HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量

HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量 目的:建立晕痛定胶囊中阿魏酸的HPLC定量测定方法。方法: 选用岛津C18色谱柱，甲醇-0.5%冰醋酸(350:650)为流动相,1,;检测波长为320nm,2,;流速1.2ml/min 。结果: 阿魏酸在0.0068,0.068μg范围内线性良好，回归方程Y=5E+07X-63525 ，Г=0.9983(0.0068,0.068μg)，加样回收率为94.23%。结论: 该方法准确、灵敏、方便。 高效液相色谱法 晕痛定胶囊 阿魏酸 量 晕痛定胶囊是河南龙都制药有限公司自行研制，由SFDA批准独家产权保护生产的抗偏头痛、眩晕首选药物。目前研究成果表明其中蜜环菌菌丝溶液发酵物与天麻有相似的药理作用，川芎中的川芎嗪和阿魏酸较明显地扩张冠脉、增加冠脉流量及心肌营养血流量，使心肌供氧量增加，促进心肌供氧和耗氧的平衡。此外，其有效成分阿魏酸，体外实验表现抗血栓形成作用，能缩短血栓长度、减轻血栓干重和湿重。目前该品的相关药品收载于《卫生部药品标准》新药转正标准(第二册)，其中仅包括性状鉴别及蜜环菌发酵培养物与川芎的定性鉴别。对其发挥主要药理作用的蜜环菌菌丝溶液发酵物、川芎嗪和阿魏酸的含量测定方法尚未建立。目前国内外相关文献尚无关于晕痛定中阿魏酸含量测定方法的报道，本研究主要以建立晕痛定胶囊中阿魏酸的HPLC定量测定方法为目的展开讨论。 1.1 仪器 岛津LC-10AT色谱仪;岛津 SPD-10A紫外检测器;N2000色谱工作站。 1.2 试药 阿魏酸对照品(中国药品生物制品鉴定所);晕痛定胶囊(由河南龙都制药有限公司提供)，批号:061207;甲醇(一级色谱纯乙醇，天津四友);乐百氏纯净水;其它试剂均为纯。 2.1 色谱条件 色谱柱:岛津C18色谱柱。高效液相色谱仪:岛津，LC-10AT;检测器:岛津，SPA-10A;数据处理系统:N2000。流动相:甲醇-0.5%冰醋酸(350:650);流速:1.2ml/min;检测波长:320nm;进样量:20ul;在上述色谱条件下，阿魏酸的保留时间为23min左右。理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于4000，分离度达到1.5以上。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品25mg，置100ml棕色瓶中加甲醇-5%冰乙酸(1:4),1,至刻度，得A溶液，再取A溶液10ml置100ml棕色瓶中加甲醇-5%冰乙酸(1:4)至刻度，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取本品10粒，求出平均粒重(0.5g)，研细，精密称取一粒重，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液，过0.45μ滤膜，即得。 2.4 样品空白对照溶液的制备 精密称取蜜环菌菌丝溶液发酵物0.5g，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液，过0.45μ滤膜，即得。 2.5 测定法 分别吸取对照品与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。用外标一点法计算。 2.6 试验结果 2.6.1 阴性对照试验 分别制备样品溶液、阿魏酸对照溶液、样品空白对照溶液，在上述色谱条件下分别注入液相色谱仪，得色谱图(图1,3)。结果显示，在药材溶液和样品溶液色谱图中，与对照品溶液色谱图阿魏酸峰相应保留时间处有相应的峰出现;空白对照品在对照品溶液色谱图阿魏酸峰相应保留时间处无干扰。 2.6.2 线性关系考查 取阿魏酸对照品精密称定，加甲醇-5%冰乙酸(1:4)制成每1ml含3.4mg的溶液,精密量取该溶液1ml置100毫升容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，得甲溶液。再精密量取甲溶液1ml置100毫升容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，得乙溶液。分别精密量取乙溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、10ml，分置7个100ml容量瓶中，加甲醇定容，照2.5项下测定方法分别测定。数据结果见表1。表1 阿魏酸峰面积与进样量的线性关系(略) 回归方程和浓度范围为: Y=5E+07X-63525 Γ=0.9983 (0.0068,0.068μg) 标准曲线为基本通过原点的一条直线，所以可用外标一点法测定计算阿魏酸的含量。 2.6.3 精密度试验 照2.5项下测定方法，分别取2.3项下供试品溶液重复测6次，测定峰面积。结果见表2。表2 精密度试验(略) 2.6.4 稳定性试验 照2.5项下测定方法，取2.2项下对照品溶液，每隔2h进样1次，结果见表3。表3 稳定性试验(略) 2.6.5 回收率试验 精密称取批号为061207，已知含量(0.0104mg/粒)的样品一粒(重0.5g)置具塞三角瓶中，依2.3项下制备方法制备，在制备所得溶液中加0.0250mg/ml的对照品溶液1ml，依2.5项下测定方法测定。结果见表4。表4 回收率试验(略) 2.6.6 样品测定 取本品10粒，求出平均粒重(0.5g)，研细，精密称取一粒(重0.4978g)，依2.3项下制备方法制备，所得样品溶液依2.5项下测定方法测定，测得峰面积为454251.343代入线性方程求出每粒样品中含阿魏酸0.0104mg。 2.7 结果 采用HPLC法测定晕痛定胶囊中阿魏酸的含量，方法操作方便，精密度好，结果准确可靠。 该法对于测定晕痛定胶囊中阿魏酸含量专一性强，灵敏度高，样品较稳定，精密度和回收率好。 该法保留时间过长，可通过增加流动相中甲醇的比例来相应缩短保留时间。 本研究所采用提取方法所得阿魏酸含量太低，可通过增加提取时间及提取次数，然后浓缩来提高其浓度。 阿魏酸为弱有机酸，化学性质不稳定，在制备标准品时可在标准品溶液中加入一定量5%冰乙酸,1,。另外样品溶液应当在制备后马上测定含量，以防止阿魏酸分解影响测定结果。 【 1 贾晓斌，施亚芳，黄一平.当归和川芎中阿魏酸高效液相色谱法测定方法的改进.中成药，1998，20(6):57. 2 国家药典委员会.中华人民共和国药典2000年(一部)，2000，313. 欢迎到访:更多资源查看: