透明质酸钠滴眼液对角膜及隐形眼镜的保护和润滑作用

透明质酸钠滴眼液对角膜及隐形眼镜的保护和润滑作用 透明质酸钠滴眼液对角膜及隐形眼镜的保 护和润滑作用 第四军医大学(JFourthMilitMedUniv)1998}19(1) 9宁c, 遗明质酸钠滴眼液对角膜及隐形眼镜的保护和润滑作用 马吉献王增』 京 710033) 张廷钺于纯智(第四军医 .科研处生物技术中心西安 关t词譬盟适磐兔f;l晾碡 中田号R779.65 摘要目的:观察透明质酸钠浦眼液对角膜及隐形眼镜的 保护和润滑作用.方法:选用正常新鲜人脐带为原料,经蛋 白水解酶酶解消化,氯代十六烷基毗睫和乙醇逐级沉淀,获 得透明质酸粗品,精制成钠盐成品,理化分析及质量标准控 制达到眼科外用要求,按照眼药配制标准,制成滴眼液.用 家兔进行局部致炎反应及毒副作用实验}井对隐形眼镜进 行高体药物授泡试验及动物戴镜观察,将最泡后的镜片用 SEM及相位差显微镜观察其透氧孔;组织学检查戴镜后的 兔眼角膜.结果:经动物局部致炎及毒副作用实验证明,无 致炎性及毒尉作用.应用本浦眼液投泡的隐形眼镜,SEM 及相位差显微镜观察,其镜片透氧L清晰.动物戴镜72h 后.兔眼角膜荧光素染色阴性}组织学检查,角膜上皮细胞完 整.结论:透明质酸钠滴眼液作为眼科辅助剂可以用于临 床,井对角膜及隐形眼镜具有保护和润滑作用. ProtectionandIubrieationeffectsofeyedropspre- paredwithhyaluronicacidonthecorn~andsoft- lens MAJi—Xian,WANGZeng-Lu,ZHANGTing- Yue.yUChun—Zhi DepartmentofOphthalmology+XijingHospital, .CenterofBiotechnology,FourthMilitaryMedicalU— niversity,Xian710033 AbstractAtm:Inordertoobservetheprotectionandlubri— catoinofthecolTmea8andsoftlensbytheeyedropsprep~ withhyaluronicacid(HA).Methods:Co~r8ehyaluronicacid wasextractedfromnolTflalhumanIreshumbilicalcordby trypeindigestionandprecipitatedbycetyipyridiumchlorde andethanol~espectively.Relinedsamplewaspreparedas sodiumsalt.Thequalitiesreachedthestandard/orophthal— mologicclinicaluse.Theeyedropemrepreparedaccordingto ophth~mdogieuse.Softlensihundatedintheeyedrops andworn;nrabbitsfor72hours.Holesforoxygenpenetra tionofinundatedsoftknsandCOlTLealhistologyofrabbits wereobservedbySEMandmicroscopephase.Results:The eyedropswereprovedtObefreeofinflammatory.toxicand 马吉献,男,19560824生.河南南阳人,1990年7月第四军医大学 毕生.主管技师,发论文21篇,现在西京医院眼科工作.邮编 710033,电话(029)3221616转72954 }.}93 inanimalexperiments.SEMandmicroscope phaseresultsshOWedthatholesforoxy~npenetrationofin— undatedsoftlenswereclear.Stainingofcorneasbyfluorescein waspositive-Epitheliumofthecorneaswascomplete.Con— duslon:TheeyedropspreparedwithHAiTtarssheildandlu_ bricatethecorneasandsofilens,providingsubservientmedi— umforsoftlenswornclinically. Keywordshyaluronicacideyedropssoftlensrabbits 0引言 透明质酸(hyaluronicacid,HA)是以人脐带,雄 鸡鸡冠组织中提取的一种没有抗原性的单纯高分子 物质_1],它的分子链长,很多分子聚集在一起,增强 了溶液的粘弹性].HA能结台大量的水而对组织 具有润滑作用.HA注射剂在国内外眼科方面主要 用于眼前节及玻璃体手术,被眼科学界公认是一种 安全理想的辅助剂,目前已作为眼科手术常规用药; 但作为滴眼液目前未见有系统的研究报道.我们从 人脐带中提取HA,其抗原性小,经理化分析并进一 步纯化后制成滴眼液,通过动物局部致炎反应实验 以及对隐形眼镜作用的观察,收到理想结果. 1材料和方法 1.1HA的制备 1.1.1HA的提取正常新鲜人脐带,洗净血液, 绞碎,甲苯防腐,5O?放置数小时,自溶一酶解一过 滤;取上清加氯代十六烷基吡啶,低温离心收絮状 物,NaC1溶解,分散器分散收集上清液,乙醇,乙酸 钠沉淀制成粗品钠盐,纯化,干燥脱水后获得精品. 1.1.2HA滴眼液的配制将所得HA精品,按 1984年版药品卫生检验方法测定细菌总数,以眼药 配制方法制成滴眼液,无菌分装于8ml塑料眼药瓶 中备用. 1.1.3HA理化分析?蛋白质与核酸测定:用 LouyS法测定蛋白质,牛血清蛋白为标准品.核酸 含量用紫外吸收法测定样品在260nm处吸光度. ?光谱分析:紫外吸收图谱选用日本岛津uv一3000 型紫外分光光度计,扫描范围200nm,300nm,速 度100nm/min.红外吸收图谱为PE983型红外分 光光度计,样品采用溴化钾压片法,扫描范围180 cm,4000cm一.?粘度及pH值测定:粘度计为 锥板粘度计NXE一1型(中国成都仪器公司生产),选 用Sl系列,12r/mln.毛细管粘度计XN3型(上海 医科大学生产),二种粘度计均测复管,以水为对照 94 品,按下列公式计算粘度:样品粘度一(样品时间/水 pH值测定用笔式酸度计,时间)×0.89;以0.25 tool/L磷酸缓冲液为标准校正. 1.2局部致炎及毒副反应实验 1.2.1动物有色健康家兔20只(本校实验动物 研究中心提供).体重2.5kg,4.0kg,产地,雌雄 不限,实验前眼部检查正常者. 1.2.2分组?滴眼组}家兔1O只,右眼为实验 眼,左眼为对照眼.实验眼滴HA液,3次,d,共滴 眼21d;对照眼不滴任何药物.?注射组:动物数, 实验眼及对照眼的设立均同滴眼组,在实验眼1,3 点钟处,距角膜缘3mm球结膜下注射HA滴眼液 0.2ml,1次,d,共21d;对照眼不注射任何药物. 1.2.3组织学观察取各组动物结膜,角膜,眼球 固定液固定,逐级乙醇脱水,石蜡切片,HE染色, Olympus—l型显微镜检查. 1.3隐形眼镜的作用观察 1.3.1材料选用中美合资同济海昌生产的亲水 性软性角膜隐形眼镜,含水量分别为550g/kg和 380g/kg,屈光度均为零度,直径为14mm. 1.3.2药物浸泡试验将含水量550g/kg和 380g/kg的隐形眼镜片各1O片,分别浸泡于HA滴 眼液中,人工泪液为对照组,浸泡时间为1wk,扫描 电镜和相位差显微镜观察镜片内外两面. 1.3.3动物戴镜观察健康家兔10只,同一只 家兔右眼配戴含水量550g/kg的镜片,左眼配镜 含水量380g/kg酵镜片.双眼滴HA液,6h1次, 共滴眼72h.每日取下镜片,裂隙灯检查镜片内外 两面.10g/L荧光素染色动物角膜,观察和记录兔 角膜着色情况,并进行裂隙灯彩色照相.对照组为 人工泪液. 2结果 2.1理化分析HA精品在260nro_及280nm处 的吸光度(A)分别为0.28和0.13;A./A.为 0.46,核酸及蛋白质含量分别为5.0g/kg和26.7 g/kg;红外和紫外吸光度图谱见Fig1,2,HA成品, 粘度:锥板式粘度计测为1.87mPa?s{毛细管粘度 计测为1.79mPa?;pH值为6.9. 2.2局部致炎及毒副反应滴眼组及注射组的实 验眼,结膜无水肿,充血,角膜上皮完整,无剥脱及新 生血管生长,前房无渗出,虹膜血管无扩张,与对照 眼无差别. 2.3组织学观察两组实验眼结膜,角膜,虹膜上 皮细胞完整,无水肿及细胞增生,与对照眼无差1. 第四军医大学(JFourthMflitMedUniv)1998;19/1 ,?一, 图1HA红外吸收图谱 Fig1InfraredabsorptionspectrumofHA 1. 1. 0. m m 0. 0. X/nm 图2HA紫外吸收图谱 Fig2UltravioletabsorptionspectrumofHA 2.4】I鲁形眼镜药物浸泡试验 2.4.1扫描电镜实验组(HA滴眼组):镜片表 面被一层网状大分子物质均匀复盖(Fig3),洗涤后 如同未浸泡之镜片.对照组(人工泪液组),镜片表 面附着结晶样物质,部分结晶嵌顿在镜片透氧孔中 (Fig4),洗之不掉. 2.4.2相位差显微镜实验组镜片两面纹理清 晰,而对照组镜片纹理夹缝中有结晶样物质沉着. 2.5动物戴镜裂隙灯检查实验组戴镜72h,双 眼角膜10g/L荧光素染色均不着色(Fig5),镜片 内外两面光滑透明.而对照组双眼角膜有点状及片 状着色(F6),镜片外表面有白色着色点. 3讨论 利用人脐带提取HA,其成本低廉,收率较高, 且组织抗原性小,紫外及红外吸收图谱与文献_1报 告一致.我们将人脐带提取的HA,制成滴眼液,经 动物实验证明,无致炎性及毒副作用,提示本工艺制 备的HA滴眼液可用于临床.应用本滴眼液对隐形 眼镜离体及戴镜观察,本滴眼液对隐形眼镜片具有 润滑和保护作用,并且对眼角膜无损伤,无刺激等作 用. 第四军医大学(JFourthMilitMedUniv)1998{19(1) 图3HA滴眼组SEM Fig3HAeyedropsgroupSEM×1000 图4人工泪液组sEM Fig4Artificia|teargroupSEMX1000 图5动物戴镜实验跟,角膜荧光素染色阴性 Fig5Experimenteyewithsoftlens.stainingofcorneasbyfluoresceiawasnegative(1×10) 图6动物戴镜对照眼.角膜荧光素染色阳性 Fig6Controleyewithsoftlens-stainingofcorneasbyf[uoreseeinwasnegative(1×10) HA为无色,无臭味,具有吸湿性和溶于水等优 点.HA系生物大分子物质,其分子构型表明,只需 低浓度便可产生高粘性溶液.HA水溶液是以一种 线连的交织网状形式存在,具有较高的牯弹性和渗 透压,加之与水的氢键结合,从而起到了很强的保 水作用.由于HA独特的分子掏型和理化特性,故 符合配戴隐形眼镜时生物学要求.扫描电镜及相位 差显微镜观察证实,HA能以交织网状形式均匀地 复盖于镜片表面,不易进入到隐形眼镜的透氧孔中, 亦不影响角膜的新陈代谢及生理功能,有保水和润 滑作用,进而防止镜片的磨擦,减轻或消除了配戴隐 形眼镜的异物感.HA资源丰富,提取工艺不甚复 杂,成本低廉,应用广泛,若能开发利用,其社会及经 济效益可观. 参考文献 1沈江,张天民.人脐带眼科用透明质酸的击I备和分析检验山 东医学院,1985;23(4):15—19 2张天民.透明质酸的研制及应用研究.药学通报,1987;22(9): 556—559 3马吉献,于纯智-张廷钺.透明质酸钠滴瞩剂的制备,动物宴 验最初步应用.眼科研究,1993}11(2):93一?5 (收稿199610—22修回1997】2一O4)犏辑何扬举 多渠道供血皮擗 I钟德才.中华整彤烧估外科杂志,1997;13(4):245l 为满足太面积皮肤缺损的覆盖和器官再造l期手术完成,近8年来设计了多渠道供血皮瓣,即由2—3支知名动脉或其皮支 共同供养的,共已l8例23个皮瓣,全部成活,创口I期俞台,皮瓣供区部位包括额,颈,髂腹部,小腿及跟腱区等,用于鼻再 造,阴茎再造.下腹壁修复,颈前,腕部4/5环状软组织映损,小腿骨髓炎清创后,踝关节裸露感染及创伤性足下垂矫正等治疗难 度较大的病例,都取得成功,认为从这个概念出发,身体许多部位的多渠道供血皮瓣,今后将会不断得到发掘与应用.(王小仲】