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辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G

2017-10-16 2页 doc 11KB 61阅读

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辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G 辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G 一、实验目的: 1、了解蛋白质纯化的基本技术; 2、学习辛酸—硫酸铵法纯化抗体的方法。 二、实验原理: 根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化,主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。本实验采用辛酸—硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体,纯度和回收率较高,且抗体活性不被破坏;同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备,不仅使用于小量抗体的纯化,也适合大批量抗体的制备。 三、实验材料试剂和器材: 1、实验材料:兔...
辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G
辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G 辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G 一、实验目的: 1、了解蛋白质纯化的基本技术; 2、学习辛酸—硫酸铵法纯化抗体的方法。 二、实验原理: 根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化,主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。本实验采用辛酸—硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体,纯度和回收率较高,且抗体活性不被破坏;同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备,不仅使用于小量抗体的纯化,也适合大批量抗体的制备。 三、实验材料试剂和器材: 1、实验材料:兔血清。 2、试剂:乙酸-乙酸钠缓冲液、10×磷酸盐-NaCl缓冲液、透析液、5 mol/LNaOH、0.1mol/L NaOH。 3、器材:电磁搅拌器、离心机、透析袋。 四、操作方法: 1、动物血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释,0.1mol/L NaOH调整血清稀释液pH至4.5。 2、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸(加入量为1L血清稀释液加25ml),滴加完 后继续搅拌30min。 3、离心(10000转/分,20分钟),收集上清液,弃去沉淀,上清液用滤纸过滤除去悬浮物, 量体积。 4、按照10%体积加入10×磷酸盐-NaCl缓冲液,用5 mol/LNaOH调pH至7.4。 5、上清液4?预冷10min,测量溶液总体积,在4?按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末(终浓 度达到45%饱和度),边加边搅拌,加完后继续搅拌30min。 6、离心(5000转/分,15分钟),弃去上清液,收集沉淀。 7、沉淀用少量透析液溶解(一般为原血清体积的1/10),透析并更换两次透析液。 8、透析后的抗体溶液在50,55?水浴中加热20min,离心(5000转/分,20分钟),上清液于-20?保存。
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