HPLC法测定喘舒胶囊中盐酸克仑特罗和黄芩苷含量

HPLC法测定喘舒胶囊中盐酸克仑特罗和黄芩苷含量 HPLC法测定喘舒胶囊中盐酸克仑特罗和 黄芩苷含量 CJCM中华实用中西医杂志2007年VOL.(20)NO.6.535.. HPLC法测定喘舒胶囊中盐酸克仑特罗和黄芩苷含量 Measuringhydrochloricclenbuterol andbaicalininChuanshucapsulebyHPLC 何秀清(山东省淄博淄川区中医院,山东淄博,2551000) 中图分类号:R9文献标识码:A文章编号:1607—2286(2007)06—0535—03 【摘要】目的:对喘舒胶囊所含的主要成分盐酸克仑特罗和黄芩苷进行含量测定.方法:采用高效液相色谱法分别对喘舒 胶囊中所含的主要成分盐酸克仑特罗和黄芩苷进行含量测定.结果:方法学考察结果明,本研究所建立的分析方法有较好的重 现性和稳定性;测定方法的平均回收率:盐酸克仑特罗为98.4%(RSD=0.98),黄芩苷为99.4%(RSD=I.41).结论:该方法简便, 快速,准确,可用于喘舒胶囊的质量控制. 【关键词】喘舒胶囊;盐酸克仑特罗,o黄芩苷 喘舒胶囊是由升华硫,大黄粉,盐酸克仑特罗和黄芩提取 物所加工制成的复方成药,具有温肾纳气,化痰定喘的功能, 用于慢性支气管炎,支气管哮喘,肺气肿,尤适于喘息型气管 炎.该制剂在质量标准中,采用理化鉴别法分别鉴定了盐酸克 仑特罗和黄芩提取物中的黄酮类化合物,盐酸克仑特罗含量测 定采用比色法测定,操作烦琐,容易引进误差.盐酸克仑特罗 和黄芩苷为本品中的主要有效成分,尤其是盐酸克仑特罗为选 择性较高的B受体激动剂,必须严格控制含量,本文研究了 通过HPLC法测定盐酸克仑特罗和黄芩苷的含量,能够更好的 控制该制剂的内在质量,从而保证临床疗效的稳定. 1仪器和试药 岛津高效液相色谱仪SPD一10AVP泵和LC一10AVP,紫外可 见分光光度计ZF—I型,电子天平(德国赛多利斯BP21ID); 超声提取器. 盐酸克仑特罗(淮南佳盟药业有限公司提供,含量? 98.5%),甲醇(色谱纯),冰醋酸,醋酸铵均为分析纯,水为 超纯水. 2盐酸克仑特罗含量测定 2.1试验方法 2.1.1色谱条件:色谱柱为ODSC18柱(4.6×250mm,5gm); 流动相:甲醇一醋酸铵缓冲液(pH6.0)(30:70),经0.45pm 滤膜过滤,脱气后使用,流速为lml/min. 2.1.2检测波长的确定:取盐酸克仑特罗对照品,配制成合适浓 度的溶液,在200~400nm光谱扫描,其最大吸收波长在 242nm,因此选用242nm为检测波长. 2.1.3对照品溶液的制备:精密称取经105~C干燥至恒重的盐酸 克仑特罗对照品18mg,置lOOml量瓶中,加适量水溶解并稀 释至刻度,摇匀,作为对照品母液.精密量取对照品母液1ml 置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得. 2.1.4供试品溶液的制备:取喘舒胶囊15片,除去糖衣,研细, 精密称取2.5g置50ml量瓶中,加乙醇40ml,超声处理30分 钟,取出,放冷,加乙醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液25ml 至蒸发皿中,水浴蒸干,残渣用适量水溶解,定容于5ml量瓶 中,滤过,即得. 2.2试验结果 2.2.1阴性空白试验:按处方比例和工艺制备阴性空白样品,按 供试品溶液的制备方法制备阴性空白样品溶液,测定,结果表 明,处方中其它药味无干扰(图1). 2.2.2线性关系考察:精密称取经105~C干燥至恒重的盐酸克仑 特罗对照品25.4mg,置250ml量瓶中,加水溶解并稀释到刻度, 摇匀,作为对照品母液.精密量取对照品母液4,5,6,7,8, 9ml到100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得. 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录vID) 试验,分别精密吸取上述对照品溶液各20BI依次注入高效液 相色谱仪,测定峰面积.结果见表1. 表l盐酸克仑特罗线性关系考察 以盐酸克仑特罗浓度(pg/m1)对盐酸克仑特罗峰面积值 进行线性回归,以对照品浓度为横坐标,峰面积值为纵坐标绘 制标准曲线,得回归方程为:Y=81614X+6370.9,相关系数 r=-0.9995.结果表明:盐酸克仑特罗进样量在4.06,9.14Bg/ml 范围内与峰面积呈良好的线性关系. 2.2.3提取时间考察:超声不同时间可能对盐酸克仑特罗提取率 有影响,因此按照上述条件分别超声10,20,30,40分钟, 制备成供试液,按照上述方法测定含量,结果见表2. 表2超声时间考察 结果表明,超声20分钟后含量基本稳定,为保证提取完 全,选用超声30分钟进行提取. 2.2.4精密度试验:依法制备供试品溶液,精密吸取20pl,重 复进样测定,测定6次,结果见表3. 结果表明,本法精密度良好. 2.2.5稳定性试验:依法制备供试品溶液,精密吸取20pl,每 隔一定时间进样测定一次,共测定8小时.结果见表4. 表4稳定性试验结果 一 536一ChineseJournalofthePracticalChinesewithModernMedicine2007VOL.(20)NO.6 结果表明,供试品溶液在4小时内基本稳定.试验中可以 观察到随着放置时间的延长,供试液会逐渐出现浑浊和沉淀, 影响含量的测定,因此本品暂定为样品处理后在4个小时内测 定. 2.2.6重现性试验:按前文所述"含量测定"方法,对同一批样 品分别制备6份供试品溶液,各吸取201al注入液相色谱仪, 测定.结果见表5. 表5重现性试验结果 结果表明,本法重现性良好. 2.2.7加样回收率试验:精密称取已知含量的样品(盐酸克仑特 罗含量31.0lag/g)6份,称取1.Og,精密称定,分别加入盐酸可 仑特对照品溶液lml(合盐酸克仑特罗31.2pg),依法操作, 测定含量.结果见表6. 表6盐酸克仑特罗回收率试验结果 结果表明:【口j收率在97%100%之间,加样收良好. 3黄芩苷含量测定 3.1仪器和试药:岛津高效液相色谱仪SPD一10AVP泵和LC一10 表7黄芩苷线性关系考察 AVP,紫外可见分光光度计ZF—I型,电子天平(德国赛多利斯 BP21lD);超声提取器. 黄芩苷(中国药品牛物制品鉴定所,含量测定用,10715— 2002l2). 3.2试验方法 3.2.1色谱条件:色谱柱:ODSCl8柱(4.6×250mm,51am). 流动相:甲醇一水一冰醋酸(40:60:1). 3.2.2检测波长的确定:取黄芩苷对照品溶液,在200~400nm 光谱扫描,其最大吸收波长在278nm,因此选用278nm为检测 波长. 3.2-3对照品溶液的制备:对照品溶液的制备精密称取在60? 减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每lml含 30lag的溶液,即得. 3.2.4供试品溶液的制备:取本品5片,去除糖衣,研细,精密 称取0.15g,加70%乙醇40ml.超声处理,放冷,滤过,滤液 置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液 滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀,精密量取lml, 置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得. 3.3试验结果 3.3.1阴性空白试验:按处方比例和工艺制备阴性空白样品,按 照供试品溶液的制备方法制备阴性空白样品溶液,测定,结果 表明,处方中其它药味无干扰.见图2.(图附后) 3.3.2线性关系考察:精密称取黄芩苷对照品l3.6mg,置50ml 量瓶中,加甲醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品储备液. 精密量取对照品储备液lml,1.5ml,2ml,2.5ml,3ml,3.5ml, 分别置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得. 照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID) 试验,分别精密吸取上述对照品溶液各201al依次注入高效液 相色谱仪,测定峰面积.结果见表7. 以黄芩苷进样浓度对黄芩苷峰面积值进行线性回归,以进 样量为横坐标,峰面积值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程 为:Y=46805344.5378X+220891.6238,相关系数r=-0.9995.结 果表明:黄芩苷进样浓度在l3.6pg/ml~47.6pgml范围内与峰 面积呈线性关系. 3.3.3提取时间考察:取本品5片,去除糖衣,研细,精密称取 0.15g,加70%乙醇60ml,分别超声处理(功率250W,频率 33kHz)10,20,30,40,50分钟,提取液放冷,滤过,滤液 置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液 滤入同一量瓶中,加70%乙醇刻度,摇匀.精密量取lml, 置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤 液20pl进样,测定其含量.结果见表8. 表8不同超声提取时问的比较 以上结果表明,超声20分钟后黄芩苷含量基本稳定,为 了保证提取完全,故确定超声处理时间为30分钟. 3-3.4精密度试验:精密吸取供试品溶液201al,重复进样测定, 测定6次,结果见表9. 表9精密度试验结果 结果表明,本法精密度良好. 3.3.5稳定性试验:精密吸取供试品溶液20111,每隔一定时间 进样测定一次,共测定8小时.结果见表l0. 表1O稳定性试验结果 结果表明,供试品溶液在8小时内基本稳定. 3.3.6重现性试验:按前文所述"含量测定"方法,对同一批样 品分别制备6份供试品溶液,各吸取201al注入液相色谱仪, CJCM中华实用中西医杂志2007年VOL.(2O)NO.6 测定.结果见表11.C:阴性空白图谱 .. 537.. 表l1重现性试验结果 结果表明,本法重现性良好. 3.3.7加样回收率试验:精密称取已知含量的样品(黄芩苷含量 187.66mg/g)6份,精密称定,分别加入黄芩苷对照品14.0mg, 依法测定.结果见表12. 表12黄芩苷回收率试验结果 结果表明:回收率在96%~102%之间,加样回收良好. 4讨论 盐酸克仑特罗又名克喘素,瘦肉精,在药品和食品中含量 控制非常严格,原标准中采用比色法测定含量,误差较大,采 用高效液相法测定较为准确,经过方法性考察,符合国家药典 对药物含量测定的要求.黄芩苷在含量测定中一般采用回流法 提取,重现性较差,本方法采用超声提取,各参数容易控制, 重现性较好. 液相附图1 A:盐酸克仑特罗对照品图谱 B:供试品图谱 附图2 A:黄芩苷对照品图谱 B:阴性空白图谱 编号:E一7050717(修回:2007—5—7)