皮肤病理石蜡切片

皮肤病理石蜡切片 皮肤病理石蜡切片技术 随笔 概述 (1)修材 (2)固定 (3)脱水 (4)透明 (5)浸蜡 (6)包埋 (7)切 片 (8)摊片 ( 9 )烤片 (10)脱蜡 (11)脱苯(水)?蒸馏水 (12)染色 (13) 脱水 (14)透明 (15)封片 修材 一般修材不超过1.5× 1×0.2cm 但在实际工作 中，平均修材在1.0 ×0.5 ×0.2cm左右 比较: 我们修材的大小一般要比 口腔医院修的组织块小。大概 有黄豆粒大小。 原因: 口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大 小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。 注意:组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守 常规，一概而论。 固定 中性10,福尔马林 1h AF液 0.5,1h 比较: 增加了AF液，相对比我 们固定标本节约了约5个小时。 功能:?保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。 ?AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段， 缓冲组织的收缩。 注意:口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合 此种固定。 议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的 完整性，是否造成组织收缩程度加大, 脱水 95%乙醇 1-1.5h 比较: 3-4h ?我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。 ?无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。 无水乙醇? ?1.5h 无水乙醇? ?1.5h 功能: 脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。 注意:?水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。 ?无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过 长。 议:无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬, 透明 二甲苯? 二甲苯? 20min 20min 比较: 透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。 功能: 二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂(媒剂)目 的是为石蜡的浸入作媒介。 注意:二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过 长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进 行软化。 议:松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底,是否加长透明时间, 浸蜡 干燥箱温度65-70? ?1.5h 比较: 我们的干燥箱温度不稳， 在72-84?之间波动。 功能: 石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。 注意:干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困 难，不能制成理想的切片。 议:石蜡的厂家(物理性能)不同，是否影响浸蜡的时间和切 片, 包埋 比较: 包埋机进行～ 手工包埋，温度不宜掌握～ 注意: ?手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的 温度相同。 ?蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或 无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易 褶皱。 切片 切3?m厚度 单次切片 比较:4-5?m厚度，连续切片 LEICA(莱 卡)RM2235 切片机:LEICA(莱卡)RM 2255 单次切片的特点:组织片不易褶 皱 切片的时间较长 粘片的组织较少 摊片 水浴温度37? 每个玻片黏贴两个组织片 比较: 水浴温度不稳32-45 ?极 易造成组织片摊不开或张力过 大而裂开。由于我们是连续切 片，所 以玻片上的组 织片大 于四个。 烤片 烤箱温度55? ?1.5h 比较: 我们烤箱温度不稳，在82 ?左 右烤?1h。 功能:是组织切片能够与玻片粘在一 起，防止在染色过程中脱片。 注意: 烤片过程中温度不能过高， 防止烫伤组织。 脱蜡 二甲苯? 二甲苯? ?12min ? 12min 比较: 时间都在20min左右，基 本相同。 功能:二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。 注意:二甲苯脱蜡的 时间不能太短，已达到脱蜡彻底的 目的裨虿灰兹旧。ㄊ挥肴疽航岷希? 脱苯(水)? 脱苯(水)?蒸馏水 无水乙醇 95%乙醇 80%乙醇 70%乙醇 流水 冲洗 蒸馏水 2min 2min 数秒 数秒 反 酒 精 梯 度 95%乙醇 脱水 脱苯 1min 1-2min 洗 脱 苯 水水 95%乙醇 苯 脱 乙醇 染色 比较: 比较: 苏木素 流水冲洗 酸酒精(分化) 流水冲洗 5-10min 数分钟 数秒 ?2min 酸酒精具有脱色作用洗不彻底， 染色较淡。 氨水碱性，洗不彻底会影响伊红的亲 和力。 基本相同。 1%氨水(反蓝) 1min 流水冲洗 伊红 流水冲洗 充分 10s-1min 数分钟 注意:染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显 微镜下观为准，不能一概而论。 议:苏木素的不同是否影响组织染色的效果, 脱水 70%乙醇 80%乙醇 95%乙醇 无水乙醇 数秒 数秒 数秒 10min 我们梯度酒精不健全， 在无水乙醇中2min。 比较: 功能:脱去组织中的水分并对染片进行分化。 注意:脱水过程中也是对伊红染色的分化，所以在梯度酒精 中不宜过长。 透明 二甲苯? 二甲苯? 2min 3min 比较:我们略去此步。 功能:提高组织 片的折射率，增强组织片的质量。 注意:此步透明可以延长时间，提高组织片 镜下的“新鲜”度。 封片 中性树胶 中性树胶的处理:新买来看的树胶较粘稠，我们 可以用二甲苯 进行调和。 注意:封片树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖 玻片且树胶不 及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有 气泡。最后，粘贴标签 。 苏木素 Hematoxylin 分子式: 分子式:C16H14O6 分子量: 分子量:302.29 PH: 5.0-7.2(黄-紫) 中国医药公司 (10g) 10g) 上海化学试剂采购供应站(进 口分装) 石蜡的不同 口腔医院: 厂地:上海疑难病理会诊中心监制 上海华申康复器材厂 商标:衡永 熔点:56-58? 熔点:56-58? 商标:睛晶牌 熔点:55-59? 熔点:55-59? 省二院: 厂地:上海懿洋仪器有限公司 伊红(曙红Y) EosinY 配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同 种类的伊红。 市售的伊红有两种:一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红， 在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配 制得当，其效果非常好。 伊红 1g 70-75%酒精 70-75%酒精 100ml 先将伊红用蒸馏水(少许) 先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加 边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸， 加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片， 效果很好。 纯溶 水溶 苏木素(500ml ): 配方: 苏木素 2.5g 先把明矾 放入烧杯的蒸馏水中，加热煮沸溶解后关 掉电源。将苏木素溶于无水乙醇中， 搅拌溶解于烧杯内， 无水乙醇 50ml 再缓慢倒入500ml含明矾的水中煮沸3-5min溶解，等颜 色加深变为紫红色，拔掉电源。先加入少量的黄色氧化 蒸馏水 500 ml 汞，防止氧化过程中苏木素外溢，玻璃搅拌，然后，边 搅拌边加完氧化汞，充分氧化后，插上电源继续加热3钾明矾 50g 5min待颜色呈深紫色后应终止氧化。(立即遗至冰水中， HgO 1.25g 加速其冷却)静置一夜后，过滤加入冰醋酸。用前加入 冰醋酸后PH:2-2.28之间。如配好后时间较长，冰醋酸