色谱法和电位法在测定药物苯溴马隆离解常数中的比较

色谱法和电位法在测定药物苯溴马隆离解常数中的比较 色谱法和电位法在测定药物苯溴马隆离解常数中的比 较 化 学 世 界 色谱法和电位法在测定药物苯溴马隆离解常数中的比较 贾沪宁 。 陆 婷 , 于清风 ,倪坤仪” 中国药科大学: .分析化学教研室; .药学院,江苏 南京摘 要:离解常数是从 分子水平深入理解一些药物的吸收、体内分布以及代谢等研究的一个重要参 数。以苯溴马隆为样品,对色谱法在药物离解常数中的应用进行了考察,并与 经典的电位法进行了 详细的比较和分析,还对毛细管电泳法、电位滴定法进行了优化和改进。 关键词:离解常数;苯溴马隆;色谱法; 薄层色谱;高效液相色谱;毛细管电 泳;电位滴定 中圈分类号: . ; 文献标志码: 文章编号: ? ? ~? , ,,。 : .. , , : ,.. , . .: ; ; ;?? ; ; 简单而准确的用来测量 ,此法是基于样 离解常数是药物的重要理化参数之一,是影响 品电解质在不同 值的电解液中其对应的电泳迁 药物在体内的吸收、代谢过程及药理作用的重要因 移能力不同的原理。 素。测定离解常数对于新药研究开发、临床药学研 究和制定合理的工艺条件等有重要的指导意义 。 对于药物苯溴马隆的解离 常数的目前尚鲜见报 道,本文中分别采用上述介绍的色谱法及电位法测 电位测定法是测定离解常数最经典的方法,但是这 定了苯溴马隆的解离常数,并对各种方法进行了详 个方法受到样品和试剂纯度的限制,并且需要相对 细的分析和比较。 较高的样品浓度 。目前报道的可以用来测定离解 实验方法 常数的色谱法主要有三种: 薄层色谱 法是由 . 试剂与仪器 一首先提出 ,这种方法对样品浓度要 苯溴马隆由中国药科大学计生中心自制,所用 求不高,所用仪器设备也较简单; 高效液相色谱 试剂均为分析纯。 法也是用来测定 。值的一种方法,但是其准确度 两组不同甲醇一水比例的缓冲液,分别是: 不高 近几年高效毛细管电泳法也被看做是一种 收?日期: ? 修圊日期:? ? 作鲁筒介:贾沪宁,女,讲师,主要从事药物分析的科研和教学。: . 联系人第 期 化 学 世 界 邻苯二甲酸氢钾甲醇一水缓冲液、乙二酸和乙二酸氢 溶液,使 在每份溶液 中的浓度为 . 锂甲醇一水混合缓冲液 。/ 。 电位滴定法: ./ 溶液 控制溶液 取适量苯溴马隆加人到甲醇体积比例分别为 中离子强度 , .和 . /溶液,, , , / 的甲醇一水溶液中配 用邻苯二甲酸氢钾为基准物标定。 制成 . × / 样品溶液。同样加入薄层色谱 法:实验所需缓冲液的 范围 溶液,使在每份溶液中的浓度为 ./ 。 为 . ~ . 。 . 用 . / 柠檬酸和 . 分别用浓度为 . 和 . / 的 / 盐酸溶液混合配制; 在 . ~ . 的缓冲 溶液滴定苯甲酸和苯溴马隆溶液,滴定体积及 液用 . / 柠檬酸和 ./ 磷酸氢二钠溶 对应的 。 液混合配制。 对于一元酸来说: 高效液相色谱法:苯溴马隆 . / 甲醇。 一 一一 溶液。流动相:一系列不同 值的 . / 这里, 一是活度系数,可以根据的甲醇一水溶液 :/,其中. ~ 公式计算得到。 为加质子形成函数,定义为每个 . 用甲酸调节,. ~ . 再用乙酸调节。根 酸根 一或碱 上结合的质子数, 的值计算可依 据文献 ,流动相的离子强度恒定,为 . .。 据文献 。 高效毛细管电泳法:苯溴马隆 . / 甲醇 对每一滴定点的, “ 数据对作图,得到一 溶液。流动相:在甲醇的体积分数分别为%, 条曲线。在这条曲线上 一 . 点,对应的 值, ,,的甲醇一水混合溶液中 加入 即为 。 一值,进而可以计算出离解常数。 氢氧化钠,浓度均为 . / ,并用甲酸调节溶 . . 薄层色谱 法液的 值使得在 . ~ . 间。各溶液在运行前 取适量苯溴马隆溶于甲醇制成 ./ 的 均用 .的微孔滤膜过滤器过滤。 溶液,在不同 值薄层板上点样,分别于石油醚: 仪器: 乙酸乙酯 : 的展开剂中展开。挥干后,在波长 电位滴定法:一 型酸度计 上海伟业 为 的紫外灯下检测。 仪器厂 ,微量滴定管。 利用分配色谱的基本公式能够推导出的 广薄层色谱法:制备 薄层板,称取 关系式:。 青岛海洋化工有限公司 分别于值不同的缓冲液,搅拌后浸泡 , 然后调节悬浮液 ,一再瓦 的 值至缓冲液的原始 值,静置 ,至悬浮 这里, 是常数, 。是未离解酸的分配系数, 。是 液的 值不变。滤去多余的悬浮液使得剩余约 酸的离解常数 即可,研磨后铺板,室温下干燥 即得。 公式是一元酸的,曲线的关系式。在 高效液相色谱法:岛津仪, 曲线上,随着 增加, ,值趋于常数 . ,, 紫外检测器,检测波长 , 色谱 ,.。,示未解离酸的比移植。经过推导,当 ,值 工作站 浙江大学 ,大连依利特柱 × . 为 ’/ 一 ,’ 时,对应的 即为 。,故可以 ,流速为 / 。 从曲线 上得到 。。 高效毛细管电泳法: / 毛 . . 高效液相色谱法 细管电泳仪,其配有自动进样器和二极管阵列检测 对于每一个 值的流动相,苯溴马隆的保留 器;未涂层毛细管柱 河北永年光纤厂 ,内径 时间 和通过甲醇所测得的死时间。,都由三次实 ,总长,有效长度;压力进 样 ,运 验测定求平均值。 行电压 ,柱温 ?;负极检测,检测波长在 中,一元酸的表观容量因子志 与 解 离常数 关系如下: . 实验步骤 . . 电位滴定法 愚: 竺 毒 : 取适量苯甲酸加入到甲醇体积比例分别为 上‘ 一,, , ,/ 的甲醇一水溶液 这里, 一为离子的活度系数, 是中性分子中配制成 × / 样品溶液。另外 加入化 学 世 界 的容量因子,忌 一完全离子化离子 一的容量因子, 将 对 做线性回归即可得到 。 均为常数。 结果与讨论 从上式中可以看出,利用 数据处理软 . 电位滴定法 ‘ 件,将忌对 做非线性回归即可得到 。。 表 显示了苯甲酸在 / 的甲醇一水溶 . . 高效毛细管电泳法 液中的一组滴定值, 为加入的 的体积,毛细管在使用前分别用 . / 的氢 氧化钠 为待测样品溶液在每次滴入 后相应的溶液冲洗、再用流动相溶液冲洗。每 个 值。作 一 曲线,根据曲线得到 。值。.依次 条件的样品溶液重复测定 次求平均值。 再测得其他甲醇比例溶剂中的离解常数。则样品在 根据酸在电泳中的淌度表达式 和解离常数 水中的值可由一系列的不同比例混合溶剂中 。的定义,可得到以下关系式。回归得到。表 显示了苯甲酸和苯溴马隆在各 ~【 一 。 “ 一 ? 个百分比的甲醇一水混合物的值。经过线性回 归,水溶液中苯甲酸、苯溴马隆的值分别为 其中 为离子的活度系数; 是有效淌度; 为 . 和 . 。 完全解离的离子 的有效淌度,为一常数。 表 苯甲酸在% 的甲醇水溶液中的滴定数据 体积/. . . . . . . .. . .一 ... ........ . ? 如 加.. ......... 表薄层色谱法中苯甲酸和苯溴马隆在不同比例的甲 微量,所以样品的电离被抑制了。 醇 水混合溶液中的值 甲醇比例 / /苯甲酸的 。 苯溴马隆的 。 对于甲醇一水混合溶剂中 值的测定可用与 中测定水中 值标准相似的 方法,即用已 图 苯溴马隆的 ,一 曲线图 知 值的混合溶剂的标准缓冲液来校正 计 ,从而准确测得待测混合溶液的 值。但此 . 高效液相色谱法 法应用于电位滴定法中鲜见报道,故本文用已知离 为了测定苯溴马隆的 值,计算出流动相解常数的苯甲酸做验证,发现与文 献值相一致 , 值为 . ~ . 之间的所得的色谱图 见图 中的 说明此方法准确可行。 容量因子。再将容量因子对溶液 浓度利用非 活度系数是由离子强度决定的,但是加入氢氧 线性最小二乘拟合法,计算出值为 . 。 化钠之后离子强度改变。为了控制离子强度不变,我们在待测溶液中加入了 定量的氯化钠,其浓度需 。 远大于样品。一. 薄层色谱 法 ? 一囊 ; 在使用薄层色谱测定离解常数时,计算出每一 ; \ \ 一, ~一 / 块薄层板的 ,值,并对 值做曲线, /从 ? 曲线上可得 值约为 . 见图。 进而计算出 值为 ./ 一即 .图 苯溴马隆在不同 流动相中的色谱图 时,此时对应的 值 . 即为 。值。 . . ; . . ; . . ; . . ; . . ; . . ; . . ; . . ; . . ; . .薄层色谱 法测得的离解常数与电位滴定法 所测结果相差较大,这可能是由于溴苯马隆在水中 计算过程中发现,在. 时的数据不能采 的溶解度太小所致。同时,吸附在硅胶上的水也是 用,误差较大。这是由于此时样品完全成分子状态,