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幽门螺旋杆菌

2017-09-01 31页 doc 78KB 50阅读

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幽门螺旋杆菌幽门螺旋杆菌 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgG/IgM/IgA 目录 1. 用途 2. 诊断意义 3. 赛润ELISA classic - 检测原理 4. 试剂盒组成 5. 检测所需物质,试剂盒未提供 6. 储存和稳定性 7. 赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 7.2样品准备和储存 7.3试剂盒反应试剂的准备 7.4检测程序概要 1 7.5检测过程 8. 检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2检验有效性标准 8.3计算赛润 ELISA...
幽门螺旋杆菌
幽门螺旋杆菌 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgG/IgM/IgA 目录 1. 用途 2. 诊断意义 3. 赛润ELISA classic - 检测原理 4. 试剂盒组成 5. 检测所需物质,试剂盒未提供 6. 储存和稳定性 7. 赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 7.2样品准备和储存 7.3试剂盒反应试剂的准备 7.4检测程序概要 1 7.5检测过程 8. 检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2检验有效性标准 8.3计算赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌IgG/IgM/IgA(定量) 8.4检测结果 9. 性能特性 9.1重复性 9.2 敏感性和特异性 10. 警告 10.1警告和安全 10.2废料处理 11.参考文献 V8.03/06-1 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌IgG/IgM/IgA试剂盒 酶联免疫法测定人体抗体IgG/IgM/IgA - 只限用于体外诊断用- IgG 试剂盒 (定量) 编号: ESR118G IgM试剂盒 (定量) 编号: ESR118M IgA 试剂盒 (定量) 编号: ESR118A 检测评估标准: Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX,手动操作 1. 用途 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgG/IgM/IgA试剂盒主要用于定性和/或定量检测人血清或血浆中的抗幽门螺旋杆菌抗体。幽门螺旋杆菌感染的血清学诊 断主要是检测IgG抗体,血清学的另一个参考性数据是其IgA抗体的检测结果。与IgG抗体的检测相结合,IgA抗体检测能够为幽门螺旋杆菌急性感染提供有 2 力的证据。成年人由于幽门螺旋杆菌感染病程较长,IgM抗体检测结果与疾病 没有相关性,而对儿童和青少年来说,IgM抗体的检测结果能为幽门螺旋杆菌 复发感染引起的腹痛提供重要的证据。IgG抗体的检测通常用于幽门螺旋杆菌 感染根除治疗后的监测控制。 2. 诊断依据 幽门螺旋杆菌是一种呈螺旋状的革兰氏阴性细菌。幽门螺旋杆菌是借助多至7根的鞭毛进行运动的,1 幽门螺旋杆菌的微生物试验主要包括尿素酶、过氧化 2 氢酶和氧化酶阳性试验、马尿酸盐水解的消失和硝酸还原酶的支持。 幽门螺旋杆菌是宿主特异性细菌,此外在哺乳动物如猫、狗、猪和小鼠的体内 也发现了其它种类的螺旋杆菌。3 幽门螺旋杆菌菌株之间苯基类型的差别会特异性地表现为表达与不表达细胞空 泡毒素(VacA)和通过毒素相关基因(CagA)表达的第二种毒素。致命性的(I型)和非致命性的(II型)螺旋杆菌菌株可以通过它们苯基类型的不同进行鉴 别。5, 6 十二指肠溃疡病人经常感染能够表达细胞空泡毒素和细胞毒素相关基因的I型幽门螺旋杆菌。 一些研究认为幽门螺旋杆菌(I型)感染与胃癌的发病未必有直接的因果关系。 9 至于幽门螺旋杆菌对人体的传染途径目前还无法确定,多数学术报道认为是 4经口--口和口--排泄物的途径进行传播的。幽门螺旋杆菌感染可分为急性和慢 10性感染。80-90 % 的胃炎是由幽门螺旋杆菌感染引起的。 1112幽门螺旋杆菌感染的相关疾病主要有十二指肠溃疡(95%)、胃溃疡(90 %) 3 13和与粘膜相关的淋巴组织瘤(MALT )(60-70 % )。幽门螺旋杆菌慢性感染的 14 病人中粘膜相关性淋巴组织瘤的发病率比正常人群高6倍。 幽门螺旋杆菌感染诊断技术可分为非侵入性和侵入性,组织学检查、尿素 酶快速试验(如:CLO试验)、微生物试验(如培养或分子生物学试验[PCR])属于侵入性方法,而C13呼吸试验和血清学试验属于非侵入性诊断方法。 欧洲推荐的幽门螺旋杆菌感染治疗是由欧洲幽门螺旋杆菌研究小组 (EHPSG)于1997年在“马斯特里希特研讨会”上制定的。对于幽门螺旋杆菌阳 性的溃疡病人都推荐采取根除治疗方法,即“三重疗法”。此外,所有45岁以下患有消化不良、而没有严重症状的病人均应采取非侵入方法(如血清学方法) 进行检测,如果呈现阳性结果就应当予以治疗。15, 16 血清抗体的检测可用于根除治疗后的监测控制。在根除治疗和血清学监测控制 期间有一个至少6个月的周期,该周期中抗体滴度有显著的变化。17 3. 赛润ELISA classic - 检验原理 用抗原包被微量板孔,制成固相载体。加患者血清到板孔中,其所含的抗体特 异性地与固相载体中存在的抗原结合,形成免疫复合物。除去多余物质后,加 入碱性磷酸酶标记的IgG、IgA和IgM抗体,使之与上述免疫复合物反应。洗 板,除去多余的结合物,加入底物(对硝基苯磷酸盐)。该反应产生有颜色产物, 颜色强度与特异性抗体含量成正比。 4 4.试剂盒的组成 试验成分 IgG试剂盒 IgM试剂盒 IgA试剂盒 数量 / 剂量 微孔条(此微孔条可以掰开单独使用,每条有8孔,共96孔,已经包被了抗原) 12 12 12 1个微孔条框架 包被的抗原为灭活抗原 标准血清(立即可用) 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液;抗HIV抗体、抗乙肝病毒(HBV)表面抗原和抗丙肝病毒(HCV)2×2毫升 2×2毫升 2×2毫升 抗体均为阴性; 防腐剂:< 0.1% 叠氮化钠 染色剂:紫红色O 阴性质控血清(立即可用) 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液;抗HIV抗体、抗乙肝病毒(HBV)表面抗原和抗丙肝病毒(HCV)1×2毫升 1×2毫升 1×2毫升 抗体均为阴性; 防腐剂:< 0.1% 叠氮化钠 染色剂:里沙明绿 V 酶标记的抗人IgG, IgA, IgM (立即可用) 13毫升 13毫升 13毫升 羊抗人IgG, IgA, IgM(多克隆),碱性磷酸脂酶, 5 以蛋白稳化溶液加以稳化。 防腐剂: 0.01% 甲基异噻唑啉酮 0.01% 溴化硝基二垩烷 浓缩洗液(可稀释至1000毫升) 氯化钠,含吐温20和30mM Tris 1×33.3毫升 1×33.3毫升 1×33.3毫升 防腐剂:< 0.1% 叠氮化钠 稀释缓冲液 磷酸盐缓冲液,内含蛋白和吐温20 2×50毫升 2×50毫升 2×50毫升 防腐剂:< 0.1% 叠氮化钠 0.01克/升的溴酚蓝钠盐 终止液 15毫升 15毫升 15毫升 1.2N 氢氧化钠 底物(立即可用) 邻硝基苯磷酸盐,不含其它溶剂的缓冲液 防腐剂:< 0.1% 叠氮化钠 13毫升 13毫升 13毫升 (瓶子未盖好底物可能会轻微变黄,但不会影响其 质量) 带有标准曲线和评估表的质量控制认证文件 1 1 1 (抗体以IU/毫升或U/毫升计量) 5. 其它检测所需物质 - 普通实验室所需的仪器装置 - IgM检测::赛润类风湿因子Rf—吸附剂(产品编号Z100/5ml和Z200/20ml) - 分光光度计,波长405纳米,建议参考波长范围620纳米- 690纳米(例如 650纳米) - 37?温箱 - 湿盒 - 蒸馏水。 6. 储存及稳定性 试剂 储存 稳定性 微孔条(抗原) 开封后放在2-8?装有干燥剂的密封铝箔袋中。 4星期 质控血清 / 开封后保存于2-8?。 有效期内; 标准血清 24个月 立即可用的溶液于2-8?储存。 酶标记抗体 有效期内 24个月 避免污染(使用无菌针头)。 6 开启后于2-8?储存。 18个月 有絮状时丢掉 稀释缓冲液 未开封 有效期内 36个月 浓缩液开封后保存于2-8?。 有效期内 工作液在2-8?。 2星期 工作液在室温下。 洗涤液 1星期 盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗,并丢弃混浊溶液。 2-8?储存,避光。 有效期内 底物 24个月 避免污染(使用无菌针头)。当溶液变为黄色时应予以丢 弃。(水作空白,吸光度大于0.25时)。 终止液 开封后保存于室温下。 有效期内 7. 赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1 注意事项 只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果,因为所有试剂都是 有关联的,不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清,对照血清以及酶标 记物,必须使用试剂盒配备的,不要使用其它批号产品。稀释缓冲液,洗液, 终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。 ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。应在未开封的情况下,保 存于2-8?,并在有效期(见标签说明)内使用。详细的稳定性和储存资料在 “6. 储存及稳定性”内将加以详述。 每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果未经规定被稀 释或改动都会导致检测的敏感度的降低。 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸 7 发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错 误的结果。 应按照规定刻度截断微孔条。如果铝袋破损或者开启装有干燥剂的铝袋后而未 以夹子封紧的,则不要继续使用。 开始试验前,将所有试剂置于室温。 从试剂管中吸取试剂的时候,应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结 果,吸加酶结合物时,吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的外面,注意不要盖错 瓶盖或管盖。 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和 所有稀释过的溶液(例如使用混合器)。 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清,酶结合物或底物时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大, 将会导致不同的 “预孵育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。 如果实验中未严格遵守控制质量控制认证文件上的有效性特异准则,则试验结果无效。 洗涤不充分将影响试验结果: 应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器(平底孔,孔直径7毫米,深10.9毫米)指导手册进行。重要的是所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时,应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打,以确保所有孔内均无 洗涤缓冲液。避免产生泡沫!如果使用自动洗板机,注意正确操作。 7.2 样本准备储存 8 虽然,在检验中不会产生副影响,但为避免干扰结果,应保留使用高血脂的、 溶血的或污染的血清。 样品不应加热灭活。 7.2.1样品稀释 开始试验前,患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下(V1+V2): 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgG/IgA V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 稀释缓冲液 稀释后及加入微孔板前,样品必须充分混合。 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgM 类风湿因子抗体是IgM的自体抗体,可与IgM免疫复合物结合。非特异性IgM抗体(风湿因子)的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外,也存在弱结合 的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况下, IgM的检测将得到假阴性的结果。因此,在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。(赛润类风湿因子吸附剂,产品编号Z100 (5ml/25样品)及Z200(20ml/100样品))。 首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(V1)进行如下稀释: V1+V2=1+4 加 200微升 Rf-吸附剂 于 800微升 稀释缓冲液中 然后将患者的待测样品(V1)在此Rf稀释缓冲液(V3)中进行稀释: 9 V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 稀释缓冲液中 7.2.2 样品储存 密封的患者样品可在冰箱中2-8?保存7天。? -20?可保存更久。 避免样品反复冻融。 已稀释的样品可在2-8?保存一星期。 7.3 试剂盒反应试剂的准备 7.3.1 微孔条 微孔条置于一框架内,并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取 下并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次,并以夹子夹紧,确保铝袋的密封性。 7.3.2 对照血清 / 标准血清 对照和标准血清稀释,可直接使用。 对于每次试验和每批检测体系,无论使用的微量板数目的多少,均应包括阴性 阳性对照孔。界定对照应作双份。如果是定量试验,标准血清也作双份。 不要用RF吸附剂处理对照血清! 7.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体,用 AP标记(即用) 禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合使用。同一试剂盒才能达到最佳检测效果。 10 7.3.4 洗液 以1:30稀释浓缩洗涤缓冲液(V1)至体积V2。 例如: 浓缩缓冲液(V1) 终体积(V2) 33.3毫升 1000毫升 1.0毫升 30毫升 7.3.5 样品的稀释缓冲液(即用) 7.3.6 底物(即用) 试验时戴手套以避免污染。必须以无菌针头吸取底物溶液。 7.3.7 终止液(即用) 7.4 检测程序概要 幽门螺旋杆菌IgG /IgM/IgA定量 进行IgM检测时先吸除RF 因子, 样品稀释液(患者样本) 1+100 将稀释的样本,和立即可用的对照血清 / 标准血清,加 到微量孔内(100微升) 孵育60分钟 / 37? 湿盒中 洗涤 加入已稀释的酶标记抗体溶液(100微升) 11 再孵育30分钟 / 37? 湿盒中 洗涤 加入底物溶液(100微升) 再孵育30分钟 / 37? 湿盒中 加入终止液(100微升) 在405 纳米处读消光系数 7.5 检测过程 7.5.1 将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张标签。 7.5.2 在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本对照血清。留一个孔为底物 空白使用,例如: 定量的IgG / IgM / IgA 抗原微量孔 孔A1 底物空白 孔B1 阴性对照 孔C1 标准血清 孔D1 标准血清 孔E1 标本 1…… 7.5.3 将样品于湿盒内37?(?1?)孵育60分钟(?5分钟)。 7.5.4 孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔(使用自动洗板机或手工洗板): - 吸去或甩去洗液 12 - 每孔内加入300微升洗液 - 吸去或甩去洗液 - 重复洗涤过程3次(共4次!) - 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打,使微孔中不再含有液体 7.5.5 加入酶标记抗体。 于相应孔内(底物空白除外)加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体 7.5.6 湿盒内37?(? 1?)孵育30分钟(? 1分钟),。 7.5.7 孵育后,以洗液清洗板孔(洗涤见上) 7.5.8 加入底物 于每孔内加入100微升底物溶液(包括底物空白孔) 7.5.9 湿盒内37?(? 1?)孵育30分钟(? 1分钟)。7.5.10 终止反应 每孔内加入100微升终止液,轻微振荡微孔板以混合溶液。 7.5.11 读取消光度 以底物空白为空白对照液, 60分钟内读取405纳米的OD值,建议参 考波长范围为620纳米-690纳米(例如650纳米)。 8检测结果评估 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌 IgG/IgM/IgA(定量) 8.1 4PL单点定量法 用赛润 ELISA classic试剂检测,抗体浓度可通过逻辑对数模型(4PL, 4个参数)来计算,该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算公式如下: D - A OD = A + 1 + e B(C - In conc.) 13 参数A、B、C和 D能够反映曲线的精确形状。 1. 下端渐进线 , 参数A 2. 曲线的斜率 , 参数B 3. 曲线的转折点 , 参数C 4. 上端渐进线 , 参数D 标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司(维尔茨堡市)在严格条件下经过多 次试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。 每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要 也可取得相关的评估软件。 为了校正正常试验偏差和建立试验对照,每轮试验均需使用标准血清作为对照。 该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的,在此范围内可 保证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照,且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。 8.2 有效性标准 - 底物空白的OD值必须 < 0.25 - 阴性对照必须为负值 - ELISA定量试验:标准血清的平均OD值必须在有效范围内,此范围已在试 剂盒专用的质量控制证书中给定(减去底物空白之后!) - ELISA 定性试验:阳性对照的平均OD值必须在有效范围内,此范围已在 试剂盒专用的质量控制证书中给定(减去底物空白之后!) 如果未达到以上标准,则试验无效且必须重做。 8.3 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌 IgG/IgM/IgA 的定量计算 8.3.1 非自动评估 每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表,因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。标准血清的参考值和有效范围已在评估表格(质量控制证书) 中给定。 14 所有的OD值在求值前必须先减去空白A1。 方法1:定性评估 为确定有效范围的上下限数值,请将已测得的标准OD平均值与质量控制证书 上给出的数据相乘(见专用公式),例如: OD = 0.502 x MW(STD) 临界值上限 OD = 0.352 x MW(STD) 临界值下限 如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64, 那么上下限数值的范围即为 0.225-0.321。 方法2:用评估表精确评估抗体活性 1. 计算标准血清两个OD值的平均值,并检查其是否在给定的有效范围内。 2. 然后,根据标准血清的平均OD值在下表中确定对应的数据栏。 3. 用已测得的患者样品OD值查出“IU / ml或U / ml”栏中对应的抗体活性。 例如: 标准血清/OD范围 0.57-0.61 0.62-0.65 IU/ml or U/ml < 0.06 < 0.07 < 5 其它 0.07-0.12 5-10 0.13-0.22 11-19 0.23-0.32 20-30 0.33-0.40 31-40 例如:测得的标准血清平均消光度值为0.64,则对应表中OD值0.62-0.65一栏中的数据。如果患者血清样品的OD值为0.25, 对应的抗体活性范围应是20-30。 3:利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。 测定间差异(指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异)可用校正系数 F 与当前测定数值相乘进行校正。校正系数的计算公式为: 15 (标准血清)OD参考值 F = (标准血清)当前测量OD值 用户利用专用的标准曲线对检测试验的偏差进行校正是非常必要的。 首先,不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数 F 进行校正。 1. 计算标准血清的两次OD值的平均值,并确认是否在有效范围内。 2. 校正系数 “F”的计算:用给定的参考数值除以标准血清两次消光数的平均 值。 F = 标准血清的参考消光数值 / 标准血清消光数的平均值 3. 将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数 “F”相乘。 4. 用经过校正的消光数值在标准曲线“U/ml或IU/ml”坐标轴上确定对应的抗体活性。 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgG活性的计算: 阳性结果: > 30 U/ml 不确定性结果: 20-30 U/ml 阴性结果: < 20 U/ml 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgM活性的计算: 阳性结果: > 30 U/ml 不确定性结果: 20-30 U/ml 阴性结果: < 20 U/ml 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgA活性的计算: 阳性结果: > 30 U/ml 不确定性结果: 20-30 U/ml 阴性结果: < 20 U/ml 针对不确定性结果的样品,应在1-2 周后对相应的病人再进行取样,重新检测。 8.3.2 利用SERION easy base 4PL软件/SERION评估软件进行自动评估 16 输入4个参数和标准血清的参考数值之后,联机软件能够立即自动计算出样品 的抗体活性。如果标准血清的光密度不在有效范围之内,则会出现下列提示信 息: SERION easy base 4PL软件: “标准已超出允许范围”和 / 或“标准差异大于20%”。("Standards are not in tolerance range"和/或"Distance between standards is greater than 20 %.") SERION评估软件: “以下组样品标准值超出允许范围:以下组样品(1-24组)的标准值差异大于20%”。("Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24. Standard value differ more than 20% in following groups: Group 1-24.") 这种情况下试验是无效的,必须重新进行试验。 只有更换批号时,参数和参考值才需要改变(评估表中标有参数与参考值),可 通过标准血清OD值对应IU/ml or U/mi栏中每组数据检查输入数据的正确性。计算出的平均OD值应与专用证书所列出的活性值相对应,软件可自动校 正测定值,使用标准版软件会打印出如下内容: 样品编号 OD值 IU/ml或U/ml 结果说明 8.4 检测结果说明 用赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgG、IgA和IgM试剂检测,阳性结果表明体内产生了幽门螺旋杆菌特异性抗体。 17 阳性血清学检测结果总可以用既往病史和临床表现来解释,但阳性结果本身并 不能区分是疾病发作期还是没有临床表现的血清阳性状况。 阴性结果表明病人处于血清学阴性状态,但这也不能排除有临床症状的急性感 染,因为可能是由于血样的采集时间太早,这种情况应在2周内再次取样检测。 螺旋杆菌的血清学试验不只限于IgG 抗体的检测,因为抗体之间的相互影响, 在幽门螺旋杆菌急性感染的病人中IgG-阴性而IgA-阳性的发生率为2-7%,另一方面有15-35 %的幽门螺旋杆菌急性感染病人并没有产生病原菌特异性的IgA抗体,所以血清学诊断还必须进行其它Ig类抗体的检测。 因此幽门螺旋杆菌血清学试验需要同时进行IgG和IgA检测,几种抗体的相互影 响及说明见下表: 表1: 幽门螺旋杆菌血清学试验中各种抗体的相互影响因素及说明: IgM IgA IgG 说明 - - - 血清学阴性状态, 进行临床症状监控时应在2周后再采样 检测。 +/- - + 与抗原接触后或感染活性期的血清学阳性状态、但无IgA 免疫应答, - - + 与病人(“传染”)年龄相关的血清学普及状态。 +/- + + 可疑的幽门螺旋杆菌感染活性期;(活动性)胃炎病人 的典型反应模式 +/- + - 可疑的幽门螺旋杆菌感染活性期,但没有IgG免疫应答(发 生率为2-7%) 9. 性能特征 9.1 可重复性 检测内结果的可重复性通过在同一批试验中检测20次不同反应的血清来判断, 18 而检测间结果的可重复性通过分别在5天进行10次独立的血清检测分析来判 断。 标准差 x 100 差异系数 (CV) = 平均值 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌 IgG: 平均消光值 检测内分析平均消光值 检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 0.760 10.10 0.753 10.90 弱阳性 1.239 5.00 1.249 6.90 阳性 1.558 7.40 1.639 4.90 强阳性 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌 IgM: 平均消光值 检测内分析平均消光值 检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 0.154 7.00 0.161 15.20 阴性 0.709 9.10 0.691 15.30 阳性 1.872 6.10 1.628 7.20 强阳性 赛润 ELISA classic幽门螺旋杆菌 IgA: 平均消光值 检测内分析平均消光值 检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 0.484 7.80 0.551 10.50 弱阳性 1.152 4.90 1.300 8.70 阳性 9.2 敏感性和特异性 19 148份血清样品分为3组,用于评估赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgG试剂。 第1组 试验检测了75份随机血样。 第2组 试验包括33份血样,均来自内窥镜检测诊断是胃炎的病人。这些样品呈 尿素酶阳性(CLO试验)和组织学检查阳性。 第3组 试验中有7份血样含有空肠弯曲杆菌抗体、17份血样的衣原体属血清学呈阳性、3份血样的梅毒螺旋体血清学呈阳性、7份血样呈伯氏疏螺旋体菌(Borrelia burgdorferi)抗体阳性、4份血样呈嗜肺军团菌抗体阳性和5份血样呈布鲁氏菌属血清学阳性。此外,还有25份血样含有高滴度的类风湿因子。 这些血样用赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgG试剂盒进行检测,此外还使用其他的IgG-ELISA商品试剂分别进行检测比较(试验A-C),对照试验是采用商品试剂的免疫印迹试验。 第1组试验结果: 试验 相关性 阳性普及率 敏感性 特异性 85.3% 28.0% 80.0% 100.0% 赛润ELISA classic 试剂检测 88.0% 33.0% 92.0% 95.5% 试验 A 90.7% 32.0% 84.0% 93.2% 试验 B 88.0% 29.0% 88.0% 100.0% 试验 C 34.6% 免疫印迹法检测 第2组试验结果: 试验 相关性 敏感性 临床学敏感性 90.9% 96.6% 84.8% 赛润ELISA classic 试剂检测 90.9% 93.3% 84.8% 试验 A 84.8% 86.7% 78.8% 试验 B 87.9% 90.0% 81.8% 试验 C 90.9% 免疫印迹法检测 第3组试验结果: 20 试验 相关性 敏感性 特异性 83.8% 79.2% 100.0% 赛润ELISA classic 试剂检测 88.2% 88.0% 97.4% 试验 A 75.0% 66.7% 92.1% 试验 B 86.8% 88.0% 94.9% 试验 C 所有敏感性、特异性和相关性的数据均利用免疫印迹试验为对照,以百分数表 示。 阳性普及率和临床敏感性与免疫印迹试验的结果没有相关性,因为“阳性普及 率”是指(每组血样中)阳性结果的数量,而“临床敏感性”是指血清阳性与 尿素酶试验或组织学检查的相关性数据。 相关性数据与敏感性和临床敏感性的结果一样在不同的试验之间没有显著性差 别。以免疫印迹试验为对照,与其他ELISA 试剂相比,赛润ELISA classic 试剂表现出了最好的特异性。 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgA 102份血清样品用于赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgA试剂盒的评估试验。这些血样被分成2组,其中第1组包括69份随机血样;而第2组包括33份血样,它们来自经内窥镜检查诊断为胃炎的病人。 血清样品用赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌IgA 试剂与另外两种IgA-ELISA商品试剂(试验 A 和B)分别进行检测,对照试验是使用商品试剂的免疫印迹试 验。 第1组试验结果: 试验 相关性 阳性普及率 敏感性 特异性 69.6% 10.0% 63.6% 83.7% 赛润ELISA classic 试剂检测 21 75.4% 11.6% 61.5% 89.9% 试验A 71.0% 11.6% 61.5% 83.7% 试验B 18.8% 免疫印迹法检测 第2组试验结果: 试验 相关性 阳性普及率 敏感性 特异性 69.7% 27.2% 70.0% 87.5% 赛润ELISA classic 试剂检测 60.6% 63.6% 90.0% 57.9% 试验A 60.6% 54.3% 80.0% 63.2% 试验B 30.3% 免疫印迹法检测 所有敏感性、特异性和相关性的数据(以百分数表示)均以免疫印迹试验为对 照。由于阳性普及率表示的是(每组血样中)阳性结果的百分率,所以这个数 据并不依赖免疫印迹试验的结果。 所有ELISA试验的相关性数据与敏感性和临床敏感性一样都是以免疫印迹试验 为对照的,试验中赛润ELISA classic 试剂与其他ELISA试剂相比具有更好的特异性,IgA 试剂的特异性低于IgG。试验结果表明:IgA 抗体主要是直接对抗幽门螺旋杆菌的细胞毒素相关基因(CagA)蛋白和尿毒酶蛋白-B,而IgG 抗体主要是用于对抗病原菌的其它许多不同的蛋白质。 与尿素酶蛋白-B是非特异性抗体结合的主要原因一样, 试验显示的IgA和IgG抗体免疫应答的差别决定了试验会有较低的相关性,因此ELISA试验与免疫印迹试验的差别是很有限的。该试验很清楚地说明了IgA 抗体检测对于幽门螺旋杆菌急性感染病人诊断的重要性:幽门螺旋杆菌感染病人(第2组)IgA 抗体的阳性率比正常人群(第1组)高2-5倍。 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgM 22 121份血样用于赛润ELISA classic 幽门螺旋杆菌 IgM试剂的评估试验,其中有 38份血样呈IgG阳性,38份血样呈血清学阴性,另外45份是随机采集的样品。 检测结果是有些呈阳性、有些是临界结果和阴性。这些血样也分别用ELISA (IgG, IgA)商品试剂和免疫印迹试验的商品试剂进行了检测。 经IgM 试剂检测,6份血清样品(6/121;5%)呈阳性,但只是弱阳性;5份血清样品(5/121;4.1%)为临界结果,其平均值为28 U/ml。用IgM ELISA试剂检测,阳性结果的百分比与国际上学术论文发表的结果是一致的。 用IgM-ELISA试剂检测阳性血清样品(样品1-6)和IgM阴性血清样品(样品7-9),其反应活性见下表: 赛润 ELISA classic 幽门螺旋杆菌试剂检测 血清 IgM IgG IgA IgM-印迹法 临界值范围: 25-30 U/ml 1 35 - - + 2 39 - + + 3 49 + - + 4 54 + - + 5 34 - - + 6 48 + - + 7 2 - - - 8 5 + - - 9 7 + - - 免疫印迹试验表明:赛润ELISA classic试剂检测的所有阳性和临界值结果和 IgM阴性的样品一样,与免疫印迹试验的结果没有差异。 23 3份IgM 阳性血清也呈现IgG 抗体阳性,但没有发现IgM抗体的长期持续存在。 10. 警告 10.1 警告和安全措施 赛润 ELISA classic试剂盒是针对熟悉实验室操作人员所设计使用的。 所有试剂盒试剂及人类标本必须采用已有的良好实验技术,小心处理: - 此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且 发现对于乙型肝炎表面抗原,丙型肝炎抗体,HIV抗体均为阴性;但仍认为它们具有潜在的感染性。 - 移液过程禁止用口。 - 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟,饮食。 - 使用试剂盒和标本时,必须戴一次性手套,穿试验服,戴安全镜。使用后请 彻底洗手清洁。 - 患者样本及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。 - 终止液:具有腐蚀性(C);发生酸烧伤(R34);因此在操作时应穿戴防护 镜,手套和试验服。 10.2 废料处理 请注意相关要求! 11. 参考文献 1. Warren, J.R., Marshall, B. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis Lancet 1983: 1273-1275 2. Malfertheiner, P. Helicobacter pylori – Von der Grundlage zur Therapie 24 Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, 2. Auflage, 1996: 11-23 3. Heilmann, K.L., Borchard, F. Gastritis due to spiral shaped bacteria other than Helicobacter pylori: clinical, histological and ultrasstructural findings. GUT 32 (1991): 137-140 4. Xia, H., Talley, N. Natural Acquisition and spontaneous elimination of Helicobacter pylori infection: clinical implications Am J Gastroenterol 92 (1997): 1780-1787 5. Schmitt, W., Haas R. Genetic analysis of the Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin structural similarities with the IgA proteasetype of exported protein. Mol Mircrobiol 12 (1994): 307-319 6. Xiang, Z., et al Analysis of expression of cagA and vacA virulence factors in 43 srains of Helicobacter pylori reveals that clinical isolates can be divided into two major types and that cagA is not necessary for expression of the vacuolating cytotoxin. Infect Immun 63 (1995): 94 7. Krakowka, S. et al Establishment of gastric Campylobacter pylori infection in the neonatal gnotobiotic piglet Infect Immun 55 (1987): 2789-2796 8. Karita, M. et al Establishment of a small animal model for human Helicobacter pylori infection using germ-free mice Am J Gastroenterol 89 (1994): 208-213 9. Yamaoka, Y. et al Antibody against Helicobacter pylori CagA and VacA and the risk for gastric cancer J Clin Pathol 52(3) (1999):215-218 25 10. Caspary, W.F. et al Diagnostik und Therapie der Helicobacter pylori Infektion Z Gastroenterol 34 (1996): 392-401 11. Malfertheiner, P. et al Helicobacter pylori Infektionen und Ulkuserkrankungen Chirug 69 (1998): 239-248 12. Stolte, M. 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Kosunen, T.U. et al Diagnostic value of decreasing IgG, IgA and IgM antibody titres after eradication of Helicobacter pylori Lancet 339 (1992): 893-395 26 赛润 ELISA classic 标签注释 / symbols on labels LOT 签号 / lot REF 订货号码 / reference or order number x…y? 储存在x…y之间的温度下 / store between x and y degree celsius CE 按照欧共体标准98/79执行 / CE marking according to IVD guideline 98/79 EC CE0197 按照欧共体标准98/79附录II, B目录执行 / CE marking according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B 终止日期 / expiry date MTP 微孔板 / microtiter plate(breakable strips) AG 抗原 / antigen CAG 对照抗原 / control antigen STD 标准血清 / standard serum POS 阳性对照 / positiv control 27 C / O 界定血清 / cut-off serum NEG 阴性对照 / negative control APC 酶标记的抗人 / alkaline phosphatase conjugate anti-human + 低浓度的酶标记物 / conjugate with low concentration ++ 中等浓度的酶标记物 / conjugate with medium concentration +++ 高浓度的酶标记物 / conjugate with high concentration RF 类风湿因子RF—吸附剂 / rheumatoid factor absorbent (rf-absorbent) Rf/CAG 赛润对照抗原类风湿因子RF—吸附剂 / rheumatoid factor absorbent (rf-absorbent) with control antigen DILB 血清稀释缓冲器 / dilution buffer for sera WASH 洗涤液 / washing solution concentrate pNPP pNPP酶结合物 / pNPP substrat STOP 终止液 / stopping solution 有腐蚀性 / corrosive CERT 标准曲线和评估表 / certificate(standard curve and evaluation table) INFO 用法说明书 / instructions RTU 立即可用 / ready-to-use CONC 浓缩 / concentrate DIL 稀释或溶解 / dilute or disolve in AQUA 蒸馏水 / aqua detillata IVD 体外诊断使用 / in-vitro diagnostic use 128 腺病毒 / Adeno, Virus 132 烟曲霉 / Aspergillus fumigatus 120 百日咳 / Bordetella pertussis 1201 百日咳毒素 / Bordetella pertussis Toxin 121 Burgdorferi 疏螺旋体 / Borrelia burgdorferi 116 布鲁氏菌 / Brucella 28 139 空肠弯曲杆菌 / Campylobacter jejuni 117 白色念珠菌 / Candida albicans 137 衣原体 / Chlamydia 1311 热柯克斯体 Q-Fever I / Coxiella brunetii (Q-fever) phase 1 1312 热柯克斯体 Q-Fever II / Coxiella brunetii (Q-fever) phase 2 134 柯萨奇病毒 / Coxsackievirus 109 巨细胞病毒 / Cytomegalovirus 130 白喉 / Diphtheria 1362 EB病毒 EBNA1 / Epstein-Barr, Virus/EBNA 1 1361 EB病毒 VCA / Epstein-Barr, Virus/VCA 107 棘球属 / Echinococcus 135 艾柯病毒 / Echovirus 133 肠道病毒 / Enterovirus 112 TBE病毒 / TBE Virus 118 幽门螺旋杆菌 / Helicobacter pylori 1051 单纯疱疹病毒1 / Herpes Simplex, Virus 1 1052 单纯疱疹病毒2 / Herpes Simplex, Virus 2 105 单纯疱疹病毒1 / 2 / Herpes Simplex, Virus 1/2 1231 流感病毒 A / Influenza, virus A 1232 流感病毒 B / Influenza, virus B 106 嗜肺军团菌1-7 / Legionella Pneumophila 1-7 125 钩端螺旋体 / Leptospira 102 麻疹病毒 / Measles Virus 103 腮腺炎病毒 / Mumps Virus 127 肺炎支原体 / Mycoplasma pneumoniae 1261 副流感病毒1 / Parainfluenza, virus 1 1262 副流感病毒2 / Parainfluenza,virus 2 1263 副流感病毒3 / Parainfluenza,virus 3 126 副流感病毒1, 2, 3 / Parainfluenza,virus 1, 2, 3 122 细小病毒 B19 / Parvovirus B19 113 呼吸道合胞病毒 / Resp. Syncitial Virus 29 129 风疹病毒 / Rubella virus 108 破伤风 / Tetanus 110 弓形虫 / Toxoplasma gondii 104 带状疱疹病毒 / Varicella-Zoster Virus(VZV) 138 耶尔森氏菌 / Yersinia 30 31
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