大白鼠提睾肌血管中CGRP免疫反应神经纤维的分布道

大白鼠提睾肌血管中CGRP免疫反应神经纤维的分布道 第::卷第:期 西 安 医 科 大 学 学 报 / 9 : : Y/ 9 : : ’ ’ amp 年 V 月 WXLY7Z XI NS7Y KAgtS7Z LYSACSFT 764 9 : ’ ’ amp 大白鼠提睾肌血管中 quot 免疫反应 神 经纤维的分布 朱文侠 ，赵佐庆，张 玲 (第四军医大学唐都医院实验外科，西安 amp’’) 摘 要:目的 ( 研究大鼠提睾肌血管壁降钙素基因相关肽 -./0-0 1202342.25 626.-52，quot)免 疫反应性纤维的分布特点。方法 采用免疫组织化学 78 法对大 白鼠提睾肌动脉各级分支的 quot 免疫反应阳性纤维的分布特点进行观察和研究。 结果 大白鼠提睾肌动脉各级分支血管 一、 均有 quot 广泛分布， 二级动脉壁上 呈密集颗粒状分布，局部有密集的团块。三级以下除颗 且 粒状可见到横行或网格 状分布， quot 阳性反应纤维的密度随分支级别的增加而减少。在毛 细血管壁上仍 可见到网格状阳性纤维的分布。结论 quot 阳性纤维的分布可能与大鼠提睾肌 动脉 的生理调节和微循环有关。本研究结果为微循环的神经调节研究模型打下了形态学 基础。 关键词:降钙素基因相关肽;微循环;提睾肌动脉 中图分类号:amp 9 文 献标识码:7 ’:3’lt :’’amp) 文章编号: ( ’:3’amp’lt3’ quotquotamp’quot -./quot00’123quot41 quotamp1 quot 51 31021 21quot1 2 quot quot amp’ ，quot amp ， quotamp -amp quot gt264.20. / AB624-20. CD4124E，F015D G/H6-. / I/D4.J K--.4E K25- L0-M24H-.E， ’ amp’’， N- 0 J-0 6789-69::amp13quot41 F/ H.D5E 5-H.4-OD.-/0 / .J2 -./0-0 1202342.25 626.-523-D0/42.-M2 -O24H -0 .J2 42H.24 4.24-2H / .J2 4. 9 lt15 FJ2 5-H.4-OD.-/0 / .J2 -./0-0 1202342.25 626.-523-3 D0/42.-M2 -O24H -0 .J2 42H.24 4.24-2H J5 O220 H.D5-25 OE 20H / 78 .2J0-PD2 9 -1’gt FJ2 -./0-0 1202342.25 626.-523-D0/42.-M2 -O24H Q242 /OH24M25 /0 O40J2H / 42H.24 4.24-2H 9 FJ2 -D0/42.-M2 -O24H -0 -4H. 05 H2/05 O40J2H / .J2 4.24-2H 2BJ-O-.25 .J2 520H24 14-0H 05 520H24 HH， -0 .J-45 O40J2H， 02.Q/4R / .J2 -O24H QH /OM-/DH 9 FJ2 520H-.E / .J2 -D0/42.-M2 -O24H OD. .J2 425D25 //Q-01 .J2 O-D4.-/0H / .J2 4.24-2H 9 FJ2 02.Q/4R / .J2 -O24H H/ /D5 O2 /D05 -0 .J2 6-3 4E9 3gt’quot FJ2 42HD.H 52/0H.4.25 .J. .J2 5-H.4-OD.-/0 / -./0-0 1202342.25 626.-52 -3 D0/42.-M2 -O24H -1J. O2 42.25 ./ .J2 6JEH-//1- 421D.-/0 05 -4/-4D.-/0 / .J2 42H.24 43 .24-2H 9 S. /425 .J2 /46J//1- OH-H /4 2B624-20. /52 / 42H24J-01 024M2 421D.-/0 -0 .J2 -4/3 -4D.-/0 9 A B:-8:quot;-4/-4D.-/0;42H.24 4.24E 〔V， 有关研究表明血管生理活动除受经典 的肾上腺 对心肌细胞有保护作用 〕 脑、 。在心、 肺血管中， 乙酰胆碱能、素 能、 胺类及肽类等物质的影响外，许 quot 纤维有广泛的分布。随着神经微循环的 调 (如降钙素基因相关肽，多新发现的神经活性物质 神 节和血管损伤后的病理生 理改变研究的深入，人们 内皮素，经肽 T， 心钠素等)均可对血管的舒缩功能 发 现神经释放的血管活性物质的数量和功能及对 〔amp U 〕发生明显作用 ( 。其 中降钙素基因相关肽 -3 〔lt〕 血管的影响进一步增加 。提睾肌微循环实验动./0-0 1202342.25 626.-52 ， 是 quot ) 74 amp: 年首 物模型是目前微循环特别是神经 对微循环的调节次发现的， 为目前已知的最强的舒血管神经肽， 并 研究中最常用 者之一。但有关神经活性物质在此 处的分布研究尚未见报道。本文采用免疫组化技 院资助项目 (T’)作者简介:朱文侠(amplt3)女 ， (汉族)讲师 9 ， 术对大 鼠提睾肌微血管的 quot 阳性成份分布及 万方数据 6期 朱文侠，赵佐庆，张 玲 U 大白鼠提睾肌血管中 quot 免疫反应神经纤维的分布 ’2 特点进行了研究，为以后 深入研究神经对微循环的 素复合物及 145 呈色反应。每进入抗体前以 58 调节和 完善大鼠提睾肌模型在神经微循环的神经 震荡漂洗 amp :9D 后入温箱 72 F 孵育 7’ :9D，再置 调节作用打下基础。 冰箱 B F 过夜。用 58 和正常牛血清分别代替第 一抗体， 58 代替第二抗体， 45 免疫复合物 用 或 材料和方法 进行代替试验，以做对照。 quot 试剂 兔 多 抗 quot 抗 体( 使 用 效 价 quotamp 阳性神经纤维密度半定量计数 用交点计数 ， amp ’’’)由英国 -. 教授惠赠。生物素标 在 法， G ’ HI:JK 目镜下，计数与纤维长轴垂直 ( ， 记猪抗兔 /0quot 1-. 2’’)卵白素3生物素复合物 的任一 ’ :: 目镜网格线上纤维相交数量，每个(45 1-. 6’’ ) 7 73四 盐 酸 二 胺 基 联 苯 胺 ， 血管分支任选 7 个视野同法计数，取其平均值为本 为(145) 890:- 公司产品。 段血管神经纤维的密度。 quot 动物模型及组织处理 成年雄性大鼠 只， 结 果 ( 体质量 6amp’ 6’)0， 戊巴比妥钠腹腔注射麻醉 lt 后， 开胸经主动脉插管， 灌注 ’ lt 生理盐水 6’’ 灌注固定后的大白鼠提睾肌动脉，经染色后， :gt，冲洗血管内红细胞，再以 7lt 多聚甲醛3磷酸缓 quot 免疫反应阳性纤维呈深褐色， 纤维和膨体清 冲液 7’’ :gt 灌注固定 5 ’ : gt ， 2 B) ( ? A ， 晰完整，背景染色浅淡。阴性对照组未见特异性着 持续时间 7’ C B’ :9D。切开皮肤， 显露提睾肌，寻 色。 找提睾肌根部后，将整个提睾肌切下，于解剖镜下 在提睾肌血管表面可观察到 quot 免疫反应纤 分离分布到提睾肌上的动脉，从进入提睾肌根部动 ( 维 -L9MD9D 0NDN3ON-MNP NM9P39::JDON-LM9QN R9SNO， 脉发出的第一级分支开始，确定由其发出的第二级 quot3/T) 广泛分布于各级血管。在第一级小动脉 及第三级小动脉。部分标本将动脉剥下，部分标本 和第二级小动脉血管壁上 quot3/T 主要呈密集颗 以血管分支为中心将整个血管肌肉组织切下，去除 粒状分布 ， (图 )局部呈密集的团块状，且第二级动 表面肌组织暴露小动脉，做成组织铺片。所有标本 脉阳性纤维和颗粒较第一级动脉有所减少;至第三 置 Blt 多聚甲醛3磷酸缓冲液中后固定 6B E，以备免 级以下血管，quot3/T 进一步减少，除颗粒阳性反 疫组织化学染色使用。 应物外还可见到与血管长轴垂直的横行或网格状 quot 染色程序 按免疫组织化学 45 法操作，血 quot3/T。在 ’ 以下各段毛细血管壁上可见到 : 管和带血管组织铺片不做切片直接入甲醇双氧水 着色较淡分布稀疏的 quot3/T 与血管长轴垂直横 和 lt 正常牛血清封闭 E 后，依次入兔抗 quot 也可见颗粒及串珠状分布 行分布， 。在微动脉 (图 6) 血清、生物素标记的猪抗兔 /0quot 血清、卵白素3生物 分叉处 quot3/T 更为密集。 ( 图 第二级动脉分支 quot 免疫反应阳性纤维 quot) G 6B’ ( 图 6 毛细血管壁上的 quot 免疫反应阳性纤维 quot) G 6B’ 统也 分 布 有 丰 富 的 quot 神 经 纤 维。血 管 中 的 讨 论 quot 纤维明显高于心脏， 是一种已知最强的舒血 quot 是由 72 个氨基酸组成的神经肽，广泛分 管多功能生理调节肽，它直接作用于血管平滑肌而 〔2〕 布于中枢和外周神经中。有关研究表明心血管系 引起血管扩张，并不依赖于内皮的存在 。 万方数据 17 西 安 医 科 大 学 学 报 第 -- 卷 本实验中发现，提睾肌各级小动脉均有 quot 研究。本研究中 quot 在大鼠提睾肌动脉的分布免疫神经纤维广泛分布，分布密度随血管分支变细 特点为微血管神经调节的深入研究，打下一定的形而逐渐减少。提示 quot 对不同分支级别的提睾 态学基础。肌动脉的舒张能力不同。随着血管变细舒张作用 参考文献:减弱，与交感神经的缩血管神经纤维在细血管分布更密的现象相反。有研究发现，在肠系膜上动脉 〔1〕王 望，王 宪 4 降钙素基因相关肽超家族与高血压中，不同分支级别动脉 quot 免疫反应神经纤维的 -777 ( : 〔 5〕心血管病学 进展， ， 8)-89 6 6 -分布密度相同 〔〕 。而本实验中 quotamp’ 在提睾 〔-〕/:ltgt ，ABCDDB ，ltEgt F， 6 GHEI:BI gtBJltamp quot 〔 6 IltgtKEKKgt gt I:B ID ltIBltH L MgtM ltIK 5〕 Flt 5 :ltED，肌动脉中不同分支级别的密度随分支级别的增加 122N， : 6 11O OPO而减小的特点提示提睾肌血管中 quot 的分布与 〔O〕JDABltltH Q，quotEgtIB ，AltM 5， 6 DIgtgt MBgtBamp quot内脏血管中 quot 的分支分布规律有所差异，是否 〔 6 ltBDIBA BIAB gt ltACKJDlt IKKJBK L I:B ltI 5〕 RBJltamp与不同的血管床血液灌注有关，还有待进一步研 128 1N : KBgtB SBII， ，(O)2N9 6究。 〔N 〕Elt Gquot，5gtK T，KBgtLBDA quot， 6 DIBltgtICB R quot 对毛细血管壁上有无神经纤维分布尚有不同 ltBKKgtM gt DIgtgt MBgtB BUltBKKgt MBgtBltIBK ER BAamp看法，但在本实验中发现仅有一层到数层血管内皮 〔 6 gtM ALLBltBgtI DHBIAB ltAJIK 5 〕 RIJltB，12-，-2 有细胞的毛细血管壁上， quotamp’ 分布，提示神 : (891)-N7 6经纤维与血管内皮细胞的直接联系是存在的。研 〔8〕gtgtA ’ G，quotJltABgt 5，VgtABlt quotG， 6 ltACKJDlt gtA quot究发现， :ltEgtD BLLBIK L DIgtgt MBgtBampltBDIBA BIAB gt gtMBKICB quot 对包括呼吸、消化、骨骼肌、泌尿、生 〔 6 1221， : :BltI LDJltB 5〕 5 E DD ltAD， (1)-7 6殖等系统具有重要生理功能外， 对心血管则具有重 〔P〕Fltgt GW，VDDEK /5，/gtK 5， 6 DIgtgt MBgtBampltBDIamp quot要的生理调节作用。 quot 首先作用于内皮细胞 〔 6 BA BIAB K IBgtI CKADIlt 5〕 RIJltB， ， ( O) 128 O18 :上的受体， 过 途 径 增 加 细 胞 内 钙 离 子 浓 通 8N 6度，上调一氧化氮合酶产生一氧化氮。一氧化氮活 〔9〕TDDltltBD W，ltBBEgt X，TBltYJltM Q， 6 LLBIK L Damp quot化平滑肌内可溶性鸟苷酸环化酶，经环磷酸鸟苷通 〔 6 Igtgt MBgtBampltBIIBA BIAB gt ltBgtD YDA LDZ gt I:B ltI 5〕路活化蛋白激酶，后者作用于 - . amp/ 酶使细胞 12 1 : lt G U FD BA， ， (O)O1P 6内游离钙离子减少，舒张平滑肌。此外， quot 还 〔〕张成岗，苏慧慈，黄威权 4 成年大鼠肠系膜血管中 quot可通过前列环素活化 0 蛋白激酶途径，拮抗内 〔 6 免疫反应神经纤维的密度分布 5〕 解剖学报， ， 122P -9皮素 和 血 管 紧 张 素 的 释 放 发 挥 舒 张 血 管 作 : (O)-OO 6 〔1， 〔2〕石湘芸，姚松朝，杨 晔主编 4 血 管 活 性 物 质 与 临 床用 2 3 11〕 还发现 quot 对血管内皮细胞具有减少 ， 〔〕北京: 6 北京医科大学amp中国协合医科大学联合出版损伤和保护作用。此外， 包括前列环素、内皮依赖 社， 6 9P 3 27 6 122O性舒张因子等许多血管活性物质的合成与释放均 〔17〕汤 健， 〔 4 唐朝枢编著 4 循环系统的内分泌功能 〕 北可能受 quot 的作用和影响。本实验中的 quotamp 北 京: 京 医 科 大 学amp中 国 协 合 医 科 大 学 联 合 出 版 社，’ 在毛细血管上的分布，从形态学上提示 quotamp 122 6 -O 3 89 6’ 对血管内皮细胞具有调节功能。 〔11〕田 〔 4 牛主编 4 微循环基础与临床 〕 北京:人民军医 内皮细胞的损伤是微循环障碍的重要因素之 出版社， 6 1 3 11 6 12P 在正常血管和血管损伤后，一， .