小鼠精子畸形试验方法的改进

小鼠精子畸形试验方法的改进 2一22豺二 蚌埠医学院1999年7月第24卷第4期 小鼠精子畸形试验方法的改进R;2l, 周纯先肖棣王帮曩王允滋?_—?—-''一——?-''.一 摘要目的:改进检测小鼠精子畸形的试验方法.方岳:采用改进的小鼠精子畸形试 验方法进行观察,并与有关试验方法作 对比研究.砖果:两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,环磷酰 胺阳性组和生理盐水对照组,其观察结果 均以用10.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符台小鼠精子畸形分析的 试验要求.砖据:本法具有操作简便,镜 检满意和结果可靠等优点. R-啊中国图书资料分类法分类号311./ Improvementinmethodofspermaberrationtestinmice ZhouChtmxian,XiaoDi,WangBangxia,WangYunzi (DepartmentofHygiology,&"MedicalCollege,Anhui233003) AbstractObjective:Toimprovethemethodofspermaberrationtestinmice.Methods:Theimpmvedmethod forspermaberrationtestWSSusedinmicetocomparewithothermethods.ReS?l 拓:TeStstakanfrom cyclophosphamidemiceandnormalsalinetreatedmicewertusedtorr1akespermsuspensionin2differentvolume (1and3m1)of0.9%salineforsrn~Rrexaminationofabnormalspermundermicroscope.]_heresultshowedthat spermsuspendedin1mlsalinewassatisfactory.Conclusions:Thismethodhasmanyadventages;itiseasyto perform.theamountofspelTfiobtainedissatisfactoryforexaminationandtheresultsarerelia ble. Keywordsspermcount;mice 精子畸形试验常用于观察精子头部和尾部的形 态异常,是研究外来化学毒物诱发人或动物精细胞 突变和判断有无生殖毒性作用的常用方法之一.目 前用于检测小鼠精子畸形的试验方法有多种【_2J, 但其操作过程过于复杂,有的试验结果甚至不够理 想.本文目的是对有关试验方法进行改进,简化操 作步骤.建立本实验室条件下的小鼠精子畸形试验 *安蠢省教育委员会贷助课题 作者单位:233003蚌埠医学院卫生学教研室 方法,现作报道. 1材料与方法 1.1动物选用本院实验动物科提供的昆明种雄性小鼠, 体重25--28g. 12试剂环磷酰胺(上海产);0.90,6生理盐水;10,6伊红 溶液. L3实验方法试验分2组.每组4只.I组为环磷酰胺 阳性组,按40mg/ke体重腹腔注射;II组为0.90,6生理盐水 胡性对照组,按0.1ml/10g体重腹腔注射.各试剂物均每 恩医科大学.1989,15(5):442 3辛柏青,杨贵贞小鼠胸腺上皮细胞增养上清的生物学话性中 华微生物学和免疫学杂志,1989,9(4):222 4GeenenV,LJJ,FranchimontP,alCcor~steneeofc~Vtocm andneurophys]ninthehumanthymusScience,1986,232(4749): 508 5(吼V.DefremeMP,RobertF,efalTaeneuroho~ thyr~cmict,:~nvironmeat:Imman(xSncehemicaIevlderlcet1 thymicnursecellsareneurc~docfinecells.Neuroendoerinolegy. 1988,47(4)?:365 6AmsenD,KruishaekAMThymocytese]eetion:No~byTCR0l_e. Immtmo【Rev,1998,165:209 7Mark~ckAJ,Lolait,FunderJWIramunoreactivearginine vas.pre端inintheratthymusEn?I.,1986,119(4):1690 8Go~tertV,KechaO.BrilotF,egalThethymiereof ~rehtedselfc:ca】roLeinT-celLselection andpham?ca】implications 6(1,2):115 1999 9MartelxsH,Kecha0,CharLet—RenardC,ega1.Neurohypophyslal peptide~stimulatethephosphorylationofpre-Tcellfocaladhaslen kimseseutoendcerlr,o|egy,1998.67(4):282 10GeenenV.Marter~H,Ver1i曲锄E.alCellularand mlecarbtb}TMC丁.【edueatio~inneurcend~crinef prlncip|es.hr吼1i0nsautoman'mnityArmNYAcadSCi,1998, 840:328 [收稿日期1999.06一O4) 224ActaAcademiaeMedicinaeBengbu,July1999,Vo1.24,No.4 天1次,共5d.两组小鼠均于末次处理后1周全部处死作 精子畸形分析. 1.4精子悬液制备及制片用颈椎脱臼法处死小鼠,摘取 双侧甜睾分别置于盛有1rod和3rod0自%生理盐水的平皿 中(每组小鼠各作两份),用小剪刀将甜睾组织剪碎后用小滴 管轻轻吹打3,4次,并将组织碎片尽量取出,按1rod精子 悬液加入1%伊红溶液0lm】混匀染色1raln后.取1滴于 清洁的玻片上,均匀推片,空气自然干燥后作镜检.每鼠制 片2张,观察l000十精子并计数精子畸形数. 2结果 两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻 片镜检显示,不论是环磷酰胺阳性组,还是生理盐水 阴性对照组,观察结果均以用1ml0.9%生理盐水 作稀释液制备的玻片镜检满意,符合精子畸形分析 的试验要求(见图1--4). 3讨论 小鼠精子畸形试验的成功与否,除试验设计符 合要求外,其关键是精子悬液的制备和制片,它可直 接影响镜检时有无足够的精子计数及试验结果的取 得.有方法介绍…1小鼠精子头部异常检测时,精子 悬液用0.9%生理盐水溶液3ml作稀释液,并用8O vm丝网过滤去除附睾组织碎片,制片时一张玻片 要重复推片3次等操作过程.笔者曾直接采用上法 作小鼠精子畸形分析研究,但所制玻片镜检时精子 数量较少,每鼠计数1000个精子耗时较长,有时甚 至难以满足结果分析的要求.分析其原因认为主要 是稀释液用量过多所致.经试验改进后,减少09% 生理盐水为1ml,并简化其操作过程,使试验结果 达到璃意要求,镜下视野中精子数量充分,背景清 晰,容易计数结果分析所需精子数[3-5].另外,笔 者也曾采用另一精子畸形试验方法L2进行操作,在 其方法中,采用1ml磷酸盐缓冲液生理盐水作精子 稀释液,直接制片后用无水乙醇固定5min,空气干 燥后直接镜检,或无水乙醇固定后再用2%伊红溶 液染色后镜检(在染色缸内进行).本文对此试验方 法进行了改进,直接用0.9%生理盐水1ml作精子 稀释液,1%伊红溶液直接加入精子悬液中染色,制 玻片及镜检,省去了磷酸盐缓冲液生理盐水的配制, 无水乙醇固定和伊红溶液用染色缸染色等操作程 序,而且不影响试验结果的观察. 本文采用改进的小鼠精子畸形试验方法作了对 比研究,结果显示本法具有简便,易行,省时,镜检效 果满意及不影响试验结果分析研究等优点,值得 推广使用. (本文图1,4见封二) 参考文献 1布鲁西克着.吕群,强义国,江绍慧译遗传毒理学原理上悔: 复且大学出版杜,1987.244--247 2刘麓谷卫生毒理学基础.第2版北京:^民卫生出版杜,1998 215,217 3周纯先,王帮矗,肖棣.维生紊A和亚硒酸钠对菜油烟抟疑物 致小鼠毒性作用的影响.癌变?畸变?突变,1998,10(4):230 4周纯先,肖棣,王帮矗,等.氯化汞对小鼠毒性作用的研究蚌埠 匿学院,1999,24(1):1 王帮矗,肖棣维生紊E对色拉油烟棒凝物致小鼠毒 5周纯先, 性作用的髟响癌变?畸变?突变,1999,11(2):89 [收藕日期1999.05—17) 敬告作者 为贯彻国家教委(现改名为中华人民共和国教育部)办公厅1994年编着的《高等学校档案实体分类法》 与《高等学校档案工作》中第三章第八节有关《高等学校出版类档案工作规范》的精神,为利于出版物的 原稿长期或永久性保存,敬请作者撰稿时用蓝黑墨水或碳素墨水正规书写.欢迎电脑打印稿.原稿一式两 份,并附单位介绍信.拒收纯蓝墨水撰写的稿件,复印件,油印件及复写稿件. 谢谢合作. 《蚌埠医学院》编辑部