人抗麦胶蛋白麦醇溶蛋白抗体AGAAntigliadinI

人抗麦胶蛋白麦醇溶蛋白抗体AGAAntigliadinI 人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体AGA Anti-gliadin IgA 酶联免疫试剂盒使用 本试剂盒仅供研究使用 产品编号CSB-E12028h 鹰科Accipitridae 黑鸢Milvus korschun 夏候鸟 凤头蜂鹰Pernis ptilorhybchus 旅鸟 雀鹰Accipiter nisus 旅鸟 松雀鹰Accipiter virgatus 旅鸟 赤腹鹰Accipiter soloensis 旅鸟 苍鹰Accipiter gentilis 旅鸟 草原鹞Circus macrourus 旅鸟 白腹鹞Circus spilonotus 旅鸟 白头鹞Circus aeruginosus 旅鸟 白尾鹞Cirus cyaneus 旅鸟 鹊鹞Circus melanoleucos 旅鸟 普通鵟Buteo buteo 旅鸟 大鵟Buteo hemilasius 冬候鸟、旅鸟 毛脚鵟Buteo lagopus 冬候鸟、旅鸟 灰脸鵟鹰Butastur indicus 夏候鸟 短趾雕Circaetus gallicus 旅鸟 乌雕Aquila clanga 旅鸟 金雕 Aquila chrysaetos 留鸟 白腹隼雕Aquila fasciata 旅鸟 靴隼雕Aquila pennatus 旅鸟 草原雕Aquila nipalensis 旅鸟 白肩雕Aquil heliaca 旅鸟 白尾海雕Haliaeetus albicilla 旅鸟 玉带海雕Haliaeetus leucoryphus 旅鸟 秃鹫Aegypius monachus 留鸟 检测范围1.56 AU - 100 AU 最低检测限0.39 AU 特异性本试剂盒可人Anti-gliadin IgA且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期6个月 预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Anti-gliadin IgA含量。 说明 1试剂盒保存-20?较长时间不用时2-8?频繁使用时。 2浓洗涤液低温保存会有盐析出稀释时可在水浴中加温助溶。 3中、英文说明书可能会有不一致之处请以英文说明书为准。 4刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质此为正常现象不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的麦胶蛋白抗原包被微孔板制成固相载体往包被抗原的微孔中依次加入样品或品、生物素化的兔抗人二抗、HRP标记的亲和素经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-gliadin IgA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD值计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板Assay plate 一块96孔。 2. 标准品Standard2瓶冻干品。 3. 样品稀释液Sample Diluent1×20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液Biotin-antibody Diluent1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 HRP-avidin Diluent1×10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体Biotin-antibody1×120ul/瓶1100 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素HRP-avidin1×120ul/瓶1100 8. 底物溶液TMB Substrate1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液Wash Buffer1×20ml/瓶使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液Stop Solution1×10ml/瓶2N H2SO4。 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和Eppendof管 5. 系列可调节移液器及吸头一次检测样品较多时最好用多通道移液器 6. 蒸馏水容量瓶等 标本的采集及保存 1. 血清全血标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000 x g离心20分钟取上清即可检测或将标本放于-20?或-80?保存但应避免反复冻融。 2. 血浆可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2 - 8? C 1000 x g离心15分钟或将标本放于-20?或-80?保存但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本1000 x g离心20分钟取上清即可检测或将标本放于-20?或-80?保存但应避免反复冻融。 注标本溶血会影响最后检测结果因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内检测的结果才是准确的。稀释的过程中应做好详细的。最后计算浓度时稀释了“N”倍标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则2瓶每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml盖好后静置10分钟以上然后反复颠倒/搓动以 助溶解其浓度为100 AU做系列倍比稀释后分别稀释100 AU50 AU25 AU12.5 AU6.25 AU3.12 AU1.56 AU样品稀释液直接作为标准浓度0 AU临用前15分钟内配制。 如配制50 AU标准品取0.5ml不要少于0.5ml100 AU的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中混匀即可其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制 每孔100ul实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul生物素标记抗体加990ul生物素标记抗体稀释液的比例配制轻轻混匀在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制每孔100ul实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根过氧化物酶标记亲和素加990ul辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制轻轻混匀在使用前一小时内配制。 操作步骤 实验开始前请提前配置好所有试剂试剂或样品稀释时均需混匀混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时用样品稀释液进行稀释以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul余孔分别加标准品或待测样品100ul注意不要有气泡加样将样品加于酶标板孔底部尽量不触及孔壁轻轻晃动混匀酶标板加上盖或覆膜37?反应120分钟。 为保证实验结果有效性每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体甩干不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100ul取1ul生物素标记抗体加99ul生物素标记抗体稀释液的比例配制轻轻混匀在使用前一小时内配制37?60分钟。 3. 温育60分钟后弃去孔内液体甩干洗板3次每次浸泡1-2分钟350ul/每孔甩干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液同生物素标记抗体工作液 100ul37?60分钟。 5. 温育60分钟后弃去孔内液体甩干洗板5次每次浸泡1-2分钟350ul/每孔甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90ul37?避光显色30分钟内此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色后3-4孔梯度不明显即可终止。 7. 依序每孔加终止溶液50ul终止反应此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度OD值。 在加终止液后15分钟以内进行检测。 注 1. 用户在初次使用试剂盒时应将各种试剂管离心数分钟以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔该孔不加任何试剂只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂请于2-8?保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 5. 建议检测样品时均设双孔测定以保证检测结果的准确性。 洗板方法 手工洗板方法吸去不可触及板壁或甩掉酶标板内的液体在实验台上铺垫几层吸水纸酶标板朝下用力拍几次将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内浸泡1-2分钟。根据需要重复此过程数次。 自动洗板如果有自动洗板机应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标对数坐标OD值为纵坐标普通坐标在半对数坐标纸上绘出标准曲线根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度再乘以稀释倍数或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式将样品的OD值代入方程式计算出样品浓度再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓避免起 泡。 2. 洗涤过程非常重要不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在5分钟内如标本数量多推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高请先稀释后再测定计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时请以相应的稀释液配制不能混淆。 鹗科Pandionidae 鹗Pandion haliaetus 旅鸟 隼科Falconidae 黄爪隼Falco naumanni 夏候鸟 红脚隼Falco vespertinus 夏候鸟 游隼Falco peregrinus 旅鸟 猎隼Falco cherrug 旅鸟、冬候鸟 红隼Falco tinnunculus 夏候鸟、冬候鸟、旅鸟 灰背隼Falco columbarius 旅鸟 燕隼Falco subbuteo 旅鸟 3 北京地区鸮形目猛禽名录 科 种 类 居留类型 鸱鸮科 Accipitridae 领角鸮 Otus bakkamoena 留鸟 红角鸮 Otus scops 夏候鸟 雕鸮 Bubo bubo 留鸟 褐渔鸮 Ketupa zeylonensis 旅鸟 鹰鸮 Ninox scutulata 旅鸟 纵纹腹小鸮 Athene noctua 留鸟 长尾林鸮 Strix uralensis 夏候鸟 灰林鸮 Strix aluco 旅鸟 长耳鸮 Asio otus 旅鸟、冬候鸟 短耳鸮 Asio flammeus 旅鸟 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。