高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量

高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量 [摘要] 目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定硫酸阿托品滴眼液含量的方法。方法: 采用瑞士SPHERIGEL C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)为分析柱，甲醇-0.5%磷酸二氢钾(35? 65)为流动相，检测波长为217 nm，流速为1.0 ml/min。结果:回归方程为 H=0.916 4C-4.840 (r=0.999 9)，硫酸阿托品在40.0~160.0 μg/ml范围内，浓度与峰高呈良好线性关系，回收 率为100.3%，RSD为0.93%。结论:本方法操作简便，专属性强，结果准确，能有效地控制 硫酸阿托品滴眼液的质量。 [关键词] 硫酸阿托品;滴眼液;高效液相色谱法;含量测定 [中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)08(a)-033-02 Content determination of Atropine Sulfate Eye Drops by HPLC YUAN Ju-ping, FAN Yi-feng (The Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 226001, China) [Abstract] Objective: To determine the content of atropine sulfate in Atropine Sulfate Eye Drops by HPLC. Methods: SPHERIGEL C18(150 mm×4.6 mm,5 μm) was used as column with the detective wavelength of 217 nm,the mobile phase was methanol-0.5%KH2PO4(35?65) ,and the flow rate was 1.0 ml/min. Results: Caliation curve was linear over the rang of 40.0~160.0 μg/ml ,the regression quation was H=0.916 4C-4.840(r=0.999 9), for potency assay the mean recovery was 100.3%,RSD was 0.93%. Conclusion: The proposed method is simple, selective and accurate. It can be used for quality control of Atropine Sulfate Eye Drops. [Key words] Atropine sulfate; Eye drops; HPLC; Content determination 硫酸阿托品滴眼液为我院常用眼科制剂，主要检查眼底及用于治疗角膜溃疡、角膜炎、 虹膜睫状体炎。《中国医院制剂》[1]采用双相酸碱中和滴定法[1]测定其含量。但该法终 点不易观察，且滴定用液不稳定，需经常标定。曾报道采用酸性染料比色法[2]、BaSO4 比浊法[3]、系数倍率法[4]、电荷转移络合分光光度法[5]、离子对比色法[6]等方法测定硫 酸阿托品滴眼液中主药的含量，但这些方法操作比较繁琐，且有的方法不稳定，影响含量的 准确性;国内已有多篇报道[7,8]用高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量，但这些文 献方法重复性差，无法套用其方法进行测定。本文在文献的基础上建立了HPLC法测定硫酸阿 托品滴眼液的含量，操作简便，对医院制剂的测定具有一定的意义。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，Cary-100紫外分光光度计(美国瓦里 安公司)，BP211D电子天平(德国赛多利斯公司，1/10万)。 1.2 试药 硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0040-9109)，硫酸阿托品滴眼液 (本院自制，批号:070602，070612，070621)，甲醇(色谱纯，国药集团化学制剂有限公司)， 磷酸二氢钾(上海新华化工厂)，氯化钠(通州市化学制剂厂，批号:00306)，对羟基苯甲酸 乙酯(广东省台州市新华制药厂，批号:050801)。 2 方法与结果 2.1 系统适应性试验 色谱柱为瑞士SPHERIGEL C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇- 0.5%磷酸二氢钾(35?65)， 流速为1.0 ml/min，检测波长为217 nm。精密称取105?干燥至恒重的硫酸阿托品对照品100 mg，置100 ml量瓶中加水溶解至刻度，摇匀，作为贮备液。取此贮备液5.0 ml置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下，进样20 μl测定，结果硫酸阿托品与杂质峰分离良好，理论塔板数达4 000以上，色谱图见图1。 2.2 标准曲线的制备 取“2.1”项下的贮备液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样20 μl，测定峰高，以峰高(H)对其浓度(C)进行线性回归，得回归方程为H=0.916 4C,4.840 (r=0.999 9)，在40.0~160.0 μg/ml范围内线性关系良好。 2.3 回收率试验 分别精密称取105?干燥至恒重的硫酸阿托品对照品40、50、60 mg各3份，置50 ml量瓶中，同时按处方比例分别加入对羟基苯甲酸乙酯和氯化钠，溶解后加水稀释至刻度，配成模拟硫酸阿托品滴眼液样品，精密量取模拟样品5 ml置于50 ml量瓶中加水至刻度配制成低、中、高(80%、100%、120%)三种浓度的模拟样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样20 μl，测定峰高，将峰高代入回归方程，计算含量，并计算回收率，结果见表1。 2.4 精密度测定 取标准曲线项下的高、中、低3种浓度的溶液，按“2.1”项下的色谱条件各重复进样5次，测定峰高，计算日内RSD和日间RSD，结果日内RSD分别为0.52%、0.33%、0.30%，日间RSD分别为1.67%、1.20%、0.89% 。 2.5 样品含量测定 精密量取硫酸阿托品滴眼液成品1.0 ml置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进样20 μl，测定其峰高，并代入回归方程计算含量，并与双相酸碱中和滴定法进行比较，结果见表2。 3 讨论 3.1 方法的选择 硫酸阿托品分子中含有酯键，它在弱酸性及近中性条件下较稳定，在碱性溶液中易分解(如加热则分解更迅速)，生成莨菪酸及莨菪醇而失效。硫酸阿托品在灭菌及贮备过程中，受到外界因素(如温度等)影响时，其水溶液易水解，使含量和pH下降。从样品含量测定中可以看出，双相酸碱中和滴定法的结果高于HPLC法，与实际工作中的情况相似，酸碱中和滴定法结果受终点指示剂变色判断，测得含量误差大，所以不能真实反映硫酸阿托品的实际含量，由于对羟基苯甲酸乙酯的干扰，也不能用紫外分光光度法直接进行测定。本文根据硫酸阿托品的化学结构和相关文献报道，运用了高效液相色谱法测定其含量，方法简便准确，可不经分离直接测定硫酸阿托品的含量，且对羟基苯甲酸乙酯不干扰主药的含量测定，为该制剂的质量控制提供了依据，具有实用的参考意义。 3.2 流动相的选择 曾报道过HPLC法测定消旋山莨菪碱凝胶的含量[9]，选用的是甲醇-0.5%磷酸二氢钾(22?78)作为流动相进行试验，因硫酸阿托品的结构和消旋山莨菪碱相似，仅相差一个羟基，所以我们选用相同的流动相，但出峰时间较长，因此改变流动相物质之间的配比为35?65，结果表明，各峰分离良好，保留时间适宜，故选用此流动相。在测定过程中，流动相中虽然加了0.1%三乙胺溶液，但还是有一定的拖尾现象，故采用峰高法测定本品的含量，可以减少 误差，以保证测定结果的准确性。 [参考文献] [1]中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范[S]. 第2版.北京:中国医药科技出版社，1995.182. [2]邓朝晖，刘银生，葛碧谨. 复方硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品含量测定研究[J].中国药业，2000，9 (9): 23. [3]林玉洪，华剑.BaSO4比浊法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].实用全科医学，2003，1(2): 155. [4]屈悦.系数倍率法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国药师，2005，8 (5): 436-437. [5]陈学锋，冯炜钢.电荷转移络合分光光度法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国现代应用药学，2003，20 (6): 514-516. [6]习丹，胡建新，张瑛.离子对比色法测定硫酸阿托品滴眼液中主药的含量[J]. 中国药房，2007，18(7):549-550. . HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].中国药师，2006，9(6):528-529. [7]李锦, [8]孙东凯，李季静，胡凤婷. HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].首都医药，2007，14(09X):52. [9]范义凤，李德明，王华.消旋山莨菪碱凝胶的制备及质量控制[J].中国药房，2007，18(10):766-767. (收稿日期:2008-03-24) 注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文