CA199作业指导书2.0

            癌肿抗原199检测作业指导书 1.检验目的： CA19-9测定值由采用的相应单克隆抗体1116-NS-19-9决定。与1116-NS-19-9反应的决定簇存在于分子量为10kD的糖脂抗原上。此种粘蛋白属于一种Lewisa血型决定簇的半抗原。许多粘膜细胞含有这种成分。 有3-7%的人群呈现Lewisa阴性/b阴性血型结构，不达含CA19-9决定簇的粘蛋白。这一点必须在解释检测结果时考虑进去。这种粘蛋白出现在胎儿的胃、肠和胰腺上皮组织中。成人组织如肝、肺和胰腺也可含有低浓度的该种粘蛋白。 CA19-9测定有助于胰腺癌（敏感性70－87％）的鉴别诊断和病情监测：测定值高低与肿瘤大小无关，但是血清CA19-9水平高于10000U/ml时，几乎均存在外周转移。CA19-9测定不能用于胰腺癌的早期发现。 对于肝胆管癌，CA19-9测定值提供50－75％诊断敏感性。对于胃癌，建议做CA72-4和CEA联合检测。对于结、直肠癌，只做CEA检测已足够，少数CEA阴性病例，CA19-9检测能起作用。 由于粘蛋白主要从肝脏清除，某些患者轻微的胆汁郁积便可导致血清CA19-9水平明显升高。CA19-9升高也见于胃肠道和肝的多种良性和炎症病变，以及Cystic fibrosis。 2.检验原理: 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：10μl标本、生物素化的抗CA19-9单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗CA19-9单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 3.性能参数： 3.1 线性范围：线性检测结果见CA199方法学验证记录。 3.2精密度:批内n=20,批间n=20。 批  内 批  间 均值U/ml SD U/ml CV% 均值U/ml SD U/ml CV% 6.359 0.1237 1.95 23.77 0.533 2.24 3.3准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。 3.4 可范围:0.600-10000 U/ml，最大稀释倍数为10倍。 3.5 测量区间：血清/血浆: 0.600─1000 U/ml。 对高浓度样品可以用重做功能予以确定，或用罗氏通用稀释液手工直接稀释后或在机稀释后测定。 3.6 灵敏度：0.600U/ml 3.7特异性：无 4. 样本要求 4.1血清：按标准常规方法采集。 4.2血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。 4.3标本在2－8度可稳定2天，-20度可稳定6个月。只能冻融一次。 4.4含沉淀的标本使用前需离心。 4.5标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 5.试剂和设备： 5.1 设备：COBAS6000组合模块E601 （1）检查供水系统是否正常。 （2）检查试剂盖是否松开。 （3）接通仪器左侧上方电源按钮,仪器自检。 （4）登录：输入用户名及密码，仪器初始化，进行自动维护，然后进入Stand by状态。 5.2 试剂厂商：罗氏诊断产品公司 5.3试剂及使用前准备 （1）试剂成分： M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗CA19-9单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度3mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.5。含防腐剂。 R2：Ru(bpy)3 2+标记的抗CA19-9单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml，浓度4mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.5。含防腐剂。 （2）试剂准备：     检查各种试剂所需使用的试剂量 （3）试剂贮藏要求： 存放在2－8度，切莫倒置。 未开封，可稳定至标明的保质期。 开封后，2－8度12周； 放在COBAS6000上，8周； 注意：仅供体外诊断使用；避免皮肤直接接触液体试剂；废弃物按生物危害垃圾处理。 6.校准程序： 6.1校准品：罗氏COBAS6000原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。 复溶：用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装200μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。 复溶后校准品成分的稳定性：2-8℃储存。稳定性：未打开，2-8℃有效期内均可打开后，2-8℃下： 12周上机，20-25℃： 只可使用一次（不可反复冻融）。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：   ⑴试剂批号改变   ⑵根据质控需要进行校准 6.3 校准步骤： 6．3．1校准品的准备：从-20℃冰箱中取出一个分装的校准品，室温放置使其完全溶解，并颠倒混匀备用。 6．3．2起始定标：进入Calibration，点击Status，选择该项目的定标方式（FULL），点击Save，按在Calibration画面下的Installation界面设置好的标准物放置位置装载好相应的定标液，再点Start按键，仪器开始定标； 6. 3. 3重复定标：进入Calibration，点击Status，选择该项目的定标方式（FULL），点击Save，按在Calibration画面下的Installation界面设置好的标准物放置位置装载好相应的定标液，再点Start按键，仪器开始定标； 6. 3. 4看定标结果：进入Calibration，点击Status，点击相应的项目，点Calibration result，查看反应曲线。 6. 3. 5校准原始结果的记录：每天校准过的项目原始光子数的值及曲线图保存在<罗氏COBAS6000项目校准记录>中。 6. 3. 6每次做校准后，测定罗氏正常值或病理值质控，如质控在控则校准通过，可开始临床样品检测，如果质控失控，则参照《室内质量控制管理程序》处理。 7.操作步骤： 7.1输入样本，进入Workplace，点Test Selection 7.1.1输入常规样本，选Routine，选择样本类型、输入序列号或样本号，可选择稀释倍数，选择项目，只编辑一个样本则点击Save键即可；如批量输入做相同项目的样本，则点Repeat，输入需要检测的样本总数，点Save，在Start的当前界面（start samper no.）输入该批样本起始号，回车，再点Start； 7.1.2输入急诊样本，选Stat，输入急诊样本架、样本编号，选择项目，Save，将标本放入急诊进样位（急诊架条形码面朝向外侧），点Start；如果仪器此时在Operation状态则不需要执行Start操作。 7.2 结果查询及传输： 7.2.1结果查询：进入Workplace，点Data  Review，选择要看的样本号，可看到该 样本所做的项目和结果，点Reaction Monitor可看到相应项目的反应曲线。 7.2.2结果传输：进入Workplace，点Data Review，选择要传输的实验号，按Sent to host,再按sent,结果即可传输。 7.3结果打印：进入Workplace，点Data Review，选择要打印的实验号，按Print,再选择要打印的数据类型,再按Print,结果即可打印。打印结果作为原始记录保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 7．4参数：     吸液参数                Diluent(罗氏通用稀释液) 样本量                10μl            方法                    电化学发光法 反应时间                18分钟 反应温度                常温 8. 质量控制： 8. 1 Precicontrol Tumor Marker1罗氏正常值质控Precicontrol Tumor Marker2罗氏病理值质控，按说明书要求保存于冰箱中。 复溶: 用移液管准确吸取3ml去离子水于瓶中，静置，然后倒置小瓶，放置1小时后按要量(约400ul)分装作好标识保存于-20℃,在复溶后稳定期内使用。 8．2 将质控品从冰箱取出放置室温平衡15分钟,摇匀后按未知血清标本进行测定，在做临床标本3-5个以后检测，每个工作日测定一次，若当日无此检测项目则不需要做质控。测定后将结果录入室内质控软件中。 8．3质控：13s，22s。（参照《室内质量控制程序》）。当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理。 9.干扰和交叉反应： 该方法不受黄疸（胆红素<66mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.2g/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素<100ng/ml干扰。接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。27种常用药物经试验对本测定无干扰。 CA19-9浓度高达500000U/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。Elecsys CA19-9 测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 10.计算：对每一个标本，仪器会自动计算CA19-9含量，单位是U/ml或KU/l。 11.生物参考区间： 27U/ml（第95%位数） 34U/ml（第97.5%位数） 39U/ml（第99%位数） 12. 结果解释： 1）胰腺癌，胆囊癌，胆管壶腹癌时，血清CA19-9水平明显升高，尤其是诊断胰腺癌其敏感性为70%~95%，特异性为72%~90%，是重要的辅助诊断指标。 1) 胃癌阳性率约为50%结肠癌阳性率约为60%肝癌的阳性率约为51%。 2) 急性胰腺炎，胆囊炎，胆汁淤积性胆管炎，肝硬化，肝炎等疾病，CA19-9也有不同程度的升高，注意与恶性肿瘤的鉴别。 3) 已经接受了小鼠单克隆抗体制剂用于诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人抗鼠抗体（HAMA）。由于一些试剂盒采用小鼠单克隆抗体，用这些试剂盒检测上述样本时，就会得到错误的升高或降低的值。 12.警告/危机值：无 14.生物安全防护： 操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。试剂,校准液等,通过了HIV及HCVAg指标检测呈阴性（FDA推荐方法），但是仍应按可传染方式进行生物安全防护。 15.变异的潜在来源： 16. 已检样本的保存：2~8℃保存分离血清/血浆样本7天。样本容器上应标明条码、日期和标本类型等信息，以保证和原始样品有良好的溯源性。