康欣口服液质量标准的改进_1809

康欣口服液质量的改进_1809 康欣口服液质量标准的改进 【关键词】 康欣口服液；,,丹参；,,地骨皮；,,高效液相法；,,淫羊藿苷 摘要：目的建立改进康欣口服液标准的方法。方法采用薄层色谱 （TLC）法对康欣口服液中的丹参、地骨皮进行定性鉴别；采用高效液 相色谱（HPLC）法测定淫羊藿苷的含量。结果定性鉴别方法专属性强。 在5.36~26.8 μg范围内淫羊藿苷峰面积与浓度线性关系良好， r=0.999 8；样品平均加样回收率为100.4%(n=9)，RSD为1.84%。结论该法简便、快速、结果准确，可有效控制康欣口服液的质量。 关键词：康欣口服液； 丹参； 地骨皮； 高效液相法； 淫羊藿苷 Improvement of the Quality Standard of Kangxin Oral Liquid Abstract：ObjectiveTo improve the standard for quality of Kangxin Oral Liquid.MethodsThin layer chromatography (TLC)was used for qualitive identification of Salvia miltiorrrhiza and Lycium chinese.The icariin was determined by HPLC.ResultsThe TLC identification was highly specific.The icariin area and content showed a good linear relationship at the range of 5.36~26.8 μg and correlation coeffcient was 0.999 8. The average recovery of the added sample was 100.4%(n=9), RSD was 1.84%.ConclusionThe method is simple,quick,accurate for the quality control of Kangxin Oral Liquid. Key words：Kangxin Oral; Salvia miltiorrhiza; Lycium chinensis; HPLC ; Icariin 康欣口服液由何首乌、淫羊藿、丹参、地骨皮、黄芪等13味中药 组成，具有补肾填精、健脾益气、养血活血、抗老防衰的功能。用于脾 肾虚衰，气血不足，早衰神疲，腰膝酸软，失眠健忘等症其疗效确切。 为了提高产品的内在质量，保证其临床疗效，在原质量标准的基础上增 加了对方中丹参、地骨皮的 TLC鉴别，原定量指标是测定何首乌中大 黄素，我们根据本品作用和用途，现改为测定淫羊藿中的淫羊藿苷作为 定量指标，采用 HPLC法，并优选了提取、测定条件，建立了本品的含 量测定方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器Waters-600高效液相色谱仪；Waters2996DAD检测器；Waters Millennum32色谱工作站； Sartorius BP211D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热恒温干燥箱（上海市实验仪器 厂）；KQ-500DE型医用数控超声清洗仪（昆明市超声仪器有限公 司）；TDL-408型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。 1.2 试药薄层色谱用硅胶G、硅胶H、羧甲基纤维素钠（青岛海洋 化工厂）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品鉴定所）；淫羊藿苷对 照品（中国药品生物制品检定所）；康欣口服液（福州屏山制药厂提 供）；乙腈（色谱纯 Merck）；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 薄层色谱鉴别 2.1.1 丹参取康欣口服液50 ml置分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20 ml/次，合并乙醚取液，水浴蒸干，残渣用少量甲醇溶解作为供 试品溶液。取缺丹参的阴性制剂同法制备阴性对照液，再取原儿茶醛对 照品，加甲醇适量制成每毫升含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法实 验［1］，吸取供试品溶液和阴性对照液各10 μl，对照品溶液2 μl分别点于同一硅胶 G薄层板上。以苯醋酸乙酯甲酸（12?5?0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3% FeCl3乙醇液，于105?下加热至斑点清晰。置日光下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置 上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰。结果见图1。 2.1.2 地骨皮取康欣口服液50 ml分液漏斗中，加乙醚萃取3次，50 ml/次，合并乙醚萃取液，水浴蒸干，残渣用少量甲醇溶解作为 为供试品溶液。取缺地骨皮的阴性制剂同法制备阴性对照液，再取地骨 皮对照药材2 g，加甲醇50 ml提取，制成对照药材溶液，照薄层色谱 法实验［1］，吸取上述溶液各10 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上。以苯-醋酸乙酯-冰醋酸（12?7?2）为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外灯（UV365）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应 位置上，显相同着色斑点，阴性对照无干扰。结果见图2。 1.康欣口服液（批号031011）2.康欣口服液（批号031012）3.康欣口服液（批号031013）4.原儿茶醛对照品5.缺丹参阴性样 品 图1 康欣口服液中丹参的TLC （日光）（略） 1.康欣口服液（批号031011）2.康欣口服液（批号031012）3.康欣口服液（批号031013）4.地骨皮对照药材5.缺地骨皮的阴性样品 图2 康欣口服液中地骨皮的TLC（荧光）（略） 2.2 含量测定 2.2.1 对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成 每毫升含0.026 8 mg的溶液，作为对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备精密吸取本品10.0 ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超声提取3次，20 min/次，乙醇加入量分别为 10，10，5 ml，滤过，滤液定容至25 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜 （0.45 μm）滤过，即得。 2.2.2.1 提取时间的考察精密吸取本品10.0 ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超声提取不同时间，放冷后滤过，滤注定容至25 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，注入高效液相色谱 仪测定其含量。结果见表1。 表1 不同时间超声处理的比较（略） 以上结果表明，超声20 min含量不再增加，为提取完全，故确定 超声处理时间为20 min。 2.2.2.2 提取方法考察精密吸取本品10.0 ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，加稀乙醇分别用不同的提取方法提取20 min，放冷后滤过，滤液定容至25 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，注入高效液相色谱仪测定其含量。结果见表2。 表2 不同提取方法的比较（略） 以上结果表明，超声提取含量的同时超声简便，故确定提取方法为 超声提取。 2.2.2.3 提取溶剂的考察精密吸取本品10.0 ml，置蒸发皿中，加不同溶剂20 ml，用超声提取3次，20 min/次，放冷后滤过，滤液定容至25 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，注入高效液相色谱仪测定其含量。结果见表3。 表3 不同溶剂提取的比较（略） 以上结果表明，50%乙醇提取最完全，故确定提取溶剂为50%乙醇 （即稀乙醇）。 2.3 空白对照溶液的制备取按处方量及制法工艺要求制成的不含 羊藿的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 2.4 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250mm,5.0μm)柱；检测波长270 nm；流动相为乙腈-水（30?70）；流速1.0 ml/min；进样量20 μl。按上述条件，吸取供试品溶液、对照品溶 液、空白对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪测定，测定结果见 图3、图4、图5。从色谱图可见，其他成分对淫羊藿苷的测定无干 扰，符合测定要求。 2.5 标准曲线制备分别精密吸取对照品溶液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。各进样 20 μl，以峰面积Y与浓度X（μg/ml）进行线性回归，得回归方程： Y=98 857.5X-11 467.8，r=0.999 8。以上结果表明：在5.36~26.8 μg/ml范围内淫羊藿苷峰面积与进样量有良好的线性关系。结果见表4。 图3 淫羊藿苷对照品色谱图（略） 图4 康欣口服液样品色谱图（略） 图5 空白对照色谱图（略） 表4 淫羊藿苷对照品测定结果（略） 2.6 精密度实验精密吸取上述对照品溶液20 μl，重复进样5次，淫羊藿苷峰面积的RSD为0.459%。 2.7 稳定性实验取供试品溶液在0，4，8，12，16 h，分别进样20 μl，测得样品中淫羊藿苷峰面积的RSD为0.726%。 2.8 重现性实验按拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号 031011）分别制备5份供试品溶液，测得峰面积并计算含量，RSD为1.59%。 2.9 回收率实验采用加样回收法，取同一批号样品9份，每份10.0 ml，分别按样品中淫羊藿苷含量的80%，100%，120%加入淫羊藿苷对照品，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件测定。结果 见表5。 表5 回收率实验结果（略） n=6，实验结果表明，此方法可靠性良好。 2.10 样品测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，按上述色谱条件测定(n=3)。结果见表6。 表6 样品测定结果（略） 3 讨论 3.1 在鉴别丹参时，供试液的制备方法，曾比较了加醋酸乙酯和 乙醚萃取，相比较乙醚萃取提取效率较高；在选择展开剂时，比较了文 献报道的十几种展开系统并改变相应的比例［2，3］，发现以苯-醋酸乙酯-甲酸（12：5：0.8）为展开系统适合本方鉴别。 3.2 在鉴别地骨皮时，曾用环已烷醋酸乙酯冰醋酸（10?8?2）、环已烷醋酸乙酯冰醋酸（12?8?2）、苯-醋酸乙酯冰醋酸（12?7?2）、环已烷丙酮（10?3）、环已烷氯仿醋酸乙酯甲酸（12.5?1.5?7?2）为展开剂［3］，分离效果不理想，且阴性有干扰；经不断 调整后改为以环已烷醋酸乙酯甲酸（12?7?2）为展开剂，展开，取 出，晾干，置紫外灯365 nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应位置上，显相同颜色斑点，阴性对照色谱中无此斑点。分离结果较 理想。 3.3 原标准中含量测定以何首乌中的2，3，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷作为定量指标控制制剂的质量，但2，3，4，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄苷在水溶液中的稳定性不好，故改测淫羊藿 中的淫羊藿苷含量为制剂的质量控制指标，以淫羊藿苷为定量指标较原 标准方法准确性、稳定性及重现性均更好，可更有效控制康欣口服液的 质量。 3.4 目前，中成药中淫羊藿含量测定多以数是采用 HPLC法测定淫羊藿苷。在流动相的选择方面，曾采用甲醇0.025 mol/L磷酸二氢钠、乙腈水（7?3）、乙腈水（3?2）［4］，最终确定乙腈水（7?3）为本品含量测定的流动相。 参考文献： ［1］ 国家药典委员会.中国药典，?部［S］.北京：化学工业出版社，2000：37，附录VIB. ［2］ 国家药典委员会.丹参片质量标准修订草案［S］.中国药品标准，2002，3（2）：26. ［3］ 南京药学院《中草药学》编写组.中草药学［M］.南京：江苏人民出版社，1976：161. ［4］ 赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：376. 声明：版权归原作者所有，如果侵犯了你的版权，请第一时间和我联 系，我将立刻做出处理！！！