葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试验

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试验 实验室名称 项 目 编 号 制定日期 血液室 G-6-PD测定 ****** ****年**月**日 【目的】 指导葡萄糖,6,磷酸脱氢酶的测定。 【该SOP变动程序】 本操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。 【检验的适应证】 可用于G-6,PD缺乏症高发地区对蚕豆病进行普查普防，在高疟地区对需要服抗疟药的对象进行G-6-PD缺乏症的筛选，防止药物性溶血的发生。 【仪器与试剂】 1.仪器:电热恒温水浴箱、离心机 、紫外分光光度计。 2.试剂: 2.1 Tris-HCI-EDTA缓冲液。 2.2 0.1mol/L氯化镁溶液。 2.3 2mmol/LNADP 2.4 6mmol/L葡萄糖,6,磷酸二钠 2.5 6mmol/L,磷酸葡萄糖酸 【操作程序】 6,PGD测定 6,PGD，G-6-PD测定 加入物 1(U) 2(B) 3(U) 4(B) Tris-HCL-EDTA缓冲液 0.3 0.3 0.3 0.3 MgCl2溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 NADP， 溶液 0.3 0.3 0.3 0.3 溶血液 0.06 0.06 0.06 0.06 蒸馏水 1.74 2.04 1.44 2.04 混匀，置37?水浴10分钟 G6P溶液 0.3 6,PGA溶液 0.3 0.3 根据每升血液每分钟催化反应产生1umol的NADPH为1个国际单位，换算成每克血红蛋白的酶活力。先分别求6,PGD及(6,PGD+G-6-PD)的活力，再求G-6-PD的活力。 8040 酶活力(U/gHb)=?Amin×—— Hb(g/L) G-6-PD活力,(6,PGD+G-6-PD)-6-PGD 【参考值范围及报告单】 G-6-PD活力(已校正6,PGD)=8.34?1.59U/ gHb(37?) G-6-PD活力(未校正6,PGD)=12.1?2.09 U/ gHb(37?) 【葡萄糖,6,磷酸脱氢酶测定的注意事项】 1. 溶血液制备:取新鲜抗凝血离心去上清及白细胞层，用生理盐水洗涤两次， 再加盐水使压积红细胞约为30,，将此红细胞悬液置冰水备用。用时以蒸 馏水作25倍稀释即为溶血液。用氰化血红蛋白法测定溶血液中血红蛋白的 浓度。 2. 如6次读数相差大，应增加比读次数，直至连续5min各min间读数接近为止。 操作人员 部门主管 质量负责人 姓名 吴芬 ****** ****** 日期 2004年07月15日