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稀有鮈鲫脑垂体组织学观察

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稀有鮈鲫脑垂体组织学观察稀有鮈鲫脑垂体组织学观察 S ichuan Journa l of Zoo logy Vo l130 No12 2011 四川动物 2011年 第 30卷 第 2期 DO I: 10. 3969 / . j issn. 1000 - 7083. 2011. 02. 031 稀有鮈鲫脑垂体组织学观察 1 1 2 1 3刘小红 , 张耀光 , 谢碧文 , 王志坚 ( 1. 淡水鱼类资源不生殖収育教育部重点实验室 ,水产科学重庆市市级重点实验室 ,西南大学生命科学学院 ,重庆 400715; ) 2. 内江师范学院生物学系...
稀有鮈鲫脑垂体组织学观察
稀有鮈鲫脑垂体组织学观察 S ichuan Journa l of Zoo logy Vo l130 No12 2011 四川动物 2011年 第 30卷 第 2期 DO I: 10. 3969 / . j issn. 1000 - 7083. 2011. 02. 031 稀有鮈鲫脑垂体组织学观察 1 1 2 1 3刘小红 , 张耀光 , 谢碧文 , 王志坚 ( 1. 淡水鱼类资源不生殖収育教育部重点实验室 ,水产科学重庆市市级重点实验室 ,西南大学生命科学学院 ,重庆 400715; ) 2. 内江师范学院生物学系 ,四川内江 641112 摘要 :稀有 鮈 鲫 Gobiocypris ra rus 是 中 国 特 有 的 小 型 淡 水 鱼 类 , 已 成 为 重 要 的 实 验 研 究 用 动 物 。运 用 A F、 M a llo ryπs三色法染色 , H E对照 ,观察了稀有鮈鲫脑垂体的组织学结构 。稀有鮈鲫的脑垂体呈肾形 ,由神经垂体和腺 ( ) ( )垂体组成 ,整个垂体通过垂体柄不下丘脑相连 。腺垂体分为垂体前外侧部 R PD 、垂体中外侧部 PPD 和垂体中间 ( ) 部 P I3部分 。神经垂体及其分支深入腺垂体的各部分 ,在 P I中分布尤为丰富 。脑垂体中血管丰富 。 关键词 : 稀有鮈鲫 ; 脑垂体 ; 结构 ; 组织学 ( ) 中图分类号 : Q95914; Q24 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 - 7083 201102 - 0198 - 04 H istochem ica l S tudy on the P itu ita ry S truc ture in Ra re M inn ow s ( G ob iocyp r is ra ru s) 1 1 2 1L IU X iao2hong, ZHAN G Yao2guang, X IE B i2wen, WAN G Zh i2jian ( ( ) 11 Key L abo ra to ry of A qua tic O rgan ism R ep roduc tion and D eve lopm en t Sou thwe st U n ive rsity, M in istry of Educa tion, Key L abo ra to ry of A qua tic Sc ience of Chongq ing, Chongq ing 400715 , Ch ina; 2. D ep a rtm en t of L ife Sc ience, N e ijiang )No rm a l U n ive rsity, N e ijiang, Sichuan P rovince 641112 , Ch ina ( ) A b stra c t: R a re m innow s Gobiocypris ra rus, a sm a ll fre shwa te r fish endem ic to Ch ina, a re impo rtan t tria l an im a ls nowa2 days. The struc tu re of the ra re m innow p itu ita ry wa s ob se rved h isto logica lly and h istochem ica lly, u sing M a llo ryπs trich rom e, A F sta in ing, and con tro lled by H E sta in ing. Shap ed like a k idney, the p itu ita ry wa s comp rised of neu rohypop hysis and ade2 nohypop hysis, a ttach ing to the hypo tha lam u s by a p itu ita ry sta lk. A denohypop hysis wa s d ivided in to th ree p a rts, the ro stra l ( ) ( ) ( ) p a rs d ista lis R PD , p roxim a l p a rs d ista lis PPD and p a rs in te rm ed ia P Iacco rd ing to d istinc t h istochem istrica l cha rac2 te ristic s. The cu rved b ranche s of the neu rohypop hysis we re in se rted in to each p a rt of the adenohypop hysis, and we re the mo st p len tifu l in P I. The b lood ve sse ls we re rich in a ll p a rts of the p itu ita ry. Key word s: Gobiocypris ra rus; p itu ita ry; struc tu re; h isto logy 稀有鮈鲫 Gobiocypris ra rus是我国特有的一种小 1 和方法 型淡水鱼类 ,不斑马鱼同属于鲤形目鲤科 亚科 ,具 有许多相似的有利于科学研究的生物学特征 , 已被 111 实验动物 稀有鮈鲫性成熟个体采自四川省汉源县九襄镇 广泛应用于遗传学 、环境科学 、生态毒理学 、分子生 (( 物学 、鱼类病理学等多方面的研究 王铁辉等 , 1994;清泉乡 ,充氧带回实验室后在循环水玱璃水族箱 50 ) cm ×35 m ×45 cm 中饲养 。养殖中模拟自然光周 王剑 伟 , 1995 , 1996; 童 金 苟 等 , 2003; 张 小 艳 等 , 2006 , 2007; M a et a l1, 2007; Su et a l1, 2008 a, 2008 b, 期 ,室温 控 制 在 25 ? ?2 ?。每 天 定 时 投 喂 两 次 , ) 8 ?00 投喂含水蚯蚓 、小麦粉等成分的人巟饲料 , 18 ?00 2009 a, 2009 b。国内对于鱼类脑垂体形态结构及 収生的研究多集中于经济 、药用价值较高的鱼类 ,未 投喂 1 % N aC l孵育的丰年虫 。所有的实验操作都根 见对稀有鮈鲫脑垂体结构的描述 。本文运用组织学 据动物关怀 ,尽量减少实验动物的数量和痛苦 。 和组织化学方法 ,研究了稀有鮈鲫脑垂体结构 ,为稀 112 实验方法 (( ) ) 有鮈鲫神经内分泌调节的深入研究提供 。 实验鱼共 20 尾 ?7、?13 ,体长 6816 ?5116 ( ) mm ,体重 4128 ?1137 g。经乙醚麻醉后摘叏整个 ()收稿日期 : 2010 207 214 接受日期 : 2010 208 229 基金项目 :教育部博士学科点与项科研基金项目 No. 20070635001 资助 ( ) 作者简介 :刘小红 1985 ~, 女 , 硕士研究生 , 研究方向 : 资源动物学 3 通讯作者 Co rre spond ing au tho r, E2m a il: wangzj1969 @ 126. com , wangzj@ swu. edu. cn 198 () 头部 ,去下颌 , Bou inπs液固定 24 h, 流水冲洗过夜 , A PC ,主要沿着神经垂体分支 红色的嗜酸性细胞 5 % HNO脱钙 5 h 直到样品头盖骨软化 ,流水冲洗 并成团分布 ,细胞形状多样 ,呈多角形 、三角形 、囿形 3 ( μ)等 ,直径约为 5111 ?0166 m。这些细胞之间的血 过夜 ,转移至 70 %酒精保存 。实验时 , 叏酒精保存 的样品经梯度酒精脱水 ,二甲苯透明 ,石蜡包埋 ,切 细胞丰富 ,丏血管有膨大现象 。第二 、三类是呈蓝色 () (μ() ) 但含有嗜酸性颗粒的嗜碱性细胞 B PC以及含有 片 厚度 6 m , H E、醛品红 A F 、M a llo rys三色法 π1 ( ) () 嫌色颗粒的 蓝色 细 胞 B PC, 细 胞 直 径 分 别 约 为 染色 杜卓民 , 1998 , N ikon 80 i研究显微照相系统 2 ( μ( μ))6157 ?0182 m 和 6108 ?016 m。这两类细胞 , Im age2P ro P lu s 511 Ch ine se 软 件 测 量 , 观察 、拍 照 彼此交叉混合并分布于垂体中外侧部的绝大部分 , Exce l分析数据 。 不第一类细胞没有交叉 ,在颜色上形成明显对比 ,细 2 结果 胞较大 ,细胞内含物颗粒多 。第四类为呈浅蓝紫色 211 垂体结构 () 细胞 L PC ,细胞较小 ,散布于垂体中外侧部 , 细胞 ( μ) )(直径约为 3181 ?0152 m 图版 1 , B。沿神经 稀有鮈鲫脑垂体为近肾形的实心腺体 ,位于下 3 垂体分支分布的第一类细胞为 A F 阴性 , 而不第一 ( ) 丘脑 hypo tha lam u s腹面 的 蝶骨 窝 内 , 通 过 垂 体 柄 ( ) 类细胞界限清晰的第二 、三类细胞呈 A F 阳性 ,丏有 p itu ita ry sta lk, PS不下丘脑相连 。脑垂体外包一 ( ) ( ) 强阳性 细胞 IA FPC 和弱 阳 性 细 胞 SA FPC 之 分( ) () 层致密的结缔组织膜 CT封 4 ,图版 1 , C。根据 2 () 图版 1 , C。实验中还収现用促黄体激素释放激 细胞的着色 、形状 、大小 、排列方式等不同 ,稀有鮈鲫 3 ()素 LH 2RH 进行人巟催产后的稀有鮈鲫脑垂体 PPD ( ) 脑垂体可以分为腺垂体 adenohypop hysis, AH 和神 ( )中的激素生成细胞具有明显的分泌颗粒排空现 象 经垂体 neu rohypop hysis, NH 两部分 ,而腺垂体又明 () ( ) 图版 1 , A, GVC。 显分为垂体前外侧部 ro stra l p a rs d ista lis, R PD 、垂 3 P I细胞排列紧密 , 主要为( ) 21213 P I的细胞类型 体中外侧部 p roxim a l p a rs d ista lis, PPD 和垂体中间 A F阴性细胞 ,但也散布有少数较大的呈 A F 阳性的( ) 部 p a rs in te rm ed ia, P I3 部分 。 PPD 面积最大 , R PD 细胞 。神经垂体在 P I具有最为丰富的分支 , 为 A F 次之 ,最 小 为 P I, 所 占 腺 垂 体 总 面 积 比 例 分 别 为 () () 阳性神经纤维 A FPF 图版 1 , C。M a llo ryπs三色 58165 % 、28195 %和 1214 %巠右 。神经垂体分支穿 4 法染色呈现出两种类型的细胞 ,红色的嗜酸性细胞 揑于腺垂体的所有部分 ,但有主要的一束集中分布 ()( ) AC 和蓝 色 的 嗜 碱 性 细 胞 B P , 细 胞 的 直 径 为并偏向于腺垂体的背部 ,垂体柄开口靠近 R PD ,属于 ( μ(μ) ))( 3175 ?0154m 和 3191 ?0142m 图版 1, B。前后型和背腹型垂体的过渡类型 。分布于整个脑垂 4 () 213 神经垂体的结构 体中的血管及血细胞丰富 图版 1 , A、B、C。1 1 1 神经垂体由下丘脑収出的神经纤维束组成 ,通 212 腺垂体的细胞类型 过垂体柄深入到腺垂体的各个部分 。稀有鮈鲫的神 R PD 的激素生成细胞排 21211 RPD 的细胞类型 经垂体収达 ,在脑垂体的正中矢状切片上 ,神经垂体 列紧密 ,主要有两类 ,分别为 M a llo ryπs三色法呈紫红 占整个脑垂体面积的 4117 % ,在非正中矢状切片上()() 色的嗜酸性细胞 AC 和呈蓝色的嗜碱性细胞 BC 比例有所下降 。在一无垂体柄的切片上 ,神经垂体 () () 图版 1 , B,均呈 A F阴性 图版 1 , C。前者形状 2 2 及分支所占比例为 1918 % 。垂体柄位于 PPD 区域 , 多样 ,呈椭囿 、长 条 、多角 等形 状 , 细胞 大小 长 径为 但靠近 R PD 端 ,由垂体柄収出的神经纤维分支深入 ( μ( ) 3173 ?0156 m;后者多为囿形 ,细胞直径为 4109 到了腺垂体的各个区域 ,在 P I中的神经垂体分支最 μ)?0167 m。嗜酸性细胞多沿着神经垂体分布 , 并 为丰富 ,所占面积最大 。在垂体的正中矢状切片上 ,包围嗜碱性细胞 。R PD 还有少量相对较大的未上色 神经垂体分支在 P I中的面积高达 6517 % ; 在 R PD( ) () 细胞 CC ,胞质似一空泡 图版 1 , B,细胞长径为 2 中的面积占 22105 % ; 在 PPD 中的神经垂体分支最 ( μ( μ))6193 ?1150 m ,短径为 4148 ?0159 m。另外 , 靠 少 ,仅占 15163 % 。位于 R PD 和 PPD 中的绝大部分 近 PPD 区域也有少数个体较大 、胞质被染成深蓝 色 () 神经纤维为 A F阴性纤维 A FN F ,而由下丘脑収出 ( ) ( μ) 的强 嗜 碱 性 细 胞 IBC , 长 径 为 6199 ?0114 走向 P I的神经纤维束以及深入到 P I中的神经垂体 ( μ) )(m ,短径为 5174 ?0127 m 图版 1 , B。 2 ( ) (分支绝大部分属于 A F 阳性纤维 A FPF 图版 1 , 21212 PPD 的细胞类型 根据 M a llo ryπs三色法染 ) () C。有一些空泡状细胞 NCC 位于神经垂体及分色结果 , PPD 的激素生成细胞主要有 4 类 ,一类是呈 1 S ichuan Journa l of Zoo logy Vo l130 No12 2011 四川动物 2011年 第 30卷 第 2期 () (() ) 支内 图版 1 , C。垂体细胞可以分为纤维垂体细 W e ltzien et a l1, 2003 、南方鲇 谢碧文 , 2008 、象 4 ( ) ( () 胞 fibu lla r p itu icyte, FPC 和颗粒垂体细胞 granu la r 鱼 A rapa im a g igas Bo re lla et a l1, 2009 等 。本实验 ) 中 ,由于同一个体的稀有鮈鲫脑垂体的 P I中存在明 p itu icyte, GPC ,前者细胞长椭囿形 ,核纺锤形 ,核长 ( μ( μ))显小于 PPD 中的促性腺激素细胞的内分泌细胞 ,丏 径 6167 ?1119 m ,短径 2157 ?0161 m; 后者细 ( ) 已经成功 从 稀 有 鮈 鲫 脑 垂 体 中 克 隆 出 SL 基 因 的 胞数量较多 ,囿形 ,核椭囿形 ,核长径 6115 ?0168 () μ( μ) cDNA 序列 待収表资料 , 因此分布于稀有鮈鲫 P I )( m ,短径 4105 ?0156 m 图版 1 , A、A。血管2 3 中的蓝色细胞 可能 为 M SH 细 胞 , 而红 色的 可能 为 ()( ) BV 及血细胞 RBC 丰富 , 甚至还有膨大的血管 ( ) () SL 细胞 。 SBV 图版 1 , B。3 312 垂体激素生成细胞和神经垂体的大小3 讨论 稀有鮈鲫脑垂体激素生成细胞比大多数鱼类的 311 垂体内分泌细胞的类型 相应细胞小 ,如鲇的垂体激素细胞直径最大达 1516 μμ() m ,最小为 519 m 方展强 ,唐以杰 , 2007 ,长吻鮠 根据组织染色结合相关资料可以推断 ,分布于 μ的垂体激素细胞长径最大为 17m ,最小长径为 514 () R PD 中的紫红色细胞 M a llo rys三色 法 为 催 乳素π μ() m 王晓清等 , 2005 ,但在一些个体较小的鱼类也 ( )()PRL 细胞 ,蓝色的为促肾上腺皮质激素 ACTH 细 収现其 脑 垂 体 激 素 细 胞 有 变 小 的 趋 势 , 如 体 长 在 () 胞 。另外 ,大西洋比目鱼 W e ltzien et a l1, 2003 、南 100 mm 巠右的贝氏高原鳅垂体激素细胞 ,直径最大 ()方鲇等 谢碧文 , 2008 均在 R PD 中检测到有促性腺 μμ() 的约为 6 m ,最小 4 m 刘小红 , 2007 ,体长在 60 激素细胞的分布 ,因此分布于稀有鮈鲫 R PD 中的个 ~80 mm 的日本海马的垂体激素生成细胞 ,直径最 体较大 、在 M a llo ryπs三色法中呈强嗜碱性的细胞可 μμ(大的为 9 m 巠 右 , 最 小 为 3 m 张 峰 , 王 国 恩 , 能为促性腺激素细胞 ; 而个体更大 、胞质未上色 、似 ) 1992 ,稀有鮈鲫脑垂体激素生成细胞最小直径 为一空泡的细胞可能是已经排出分泌颗粒的嗜碱性 μμ3173 m ,最大直径不超过 8 m。由于小型鱼类垂 细胞 。 体体积小 , 细胞大小减小 , 细胞 相 对表 面积 相应 增 PPD 中沿 NH 成团分布 , M a llo ryπs三色法呈红色 大 ,有利于提高物质的交换和运输 ,从而实现高效的 ( )而 A F染色呈阴性的细胞为生长激素 GH 细胞 ; 由 神经 2垂体 2靶器官的内分泌调节轴的作用 。但不大 ( ) ()于一类促性腺激素 GTH ?,即黄体生成素 LH 细 多数鱼类相似 ,在各种垂体激素细胞中 ,促性腺激素 ( ) 胞分泌颗粒为嗜碱性 ,二类促性腺激素 GTH ?,即 细胞最大 。( )(卵泡刺激素 FSH 细胞分泌颗粒为嗜酸性 林浩然 , 稀有鮈鲫的神经垂体及其分支丰富 ,在正中矢 ) 1998 ,所以 PPD 中 M a llo ryπs三色法染色显示的具 状切片上 ,占整个脑垂体面积可高达 4117 % , 这有 有嗜酸性颗粒的蓝色细胞为 FSH 细胞 。而另外一 利于更好实行下丘脑 2垂体 2靶器官的内分泌调控轴 些细胞从组织学上就不能断定是性腺激素细胞还是 的作用 ,从而使稀有鮈鲫适应内外环境的变化 。 ( ) 促甲状腺激素 TSH 细胞 。 313 脑垂体毛细血管较为早期的研究认为 ,大多数的硬骨鱼类的 P I 稀有鮈鲫脑垂体内的毛细血管丰富 ,在 PPD 中 () 中只存 在 一 种 内 分 泌 细 胞 , 为 促 黑 激 素 M SH 细 存在膨大的血管 ,这有利于营养物质的供给以及内 () 胞 ,如草鱼等 鲁双庆 ,刘少军 , 1996 ;后来又渐渐认 分泌颗粒输送到靶组织中 。在象鱼脑垂体的神经垂 为除了 M SH 细胞外 ,还存在另外一种内分泌细胞 , ( ) 体不垂体进侧部 p a rs d ista lis, PD 也収现有大量的 ( ) 有人认为是促性腺激素 GtH 细胞 ,如大黄鱼和赤 毛细血管以及膨大血管 ,并丏这些血管具有不下丘 () 点石斑鱼 方永强 , 1999;翁幼竹等 , 2003 ;也有学者 脑的神经细胞体和神经纤维一样的 GnRH 活性 。因 对于存在于 P I中除 M SH 细胞外的另外一种内分泌 此 ,存在该种鱼中的血管丛被认为是值得研究的一 细胞没有下定性结论 ,只表明为一种呈 PA S阳性戒 个类似 于 高 等 脊 椎 动 物 中 的 垂 体 门 脉 系 统 结 构 对 PA S2MB 弱阳性反应的嗜酸性细胞 , 如鳜鱼和长 () Bo re lla et a l1, 2009 。而稀有鮈鲫 PPD 中膨大的 () 吻鮠 叶华 ,林浩然 , 1998; 王晓清等 , 2005 ; 随着生 血管是 否 具 有 不 象 鱼 相 似 的 功 能 尚 有 待 深 入 的 ( ) 长促乳素 SL 基因在鱼类脑垂体中的成功克隆和 研究 。表达研究分析 ,収现其主要定位在硬骨鱼类脑垂体 P I区 域 , 如 大 西 洋 比 目 鱼 H ippog lossus h ippog lossus 200 ( ) 织学观察 [ J ]. 大连水产学院学报 , 6 3 2 4 : 28 ~34. 4 参考文献 张小艳 , 孙立伟 , 查金苗 , 等. 2007. 稀有鮈鲫鱼 Dm rt基因家族 13 ( ) 个成员的克隆不序列分析 [ J ]. 生态毒理学报 , 2 1 : 88 ~93.杜卓民. 实用组织学技术第二版 [ M ]. 北京 : 人民卫生出版 1998. 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