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食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析

2017-12-01 7页 doc 21KB 31阅读

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食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析 【关键词】 鳞状细胞癌 摘要:目的 hMLH1是位于3p2321.3上的一个DNA错配修复基因, 有研究认为MLH1的缺失较为多见,本研究旨在了解食管鳞癌中MLH1基因杂合性丢失情 况。 方法 用微卫星分析法检测食管鳞癌中MLH1基因丢失情况。结果 66.7%的受检食管 鳞癌在MLH1基因内STS标志D3S1611位点表现为杂合性丢失。结论 食管鳞癌中MLH1 存在较高的等位基因丢失,MLH1可能是食管鳞癌基因改变的靶点。 关键词:食管;鳞状细胞癌;MLH1;杂合性丢失 The Aan...
食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失分析
食管鳞癌MLH1基因杂合性丢失 【关键词】 鳞状细胞癌 摘要:目的 hMLH1是位于3p2321.3上的一个DNA错配修复基因, 有研究认为MLH1的缺失较为多见,本研究旨在了解食管鳞癌中MLH1基因杂合性丢失情 况。 方法 用微卫星分析法检测食管鳞癌中MLH1基因丢失情况。结果 66.7%的受检食管 鳞癌在MLH1基因内STS标志D3S1611位点现为杂合性丢失。结论 食管鳞癌中MLH1 存在较高的等位基因丢失,MLH1可能是食管鳞癌基因改变的靶点。 关键词:食管;鳞状细胞癌;MLH1;杂合性丢失 The Aanalysis of Allelic Loss of MLH1 Gene in Esophageal Squamous Cell Ccarcinoma LIU Fuxing, WANG Mingrong,XU Xin, et al (National Laboratory of Molecular Oncology, Cancer Institute , Chinese Academy of Medical Sciences , Beijing 100021,China) ABSTRACT:Objective hMLH1 was one of DNA mismatch repair genes and located in 3p23, 21.3. It was reported that allelic deletion of MLH1 gene was frequent among mismatch repair system. The study was to observe the loss of heterogeneity (LOH) of MLH1 gene in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Methods Microsatellite analysis was used to detect the allelic loss of MLH1 in ESCC. Results LOH in D3S1611, a introgenic marker of MLH1, was observed in 66.7% of tumors. Conclusion LOH of MLH1 was common in ESCC. MLH1 may be a target of damage in a fraction of mismatchrepairdeficient in ESCC. KEY WORDS:Esophagus;Squamous cell carcinoma;MLH1;Loss of heterozygosity hMLH1是位于3p2321.3上的一个DNA错配修复基因,研究发现该基因的异常与多种肿瘤 相关,1,3,。Taverna等观察到在DNA错配修复(mismatch repair, MMR)系统中MLH1的缺 失比MSH2更为多见,4,。我们近期研究了食管癌3p杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH) 情况,发现3p近MLH1基因区域存在高频缺失,故进一步选取MLH1基因内微卫星标志, 分析食管癌中MLH1基因丢失情况。 1 材料和方法 1(1标本 60例新鲜食管癌及其配对的癌旁组织均来自2000~2003年间中国医学科学院肿瘤医院手术 切除标本。其临床及理参数见表1。 1(2 DNA提取和微卫星分析 微卫星标志选取位于MLH1基因内的标志D3S1611等6个STS位点。实验显示除D3S1611 外,基因MLH1内其它标志D3S3430、D3S3135、D3S3281、D3S3458和D3S4239因在中 国人群中呈纯合状态故资料未予提供。引物序列及相关资料来自Genome Data Base(GDB), D3S1611引物序列为5′ CCCCAAGGCTGCACTT 3′、5′ AGCTGAGACTACAGGCATTTG 3′;退火温度为57.4?;产物长度252,268bp。 基因组DNA的PCR采用20 μl反应体系,包括40ng DNA模板,2μl 10×PCR缓冲液 (100mM TrisHCl,pH8.3;500mM KCl),0.125mM三磷酸脱氧核苷酸(dNTP),1.5mMgCl2, 0.5μM引物,0.5μl去甲酰胺和1U Taq DNA聚合酶。PCR反应程序:先预变性94? 5min, 再进行35个循环,每循环包括94?30s、57.4?30s、72?30s,最后72? 再延伸5min。取 2μl PCR产物混以等体积的上样缓冲液(98%去甲酰胺,20mM EDTA,0.05%溴酚兰和0.05% 二甲苯青),95?变性10min,立即冰浴,然后上样于7%的尿素聚丙烯酰胺凝胶(含64% 去甲酰胺和7M尿素),60W恒功率电泳3h。冰乙酸固定后硝酸银染色观察结果。 杂合性丢失的认定:当肿瘤组织与正常对照组织相比,如在某一位点的一个等位基因电泳条 带消失或减弱50%以上时读作LOH。结果经两个观察者独立阅读后阳性病例再由第三位观 Http://Www.Yaokuo.Com 察者予以认定。微卫星不稳(microsatellite instability, MSI)表现为肿瘤组织的电泳条带多出 正常组织,或者条带位置与正常组织不一致。 2 结果 对于基因内STS标志D3S1611,59例可用的受检食管鳞癌中,仅30例为信息个体,但其中 有20例表现为杂合性丢失(占66.7%)(表1),食管癌MLH1基因丢失频发。D3S1611的 LOH代表性电泳图见图1。 表1 60例食管鳞癌的临床病理资料及微卫星分析(略) LNM:淋巴结转移数/病检淋巴结数;?:杂合丢失;?:杂合保留;×:纯合子;,:资 料不可用。LOH ofD3S1611 图1 MLH1基因内微卫星标志D3S1611的LOH代表图(N:癌旁正常组织;T:食管肿瘤 组织)(略) 3 讨论 DNA错配修复系统是人体细胞的一种修复DNA碱基错配的安全保障体系,由一系列特异 性修复DNA碱基错配的酶分子(错配修复基因)组成,包括MutH, MutL和MutS三大家 族的蛋白。它们修正核苷酸摄取错误、增强DNA复制忠实性、降低基因的自发突变率、维 持着微卫星位点乃至整个基因组的稳定。目前已克隆的修复基因有hMSH2、hMLH1、hPMS1、 hPMS2、hMSH6及hMSH3,5,。错配修复基因家族中任一个基因突变,都会使细胞错配修 复功能缺陷,产生遗传不稳定性,导致肿瘤易感,6,7,。 MLH1基因定位于3p21,又名COCA2、HNPCC、hMLH1、mutL(E.coli)同源体,该基因表 达mutL同源体1。其异常与遗传性肠癌、II型贲门癌、白血病、MuriTorre家族性肿瘤综合 症、恶性胶质瘤Turcot综合症等相关。本实验发现食管鳞癌中MLH1存在较高的等位基因 丢失(MLH1基因内标志D3S1611的LOH频率高达66.7%),食管癌MLH1基因丢失 频发,MLH1可能是食管癌基因改变的靶点。MLH1基因是否是食管癌候选抑癌基因,有待 于用RTPCR等方法分析该基因mRNA表达情况,有必要时进一步作基因的序列分析以确定 其缺失状况。 参考文献: ,1,Ponz De Leon M, Benatti P, Di Gregorio C, et al. Genetic testing among highrisk individuals in families with hereditary nonpolyposis colorectal cancer,J,.Br J Cancer, 2004, 90(4): 882 ,2,Gallinger S, Aronson M, Shayan K, et al. Gastrointestinal cancers and neurofibromatosis type 1 features in children with a germline homozygous MLH1 mutation,J,. Gastroenterology, 2004, 126(2): 576 ,3,Boland CR, Goel A. The silence of the genes: matching mismatch repair defects with tumors,J,. Cancer, 2003, 98(10): 2091 ,4,Taverna P, Liu L, Hanson AJ, et al. Characterization of MLH1 and MSH2 DNA mismatch repair proteins in cell lines of the NCI anticancer drug screen,J,. Cancer Chemother Pharmacol, 2000, 46(6): 507 ,5,Peltomaki P, Vasen HF. Mutations predisposing to hereditary nonpolyposis colorectal cancer: database and results of a collaborative study. The International Collaborative Group on Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer,J,. Gastroenterology, 1997, 113(4): 1146 ,6,Fishel R, Lescoe MK,Rao MR, et al. The human mutator gene homolog MSH2 and its association with hereditary nonpolyposis colon cancer,J,. Cell, 1996, 75: 1027 ,7,Wijnen JT, Vasen HF, Khan PM, et al. Clinical findings with implications for genetic testing in families with clustering of colorectal cancer,J,. N Engl J Med, 1998, 339: 511 Http://Www.Yaokuo.Com (中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,北京 100021;咸宁学院医学院病理学教研室) 作者:刘复兴,王明荣,徐昕,韩亚玲,蔡岩 申明:本论文版权归原刊发杂志社所有,我们转载的目的是用于学术交流与讨论,论述仅供参考不构成任何学术建议。 Http://Www.Yaokuo.Com
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