HPLC—PDA法对中成药养心生脉颗粒中丹参素含量的测定

HPLC—PDA法对中成药养心生脉颗粒中丹参素含量的测定 HPLC—PDA法对中成药养心生脉颗粒中 丹参素含量的测定 第26卷第3期 2006年5月 河北大学(自然科学版) JournalofHebeiUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1.26NO.3 May2006 HPLC—PDA法对中成药养心生脉颗粒中 丹参素含量的测定 刘苋岩,王洪宇,王英锋2,李恬2 (1.河北大学化学与环境科学学院,河北保定07101)2;2.首都师范大学化学系,北京100037) 摘要:建立了用HPLC—PDA法测定养心生脉颗粒q-丹参素含量的方法.采用SymmertryShieldrM RP(150mmx4.6mm,5m)色谱柱;以V(甲醇):(水):(冰醋酸):5:94.5:0.5为流动相;流速为 1.0mL/min;检测波长280nm.丹参素在9.5,152mg/L内,线性关系良好(R>0.9999);加标回收率平均 为98,9%.RSD为0.97%.为丹参类颗粒的质量综合评价和质量控制提供了简单,准确,可行的分析方法. 关键词:丹参素;养心生脉颗粒;HPLC—PDA 中图分类号:O657.7文献标识码:A文章编号:1000一l565(2006)03—0266—04 DeterminationofSalvianolicAcidintheChinesePatentMedicine YangxinshengmaiGranulebyHPLC-PDA LIUPeng—yah,WANGHong—yu1,WANGYing—feng,LITian (1.CollegeofChemistryandEnvironmentalScience,HebeiUniversity,Baoding071002,Ch ina; 2.CapitalNormalUniversity,Beijing100037,China) Abstract:AnHPLCmethodforthedeterminationofsalvianolicacidinyangxinshengmaigra nulewasestab— lished.SeparationofsalvianolicacidwascarriedoutonSymmertryShieldrMRP18column, withmethanolwater— aceticacid(5:94,5:0.5)asmobilephase,andtheflowratewas1.0mL/min;Determinationwav elengthwas setat280nm.Linearrelationshipwasobtainedintherangeof9.5, 152mg/L(R>0.9999).Theaverage recoverywas98.9%andRSD("=5)was0.97%.Thisstudyprovidedasimple,accurateandfea siblemethod forthedeterminationofsalvianolicacid,andausableintegratedqualityevaluationaswellasa qualitycontrolfor yangxinshengmaigranule. Keywords:salvianolicacid;yangxinshengmaigranule;HPLC—PDA 养心生脉颗粒是由人参,麦冬,丹参,五味子等组成的纯中药制剂,具有益气养血,活 血祛瘀的功效,处方 中丹参(SalviamiltiorrhizaBge)是主药.丹参具有祛瘀止痛,活血通经,清心除烦的作 用_1j,丹参素(sal— vianolicacid)为其主要有效成分,具有抗血栓,改善血液循环,抗氧化损伤及增强学 习记忆等作用L2_3J.丹参 中一些成分的分析已有报道,比如丹参中丹参酮_4—5J,原儿茶醛_6J,丹酚酸B[7j 等含量的测定,制剂中如:祛 斑颗粒J,活化口服液j,乳安胶囊0_中丹参素的含量均用HPLC—UVD法测定,用 HPLC.PDA法测定制剂 中丹参素的含量报道较少_1,而且文献测定的中成药乐脉颗粒除丹参外,其他组方 均不相同.本文采用题述 收稿日期:2005,0523 作者简介:刘苋岩(1964一),女,河北蠡县人,河北大学教授,主要从事环境及食品中有机污染物的分析 第3期刘苋岩等:HPLC.PDA法对中成药养心生脉颗粒中丹参素含量的测定 法测定了养心生脉颗粒中丹参素的含量,方法简便,快捷,重现性好,为该颗粒的质量控制 1仪器与试剂 Waters600控制器,Waters717plus自动进样器,Waters2996二极管阵列检测器,WatersAF在线脱气机; Empower色谱数据工作站;KQ一250E型医用超声波清洗器(40kHz,250w);MV-265紫外可见分光光度计. 丹参素对照品(中国药品生物制品检定所);所用试剂甲醇,冰醋酸为分析纯(北京北化精细化学品有限 责任公司);流动相用水为超纯水. 2实验方法与测定结果 2.1色谱条件 色谱柱采用SymmertryShieldTMRP18(150mm×4.6mm,5m),流动相为V(甲醇):V(体积分数为 0.5%的冰醋酸水溶液)=5:95,流速1.0mL/min,检测波长为280Ilm,柱温为30?. 2.2对照品溶液的制备 精密称取丹参素对照品1.60mg于2mL容量瓶中,以水定容后,取此溶液1.0mL,稀释至l0mL,摇匀 配制成质量浓度为0.080g/L的对照品溶液. 2.3养心生脉颗粒溶液的制备 取本颗粒约1.2g,放置于25mL容量瓶中,加水振摇使之溶解充分后定容,超声处理5rain,静置1h, 取上清液过滤,续滤液经0.45Fm滤膜过滤即得. 2.4色谱测定 分别取对照品溶液,养心生脉颗粒溶液各20L,注入液相色谱仪进行分析,其色谱图 见图1,2.由2色 谱图及2峰对应的全波长紫外扫描光谱图可知:养心生脉颗粒含有对照品中的成分丹参素,养心生脉颗粒中 的丹参素峰和其他杂峰无干扰. 16 12 8 2 ,一 \ 4 嘿 O 2468 t/milq 图1对照品丹参素的色谱图 Fig.1Chromatogramofstandardsalvianolicacid 101234567891O t/min 图2养心生脉颗粒提取液色谱图 Fig.2ChromatogramofextracofYangxinshengmaigranule 2.5线性关系考察 精密称取丹参素对照品1.52mg,置于l0mL容量瓶中,加水稀释至刻度,制成丹参素贮备液 (0.152g/L).采用逐级稀释法分别配成0..152,0.076,0.038,0.019,0.0095g/L的系列对照品溶液,分别 吸取上述溶液20L,注入液相色谱仪进样测定,以峰面积为纵坐标,对照品质量浓度(rag/L)为横坐标,绘 制标准曲线,得回归方程:Y=5751.3X一304.63,R=0.9999;丹参素质量浓度在 0.0095,0.152g/L内 ? 268?河北大学(自然科学版)2006正 呈良好的线性关系. 2.6稳定性实验 称取样品1.2009g,按养心生脉颗粒溶液制备方法制备后,分别在0,1.0,3.0,8.0,12.0,24.0h进行 HPLC测定,结果表明,样品溶液在24h内稳定,其RSD为0.17%. 2.7精密度实验 取丹参素对照品溶液,重复进样6次,进行HPLC测定,实验结果表明精密度良好,其RSD为0.20%. 2.8重复性实验 精密称取同一样品5份,按养心生脉颗粒溶液制备方法提取,进行HPLC测定,计算样品中丹参素的含 重复性良好,其RSD为0.71%. 量,实验结果表明, 2.9回收率实验 精密称取(0.5000?0.2)mg已知含量的样品5份,分别加入质量浓度为0.0815g/L的丹参素对照品 溶液2.5mL(即含丹参素0.204mg),按养心生脉颗粒溶液制备方法制备后,进行HPLC测定,计算回收率, 结果见表1. 表1回收率测定结果(n=5) Tab.1Resultsofrecovery(n=5) 2.10样品的测定 精密称取3批样品,每批3份,按养心生脉颗粒溶液的制备方法制备后,进行HPLC测定,峰面积, 计算RSD值,结果见表2. 表2养心生脉颗粒样品中丹参素的质量分数 Tab.2MsssfractionofsalvianolicacidinYangxinshengmaigranule 3结果讨论 3.1提取溶剂的选择 实验分别以体积分数为100%,70%,50%,30%的甲醇和水作为溶剂,对养心生脉颗粒进行提取,提取液 用HPLC法测定其中丹参素含量.结果表明,纯甲醇提取液含量较低,其他提取液中的含量相近,但纯水无毒无 环境污染,且根据聂桂华等8报道丹参素在高浓度醇性溶液中极不稳定,故本文采用纯水作为提取溶剂. 第3期刘芄岩等:HPLC.PDA法对中成药养心生脉颗粒中丹参素含量的测定?269? 3.2流动相的选择 实验曾用(甲醇):V(体积分数为1%的冰醋酸水溶液)10:90作为流动相,发现丹参素峰出现前伸 舌;降低醋酸的用量,改用(甲醇):V(体积分数为O.5%的冰醋酸水溶液)=10:90,此时丹参素的峰形基 本对称,但保留时间提前,致使丹参素峰不能和前面的色谱峰分开;改为V(甲醇):V(体积分数为0+5%的 冰醋酸水溶液)=5:95为流动相后,丹参素峰形较好且能和前面的色谱峰分开.因此,选用V(甲醇):V(体 积分数为0.5%的冰醋酸水溶液)=5:95为流动相.这样不仅降低了污染与毒性,而且节约了分析成本. 3.3检测波长的选择 实验采用二极管阵列检测器在200,400nm内进行紫外光谱扫描,结果显示丹参素在220nm和 280nm处有特征吸收波长(图3),为了避免干扰,选定检测波长为280nm. 该颗粒含糖量较高,不宜长时间暴露在空气中,否则会吸潮结块使测定结果不准确;而且提取时水的量 不宜过低,否则黏度增大使过滤困难. 参考文献: 0 日 i o ,, 鼎 220240260280300320340360380400 Mnm 图3丹参素色谱峰对应的紫外光谱图 Fig.3Ultravioletabsorptionspectraofsalvianolicacid [1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版 社,2000:57. 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