物技术股份有限公司，上海奉贤 201403;江苏省农业科学院兽医研究所， 江苏南京 210014) 摘要:养猪生产中，高致病性猪蓝耳病是严重的免疫抑制性疾病，造成猪体全身免疫功能下降，临床上常表现为混合感染或继发感染。2014年11月，江苏某规模化猪场保育猪出现皮肤发红、耳朵发绀、并发呼吸道疾病，笔者前往就诊，并委托江苏省农业科学院实验室进行诊断，通过临床症状、病理剖检和实验室检测，确诊该场存在高致病性蓝耳病病毒和链球菌2型混合感染，并提供有效的防控。 关键词:保育猪;高致病性猪蓝耳病;猪链球菌2型;混合感染;防控 高致病性猪蓝耳病(hpPRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)变异株引起的一种猪的高度接触性传染病，可造成母猪繁殖障碍和仔猪呼吸症状，具有发病急、传播快、发病 [1,2][3]率高、病程长等特点。夏秋季多发，隐性带毒猪和发病猪是该病的重要传染源。高致病性猪蓝耳病易引起猪群的免疫抑制，继发或混合感染其他病原。猪链球菌病是由多种不同群的链球菌引起的不同临诊类型的传染病的总称，根据其荚膜抗原(CPS)的不同，分为35[4,5]种血清型，主要以血清2、7、9型居多，其中2型致病力最高。猪链球菌病一年四季均可发生，但以5-11月发病较多，发于养猪密集地区，呈地方流行性。急性病例表现为出血 [4]性败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎;慢性病例表现为关节炎、心内膜炎。 2014年11月下旬，江苏省苏中某规模化猪场保育阶段仔猪出现皮肤发红，耳朵发绀，部分仔猪单肢或多肢的关节肿大的症状。经流行病学调查、临床症状、病例解剖及实验室检测，确诊为高致病性猪蓝耳病混合猪链球菌2型感染。 1发病情况:2014年11下旬，江苏省苏中某猪场保育后期仔猪(70日龄左右)出现周身皮肤发红、咳嗽、喘气等情况，发病率约40%，死亡率约15%。12月初，仔猪发病日龄提前至45日龄左右，症状和前述相似，已大群添加阿莫西林、替米考星等药物。该场其他猪群未见异常。 2临床症状及病理剖检:仔猪发病初期皮肤发红，精神沉郁，采食量下降，有咳嗽、气喘等呼吸道症状，体温40-41?，发病中期食欲废绝，关节肿大，眼结膜炎，腹式呼吸，发病后期猪下腹部、背部、臀部发红、耳朵紫红色，卧地不起，最后衰竭而死(图1;图2)。剖检两头病死保育仔猪，皮下水肿(图3);肺淤血、出血(图4);胸腔积液，心脏表面有大量黄色纤维素性渗出物并与胸腔粘连(图5);腹腔积液，肝脏表面附着大量纤维素性渗出物(图6);脾脏表面和边缘有梗死灶;全身多处淋巴结水肿出血;关节肿大，关节腔剖开有粘稠的积液;整个胃肠道、膀胱、肾脏未见明显异常。 图1 病死猪周身发红 图2 耳朵紫红色 图3 皮下水肿 图4 肺部淤血、出血 图5 胸腔积液、心包炎 图6 腹腔积液、肝周炎 3 实验室诊断 3.1采集该猪场病死猪病料委托江苏省农业科学院实验室进行病毒检测和细菌分离鉴定。 3.2 PCR及RT-PCR检测引物及样品检测过程由江苏省农业科学院研究人员完成。 3.3细菌分离鉴定。在无菌操作下，取新鲜肺组织，表面进行热烫处理，用手术刀切开，用接种环蘸取组织深部，接种于THB+NAD平板，37?培养16小时，观察发现平板上长出较纯菌落。挑取6个菌落接种于THB+DNA液体培养基，37?培养16小时，提取DNA进行PCR鉴定。 3.4 药敏试验，药敏试纸片购自杭州微生物试剂公司，按说明操作。 4 实验结果 4.1结果显示:猪瘟、伪狂犬和圆环检测阴性，副猪和胸膜肺炎阴性，高致病性蓝耳阳性。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 泳道1-2猪瘟抗原的检测;泳道3为猪瘟阳性对照;泳道4-5 蓝耳抗原的检测; 泳道6为蓝耳阳性对照;泳道7-8 圆环抗原的检测;泳道9为圆环阳性对照;泳 道10-11伪狂犬抗原检测;泳道12为伪狂犬阳性对照;泳道13-14副猪抗原检测; 泳道15为副猪阳性对照;泳道16-17胸膜肺炎抗原检测;泳道18为胸膜肺炎阳 性对照;泳道19 Mark 2000 4.2 细菌鉴定结果 4.2.1细菌群特异性检测猪链球菌、副猪嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌，结果显示3个单菌为猪链球菌属。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 泳道1-6猪链球菌群特异性检测;泳道7猪链球菌群特异性阳性对照;泳道8阴性 对照;泳道9-14 副猪群特异性检测;泳道15副猪群特异性阳性对照;泳道16阴 性对照;泳道18-23胸膜肺炎群特异性检测;泳道24胸膜肺炎特异性阳性对照; 泳道25阴性对照;泳道17为Mark 2000 4.2.2猪链球菌型特异性检测，对3个猪链球菌群特异性阳性的单菌检测均为猪链球菌2型 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 泳道1-3猪链球菌2型检测;泳道4阴性对照;泳道5猪链球菌2型阳性对照;泳 道6-8猪链球菌7型检测;泳道9阴性对照;泳道10猪链球菌7型阳性对照;泳 道11-13猪猪链球菌9型检测;泳道14阴性对照;泳道15猪链球菌9型阳性对照; 泳道16为Mark 2000 4.3 综合检测和细菌分离结果 判断为高致病性猪蓝耳病毒和猪链球菌2型混合感染。 4.4 药敏试验 结果显示:该细菌对恩诺沙星、替考拉宁、利福平、阿奇霉素敏感，对氧氟沙星、强力霉素、丁胺卡那、青霉素、头孢唑肟、头孢拉定中等敏感，对头孢曲松、卡那霉素、林可霉素、磺胺甲基恶唑、阿莫西林不敏感。 5 综合防治措施 5.1人员及工具隔离，防止交叉感染。在发病单元周围用彩条布拉隔离带，发病单元饲养人员与未发病单元饲养人员错开上下班时间，严禁串舍，发病单元饲养员所穿工作服下班后消毒水浸泡。扫帚、铁锨、拉粪车等生产工具不得相互借用。 5.2加强卫生消毒。猪场主干道用生石灰铺撒，选用优质消毒剂对猪舍内外进行消毒，两天一次。发病单元排粪沟用烧碱水冲刷，1天1次。 5.3药物保健和治疗。根据药敏试验结果，对发病栋猪群饲料中每吨料添加50%包被恩诺沙星0.8kg、中药热毒清(主要成分:大黄、黄芩、黄连等)1kg、维生素电解质平衡剂，连用7天，个体治疗选用恩诺沙星注射液肌肉注射，防治继发感染。 5.4疫苗紧急接种。对未发病的保育猪和育肥猪群紧急接种上海海利公司蓝毕净【高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)】2头份/头猪，哺乳仔猪14日龄免疫1头份/头猪，间隔30天再加强一针，1头份/头猪。 5.5淘汰病情严重无治疗价值的病猪，做无害化处理，消灭传染源。 5.6处置结果:经过隔离消毒、药物治疗、未发病猪群紧急接种等一系列防控措施后，2-3周后发病猪群逐步恢复到正常生产管理。 6小结与讨论 6.1本研究结合流行病学调查、临床症状、病理解剖及实验室诊断综合判断该猪场存在高致病性猪蓝耳和猪链球菌2型疾病混合感染。蓝耳病毒对猪的全身免疫系统损害严重，易与其他诸如圆环、猪瘟、副猪嗜血杆菌等病原体混合感染或继发感染。 6.2通过药敏试验筛选出对本病例分离出的猪链球菌2型敏感的药物，诸如恩诺沙星、替米考星等作为临床首选治疗和预防药物。目前，由于不少猪场用药不合理，造成的耐药性问题较为普遍，建议借助药敏试验来科学指导用药，有目的、有针对性的用药。 6.3本病例中采用消毒隔离、药物治疗、疫苗紧急接种等一系列综合防控措施，取得了较为满意防控效果。本病例中证实:经实验室检测确诊为高致病性蓝耳病的猪场，科学的免疫海利公司蓝毕净【高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)】产品是有效的防控措施，值得借鉴。 参考文献: [1] Kegong Tian,Xiuling Yu,Tiezhu Zhao,et al.Emergence of Fatal PRRS Variants: Unparalleled Outbreaks of A typical PRRS in china and Molecular Dissection of the Unique Hallmark [J].PLOS ONE,June,2007,Issue6,e526,1-10 [2] 刘永宏，赵丽，刘俊峰，等.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJBLZ株序列剖析[J].生物技术通讯，2011(10):185-190 [3] 李建玲，杨小亮.高致病性猪蓝耳病的研究进展[J].中国兽医杂志，2014,50(6):61-63 [4] 蒋新华，陈松昌，万文忠，等.保育仔猪蓝耳病继发猪链球菌病的诊治实例[J].中国猪业，2014(1):44-45 [5] 白继武，郭延军.猪蓝耳病和猪链球菌混合感染的治疗[J].黑龙江畜牧与兽医，2012(4):86 作者简介:刘兆文(1980-)，男，博士在读，主要从事动物疾病防控工作，Email:liuzhaowen@hile-bio.com